颗粒细胞

摘要： 背景:卵巢颗粒细胞作为卵泡内主要的功能细胞,通过复杂的缝隙连接与卵母细胞进行细胞间的信息物质交流,调控着卵母细胞的生长与成熟;随着外泌体研究的深入,发现其积极参与了细胞间的通讯,并携带多种遗传物质,可通过自分泌或旁分泌方式被细胞吸收,调节细胞增殖,参与疾病生理病理过程。由此可见,卵巢颗粒细胞的外泌体分泌能力及提取鉴定对于研究女性生殖具有重要的意义。目的:探讨人卵巢颗粒细胞分泌外泌体的能力及不同来源人卵巢颗粒细胞外泌体之间的差异。方法:体外培养SVOG细胞(人卵巢颗粒细胞系)、KGN细胞(人卵巢颗粒细胞瘤细胞)、人原代卵巢颗粒细胞;采用超高速离心法分别从3种不同来源卵巢颗粒细胞上清中分离提取外泌体,通过透射电子显微镜、纳米跟踪技术、蛋白质印迹法分别鉴定其形态结构、粒径大小、阳性相关特异性蛋白CD63、TSG101及阴性标记蛋白Calnexin的表达。结果与结论:①SVOG细胞、KGN细胞、人原代卵巢颗粒细胞的细胞核均为圆形或椭圆形,核大,核仁部分蓝染,细胞浆呈淡红色;SVOG细胞、KGN细胞呈长梭形或多边形,形态不规则,人原代卵巢颗粒细胞多呈突起或梭形,细胞伪足细长,相互紧密交织;②3种不同来源人卵巢颗粒细胞免疫荧光均阳性表达FSHR,且阳性表达率>95%;③3种不同细胞上清液分离的外泌体均呈双层膜结构杯托样;④纳米跟踪分析SVOG细胞、KGN细胞、人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体的平均粒径分别为(183.5±4.9),(125.3±1.0),(171.1±2.0)nm,其中人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体的分泌水平最高,KGN细胞来源外泌体的粒径最小,SVOG细胞来源外泌体大小较接近人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体;⑤蛋白质印迹法检测显示3种不同来源卵巢颗粒细胞来源外泌体特异性相关蛋白CD63、TSG101均呈阳性表达,而Calnexin不表达;⑥结果表明,采用超高速离心法能够成功分离提取不同卵巢颗粒细胞来源外泌体,KGN细胞来源外泌体粒径最小,SVOG细胞及人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体粒径较接近,以人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体的分泌水平最高。

摘要： 背景:卵巢早衰是一种常见的妇科内分泌疾病,严重影响患者的生理、生育、心理健康,但目前针对卵巢早衰的治疗方法不能从根本上恢复患者的卵巢功能。间充质干细胞在各类疾病包括卵巢早衰的研究中展现出良好的治疗效果,已成为该领域的热点研究方向,且各项研究已经深入到探究其内在治疗机制。目的:总结并分析近年来关于间充质干细胞治疗卵巢早衰的研究进展,深入探究其存在的相关治疗机制,进而评估其应用于临床治疗的潜力,为间充质干细胞治疗卵巢早衰的进一步研究及临床应用提供理论依据。方法:以“间充质干细胞,卵巢早衰”及“mesenchymal stem cells,premature ovarian failure or premature ovarian insufficiency”分别作为中、英文关键词,在中国知网数据库及PubMed数据库对近年的相关文献进行检索,最终纳入符合要求的55篇文献进行综述。结果与结论:各类间充质干细胞对卵巢早衰的细胞、动物模型都有很好的治疗效果,具体机制包括间充质干细胞归巢作用、促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、分化、免疫调节、分泌多种细胞因子、调节细胞自噬和调节卵巢微环境等。除大量的基础研究,相关临床研究也已有序展开,但仍处于起步阶段,其安全性和有效性仍需要进一步加以验证。

摘要： 多囊卵巢综合征是育龄期妇女常见的一种复杂的生殖内分泌疾病,近年来研究发现PCOS的发病与微小RNA(miRNA)的表达异常有关,在PCOS患者的血液、卵泡液、颗粒细胞与脂肪组织中均发现了表达异常的miRNA.本综述通过讨论与PCOS有关的miRNA以及miRNA在PCOS发病中可能存在的作用机制,为PCOS提供新的诊断以及治疗思路.

摘要： 背景:卵巢早衰是一种常见的妇科内分泌疾病,严重影响患者的生理、生育、心理健康,但目前针对卵巢早衰的治疗方法不能从根本上恢复患者的卵巢功能.间充质干细胞在各类疾病包括卵巢早衰的研究中展现出良好的治疗效果,已成为该领域的热点研究方向,且各项研究已经深入到探究其内在治疗机制.目的:总结并分析近年来关于间充质干细胞治疗卵巢早衰的研究进展,深入探究其存在的相关治疗机制,进而评估其应用于临床治疗的潜力,为间充质干细胞治疗卵巢早衰的进一步研究及临床应用提供理论依据.方法:以"间充质干细胞,卵巢早衰"及"mesenchymal stem cells,premature ovarian failure or premature ovarian insufficiency"分别作为中、英文关键词,在中国知网数据库及PubMed数据库对近年的相关文献进行检索,最终纳入符合要求的55篇文献进行综述.结果与结论:各类间充质干细胞对卵巢早衰的细胞、动物模型都有很好的治疗效果,具体机制包括间充质干细胞归巢作用、促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、分化、免疫调节、分泌多种细胞因子、调节细胞自噬和调节卵巢微环境等.除大量的基础研究,相关临床研究也已有序展开,但仍处于起步阶段,其安全性和有效性仍需要进一步加以验证.

摘要： 目的观察水通道蛋白9(AQP9)对来曲唑诱导多囊卵巢综合征(PCOS)发病的影响。方法选取6周龄SD大鼠,采用来曲唑连续灌胃21 d构建PCOS模型,阴道涂片观察大鼠动情周期变化,记录大鼠体重变化,测量大鼠双侧卵巢质量,ELISA测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、雄激素、雌二醇和空腹胰岛素,葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖,观察卵巢形态组织学变化,免疫组织化学、Western blot检测AQP9定位及蛋白表达变化。结果与正常组比较,模型组大鼠体重和卵巢质量明显升高(P<0.05)。正常组有规律动情周期,而模型组大鼠规律动情周期消失。与正常组比较,模型组血清LH、LH/FSH、雄激素、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数水平均升高,FSH和雌二醇水平降低(P<0.05)。两组AQP9蛋白在卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞、黄体细胞均有表达,但主要表达在颗粒细胞;与正常组比较,模型组卵巢AQP9蛋白表达降低(P<0.05)。结论AQP9可能在PCOS大鼠卵泡发育障碍中起一定的作用。

摘要： 为研究原花青素B2(GSPB2)对猪颗粒细胞氧化损伤的保护作用,采用原代细胞培养的方法,建立H_(2)O_(2)致颗粒细胞氧化损伤模型,同时用不同浓度GSPB2进行干预。采用TUNEL方法检测细胞凋亡,利用荧光染色法观察细胞内活性氧(ROS)变化,使用比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,采用定量PCR方法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas、Puma、Sirt1的mRNA表达水平,应用Western blot方法检测衰老相关分子Sirt1、p16和p21蛋白水平。结果显示,200μmol/L H_(2)O_(2)处理12 h,可致细胞凋亡和ROS水平显著升高(P<0.05),SOD、CAT和GSH-Px活性下降,MDA含量增加;10μmol/L GSPB2能显著减轻H_(2)O_(2)所致上述状况;且进一步研究发现,GSPB2抑制Fas和Puma的表达,提高Bcl-2/Bax表达比例,上调Sirt1蛋白、下调p16和p21蛋白的表达。综上,GSPB2对猪颗粒细胞的氧化损伤具有保护作用,其机制可能与上调Sirt1蛋白、下调p16和p21蛋白表达,提高Bcl-2/Bax比值,抑制Fas、Puma表达有关。

摘要： 目的 探讨氧化应激对卵巢颗粒细胞自噬流的影响及活血消异方的干预作用。方法 提取大鼠原代卵巢颗粒细胞进行体外培养,过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导子宫内膜异位症氧化应激颗粒细胞模型,颗粒细胞培养箱孵育48 h后,分为未干预组、氧化应激组(H_(2)O_(2)组)、JNK抑制剂组、活血消异方含药血清组(中药组),分别加入完全培养基、10%正常大鼠血清、含800 nm SP600125的10%正常大鼠血清、10%活血消异方含药血清。自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染标记,倒置激光共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬流的变化。结果 mRFP-GFP-LC3感染复数(MOI)为100时,颗粒细胞感染效率高达87%,呈梭形铺开,生长状态良好,可用于后续实验。H_(2)O_(2)可引起颗粒细胞自噬体和自噬溶酶体数量减少,细胞皱缩,死亡增加,与未干预组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。JNK抑制剂组和中药组自噬体和自噬溶酶体均显著增多,与H_(2)O_(2)组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 mRFP-GFP-LC3对体外大鼠卵巢颗粒细胞的MOI为100。氧化应激状态导致卵巢颗粒细胞自噬流水平降低,细胞死亡增多,ROS-JNK介导这一进程,活血消异方可启动保护性自噬,减少颗粒细胞氧化应激损伤。

摘要： 【目的】探讨葡萄糖对绵羊卵泡颗粒细胞衰老及其基因表达的影响。【方法】将原代分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞分别用含17.5(H组)和2 mmol/L(L组)葡萄糖的培养基进行体外培养,细胞处理72 h后,利用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,采用RNA-Seq技术进行转录组测序,对差异表达基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,并用实时荧光定量PCR验证锚定蛋白重复域蛋白1(ANKRD1)、白细胞介素8(IL-8)、催产素(OXT)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)基因的表达量。【结果】H组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率极显著高于L组(P0.05),实时荧光定量PCR结果与转录组测序结果一致。【结论】17.5 mmol/L葡萄糖可诱导绵羊卵泡颗粒细胞衰老及衰老相关基因表达变化,为葡萄糖诱导颗粒细胞衰老的功能和分子机制提供了依据。

摘要： 目的探讨膜细胞对化疗损伤性颗粒细胞的影响以及左归丸含药血清的干预作用。方法制备左归丸含药血清,培养大鼠卵巢颗粒细胞和膜细胞,分8组,分别是(1)空白对照组;(2)共培养组;(3)ZGW血清组;(4)ZGW血清+共培养组;(5)模型组;(6)模型+共培养组;(7)模型+ZGW血清组;(8)模型+ZGW血清+共培养组。实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测Bax、Caspase-3、Beclin-1、p62、LC3B在转录水平和翻译水平上的表达。结果模型组的Beclin-1、LC3B、Bax及Caspase-3基因在转录水平及翻译水平上均有高表达,加入10%左归丸含药血清处理或与膜细胞共培养可下调上述基因的表达;p62基因的表达较对照组降低,加入10%左归丸含药血清处理或与膜细胞共培养可上调模型组p62基因表达。当实验组与膜细胞共培养时加入10%左归丸含药血清后,5种基因表达的变化程度更明显。结论膜细胞能缓解体外颗粒细胞的化疗性损伤,且与左归丸含药血清有协同作用,与抑制颗粒细胞自噬和减少其凋亡有关。

摘要： 为探究遮光处理导致家禽氧化损伤及繁殖障碍的机制,并阐明遮光调节卵泡发育的机理,本研究将30只体重及产蛋率相同的产蛋鸡随机分为遮光组、正常光照组和遮光+复合维生素组,遮光组使用遮光布覆盖鸡笼,将鸡笼内光强度降至零,而不影响通风和食物摄入;正常光照组未做其他处理,其光照程序为16h光照∶8h黑暗;遮光+复合维生素组用遮光布覆盖,并在饲料中添加200mg/kg的复合维生素。采用ELISA、CCK-8和Q-PCR方法检测3组蛋鸡处理7d后的情况。ELISA结果显示:与正常光照组相比,遮光组蛋鸡血清、肝脏、卵巢和颗粒细胞中卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)含量显著降低,孕酮(P4)含量显著升高。同时,与正常光照组相比,遮光组蛋鸡血清、肝脏、卵巢和颗粒细胞中活性氧(ROS)、总抗氧化(T-AOC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)以及8-羟基-2脱氧鸟苷(8-OHdG)水平均显著增加。CCK-8检测表明,与正常光照组相比,遮光组卵泡中颗粒细胞的增殖活性下降。Q-PCR结果显示,与正常光照组相比,遮光组卵巢组织和颗粒细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(BCL2)的表达水平显著降低,半胱氨酸蛋白酶3基因(Caspase 3)和抗氧化酶SOD2、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、CAT基因的表达水平显著增加。遮光+复合维生素组蛋鸡的以上指标与正常光照组基本无显著差异,表明遮光导致蛋鸡繁殖过程中的卵泡发育受阻是由氧化应激引起的。综上,遮光诱导的氧化应激通过各种途径影响蛋鸡卵泡发育,从而降低其产蛋效率。

摘要： 卵巢早衰是妇科疑难病之一,近年来,其发病率越来越高,且低龄化趋势明显.卵巢早衰发生的主要原因是是卵泡闭锁加快,而卵泡闭锁的实质是颗粒细胞的凋亡,所以颗粒细胞的状态已经成为衡量卵母细胞质量乃至胚胎发育能力的一个重要参考指标,因此对颗粒细胞的凋亡机制开展研究十分必要.本文总结归纳近年来相关文献,根据具体机制的不同,从调控颗粒细胞凋亡的相关基因,调节颗粒细胞的相关激素和参与颗粒细胞凋亡的细胞因子三方面进行综述.

摘要： 本研究通过体外培养颗粒细胞，在培养液中添加BMP15，利用qRT-PCR及ELISA法检测了BMP15对FSH受体（FSHR）以及雌激素（E）和孕激素（P）分泌的影响，结果表明，BMP15能够促进牛颗粒细胞FHSR的表达并影响相关激素的分泌，为探索BMP15对卵泡发育的影响及作用机制提供了理论基础。

摘要： 本研究通过分离猪卵巢中中等卵泡的颗粒细胞,以不同浓度的大豆苷元进行处理,并通过检测细胞培养基中固醇激素的水平及细胞中固醇激素合成关键基因的表达水平,来探讨大豆苷元对体外培养的猪颗粒细胞固醇激素合成的影响及其机制.结果发现,高浓度的大豆苷元会显著降低(P＜0.05)颗粒细胞活力.同时,不同浓度的大豆苷元均不影响(P＞0.05)颗粒细胞培养基中E2和P4的水平,但是均显著抑制了(P＜0.05)颗粒细胞中ER-beta和3-beta HSD的表达水平,且1和10μmol/L的大豆苷元还显著抑制了(P＜0.05)颗粒细胞中CYP19A1的表达水平.结果表明,在含有血清的培养基中加入大豆苷元,不影响E2和P4的分泌,但抑制了固醇激素合成关键基因的表达和ER-beta的表达,且其作用机制还有待进一步研究.

摘要： 通过近几年关于小鼠卵巢分泌雌二醇的文献研究,发现TGF-β家族在卵泡发育过程中起着极其关键的作用.TGF-β3特异性的表达在颗粒细胞上,并通过SF-1以及SF-1的一个新的结合蛋白,TGF-β超家族成员Smad3,介导雌二醇(E2)生成.同时,还发现TGF-β3可以通过核孤儿受体SF-1来调节雌激素合成的末端酶和限速酶Cyp19a1的表达。

摘要： 为建立更完善的绵羊颗粒细胞体外培养体系,比较不同培养体系下颗粒细胞的增殖与细胞中CYP19基因mRNA的表达水平.绵羊颗粒细胞培养体系分为4个组,即1组(DMEM/F12)、2组(DMEM/F12+10％FBS)、3组(DMEM/F12+10％FBS+Insulin-Transferrin-Selenium-X(ITS)和4组(DMEM/F12+ITS).结果表明:当绵羊颗粒细胞培养体系中没有血清时(1组和4组),ITS的存在可显著提高CYP19基因mRNA的相对表达量(P＜0.05),显著的高于有血清培养体系(2组和3组)(P＜0.05);随着培养时间的延长,2、3组CYP19基因mRNA的相对表达量明显降低(P＜0.01).结果提示,绵羊颗粒细胞体外培养时,培养基中的血清会显著降低CYP19基因mRNA的表达,在无血清培养体系中增加ITS添加剂则会增加并保持CYP19基因mRNA的表达水平.因此,在进行绵羊颗粒细胞体外功能研究时,采用无血清的培养基,并在其中添加一定量的胰岛素、转铁蛋白制剂是必要的.

摘要： 目的:研究补肾法对IVF-ET患者卵母细胞质量的影响及与卵泡液生殖激素及颗粒细胞上BMP15表达的关系.方法:将60例接受体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer IVF-ET)治疗的不孕症患者符合中医辨证,随机分为中药+控制性超排卵组(补肾药物组,20例)和单纯控制性超排卵组(对照组,40例).比较两组年龄、不孕年限、基础FSH水平、促性腺激素(Gn)使用天数及使用量、注射HCG日血清中E2、P、LH水平、获卵数、受精率、卵裂率、胚胎数、优质胚胎率和临床妊娠率.应用化学发光法检测卵泡液生殖激素FSH、LH、E2、P、PRL浓度.应用实时荧光定量PCR(realtimePCR)法和Western blot方法测定成熟卵泡颗粒细胞BMP15的表达.此外,按照妊娠结局分为妊娠组和未妊娠组,将上述指标进行比较.结果与对照组相比,补肾药物组优质胚胎率高于对照组,有显著性差异(P＜0.05);补肾药物组促性腺激素用量低于对照组有显著性差异(P＜0.05).妊娠组优质胚胎率高于未妊娠组,其差异显著,有统计学意义(P＜0.01)与对照组相比,补肾药物组卵泡液FSH浓度均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);补肾药物组卵泡液LH浓度明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).妊娠组卵泡液LH浓度明显高于未妊娠组,差别有统计学意义(P＜0.05).realtimePCR和Western blot法检测颗粒细胞上BMP15表达,与对照组相比,补肾药物组表达均增高,有显著性差异(P＜0.05);妊娠组高于未妊娠组,有显著性差异(P＜0.05),结论补肾法可以增加优质胚胎率提高卵母细胞质量,并且可以降低促性腺激素的用量.补肾法可以通过对BMP-15和FSH及LH的调节,实现提高卵母细胞质量的作用.

摘要： 目的：观察精卵孵育4h后早期去除颗粒细胞对受精和胚胎发育的影响以及早期补救ICSI的临床价值.rn 方法：将行常规体外受精—胚胎移植治疗患者的同周期卵子分为两组(除去完全受精失败以及受精率低下的治疗周期),精卵孵育4h后去除颗粒细胞组(1259个卵子)和孵育18h后去除颗粒细胞组(1201个卵子),比较两组的受精率、2PN率、多PN率、卵裂率以及优质胚胎率;对17例常规体外受精完全失败以及受精率低下的患者进行早期补救ICSI,观察妊娠结局.rn 结果：4h组的受精率、2PN率以及多PN率明显高于18h组(P＜0.05),而4h组的优质胚胎率明显低于18h组(P＜0.05);17例进行早期补救ICSI的患者中,11例临床妊娠,其中1例异位妊娠,剩余10例继续妊娠中.rn 结论：精卵孵育4h后去除颗粒细胞对受精和胚胎发育都有影响,但是早期补救ICSI却可以改善常规体外受精不良患者的临床结局.因此,需要对常规体外受精患者的受精结局做出预判断,才能减少早期去除颗粒细胞的不利影响,发挥早期补救ICSI的临床价值.

摘要： 卵细胞的端粒长度与胚胎的发育、凋亡有关，可以预测辅助生殖治疗结局。而颗粒细胞端粒缩短跟生殖老化及卵巢功能低下有关，可以推测，颗粒细胞端粒的长度可能可以用来间接反映胚胎质量并预测妊娠结局，因此可以在后续的研究深入探讨。目前，虽然辅助生育技术已获得许多突破性的进步，但是它的治疗效果还不大满意，特别是在多囊卵巢综合症、卵巢早衰及重复周期患者中，而欲改变这一现状，最重要的就是如何筛选高质量的胚胎进行移植以获得更满意的妊娠结局。卵巢颗粒细胞的端粒酶与端粒长度跟卵细胞、胚胎质量有关，并且能在一定程度上反映两者的生存状态，因此进一步研究两者在辅助生殖技术治疗后妊娠结局的价值具有广阔的前景。

摘要： FOXL2(Forkhead Transcription Factor)是FOX转录因子超家族的成员之一,是最早发现的哺乳动物卵巢分化标记,参与卵巢发育及卵巢细胞生长和增殖.人类临床中发现FOXL2突变可造成卵巢早衰(POF)和雌性不育,并且在小鼠中敲除FOXL2可造成成年小鼠的XX性反转现象.FOXL2在小鼠卵巢中的表达从胚胎期一直持续到成年期,并且在成熟卵巢的初级和次级卵泡颗粒细胞中表达.近年来研究发现,FOXL2对卵巢发育的许多过程均有重要作用,包括颗粒细胞分化、类固醇激素合成等方面.为了研究FOXL2在鸡成熟卵巢发育过程中的作用,构建了FOXL2在鸡卵泡发育各个阶段中的时空表达谱.综上所述，FOXL2在鸡卵泡发育的各个阶段中均有表达，并且主要表达在颗粒细胞中。因此推测，与在哺乳动物中的功能相似，FOXL2可能参与调控鸡卵泡发育的过程。

摘要： 本研究探讨子宫内膜异位症患者颗粒细胞INHA及FSHR mRNA表达情况,并分析其与IVF/ICSI治疗中卵巢反应的关系.结果表明，IVF/ICSI治疗的超促排卵周期中，卵巢的反应性与颗粒细胞INHA mR-NA表达水平有关;内异症患者的卵巢反应性明显低于卵巢功能正常的不孕患者，且内异症患者颗粒细胞INHA及FSHR mRNA表达水平显著低于卵巢功能正常的不孕患者，此可能是内异症患者卵巢反应低下的关键因素之一。

摘要： 本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种重编程成纤维细胞为类卵巢颗粒细胞的方法及其应用。通过高表达蛋白重编程成纤维细胞为类卵巢颗粒细胞（hiGC），并通过AMH报告系统和/或CD55卵巢颗粒细胞特异性标记分子，分选获得具有不同类固醇激素合成水平、对应不同卵泡发育阶段的hiGC。将为研究颗粒细胞的功能及其与卵母细胞的相互作用提供细胞模型，也将帮助我们了解和治疗颗粒细胞相关疾病，如多囊卵巢综合征及卵巢早衰，其类固醇激素分泌特性有临床应用潜能，该方法具有重要的基础及临床研究意义。

摘要： 本发明属于脂肪移植技术领域，具体涉及一种富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物及其制备方法和应用。该方法包括如下步骤：采用注射器手动负压抽脂后，将得到的脂肪离心获得脂肪层，再将脂肪层下层消化制得细胞悬液，上层推注得到用于移植的中间层，最后将细胞悬液与中间层混匀，即得到富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物。本发明的优点在于，该方法最终制得的脂肪移植物，与传统SVF‑gel相比得率更高，含有大量高活性的颗粒脂肪细胞、SVF‑cells及脂肪干细胞，这些细胞浓度是正常脂肪组织的5～10倍，移植脂肪存活率可以达到70％，移植脂肪质地更柔软均匀，出现油性纤维包块、纤维结节等不良反应的几率显著降低。

摘要： 本发明公开了一种利用颗粒细胞GRIM‑19相对表达量来评价卵母细胞发育潜能的方法，卵母细胞的颗粒细胞中GRIM‑19的相对表达量为0.16‑0.35时，判断得到的卵母细胞为高发育潜能的卵母细胞，当GRIM‑19的相对表达量为0‑0.12时，判断得到的卵母细胞为低发育潜能的卵母细胞，内参选用β‑肌动蛋白(β‑action)基因。本发明是一种较为客观、准确、可量化的卵母细胞质量评价方法，无创、且无需反复拿出培养箱观察，减少了不良环境刺激。由于本发明可量化，有具体的数值范围，操作容易，避免了因人为主观因素使判断标准出现不统一的问题。

摘要： 本发明实施例公开了一种人类卵泡卵丘细胞或/和壁颗粒细胞的细胞系及其制备方法，包括：将人类卵泡卵丘细胞或/和壁颗粒细胞分别进行第一离心获得第一固体；将梯度离心培养液加入到第一固体中，第二离心后分成三层，取所述三层的中间层加入磷酸盐缓冲液第三离心获得第三固体，后加入透明质酸酶溶液、裂解缓冲液，第四离心获得第四固体加入磷酸盐缓冲液第五离心获得纯化细胞，加入培养液中传代培养获得人类卵泡卵丘细胞或/和壁颗粒细胞的细胞系；培养液按体积份数计包括：α‑MEM或DMEM 100份；胎牛血清5‑15份；青链霉素0.5‑1.5份；促卵泡生长激素0.012‑0.02份；成功获得人类卵泡卵丘细胞或/和颗粒细胞的细胞系。

摘要： 本发明提供一种用于单细胞RNA测序的羊卵母细胞和卵丘颗粒细胞采集方法，通过对羊卵母细胞、卵丘颗粒细胞分别收集，可保证采样空间上的统一，无需整个卵巢研磨。收集后的卵母细胞和卵丘颗粒细胞可直接用于RNA提取或各种转录组高通量测序。与现有的采样绵羊整个卵巢进行RNA提取比较基因表达的方法相比，本发明的最大特点在于采样时空精准，可进一步提高卵巢采样用于分子试验的精确性。

摘要： 本发明涉及一种检测大气纳米颗粒和工业纳米颗粒细胞毒性差异的方法，步骤如下：a.用培养基配成细胞悬浮液，接种于细胞培养皿中，将培养皿置于培养箱中培养24小时；b.将配制的颗粒物溶液与培养基混合，配成染毒溶液；用D-hank`s平衡盐溶液清洗细胞；对细胞进行染毒，放入培养箱中培养4小时；c.加入DCFH-DA荧光探针与培养基的混合溶液，用锡箔纸密闭包裹，放入培养箱中培养0.5小时；d.在倒置荧光显微镜下观察荧光强度及荧光分布，并拍照；e.通过荧光分析软件处理图片得到初始数据并分析比较。本方法 细胞制片快速简单，原材料容易购买；细胞检测方法结果准确，影响因素较少，并可同时检测多种纳米颗粒；实验试剂安全可靠，没有较大的毒性。

摘要： 本发明公开了一种人卵母细胞‑卵丘颗粒细胞复合体的体外成熟培养液及培养方法。体外成熟培养液的组分为TCM199培养基+1‑20μMForskolin+10％SPS+100IU/mL青霉素+100μg/mL链霉素。体外成熟培养方法包括以下步骤：当优势卵泡达到18mm时，注射HCG体外促排卵，36‑38h后得到COC，将其转移到体外成熟培养液中培养4h，受精14‑18h，得到的受精卵转入胚胎培养液微液滴中培养2‑4天，得到胚胎。本发明的培养液和培养方法可以显著促进人卵子的成熟和抑制老化，提高囊胚形成率和胚胎的可移植数目，成熟率可达到76.1％，受精率达到78.9％，囊胚形成率达到64.1％。

摘要： 本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种重编程成纤维细胞为类卵巢颗粒细胞的方法及其应用。通过高表达蛋白重编程成纤维细胞为类卵巢颗粒细胞（hiGC），并通过AMH报告系统和/或CD55卵巢颗粒细胞特异性标记分子，分选获得具有不同类固醇激素合成水平、对应不同卵泡发育阶段的hiGC。将为研究颗粒细胞的功能及其与卵母细胞的相互作用提供细胞模型，也将帮助我们了解和治疗颗粒细胞相关疾病，如多囊卵巢综合征及卵巢早衰，其类固醇激素分泌特性有临床应用潜能，该方法具有重要的基础及临床研究意义。

摘要： 本发明公开了一种以Percoll为介质分离方斑东风螺颗粒细胞和透明细胞的方法，属于方斑东风螺血细胞分选技术领域。本发明的技术方案要点为：取15mL离心管，加入3mL体积分数为38%的Percoll溶液和2mL方斑东风螺血细胞悬液，在1300g 4°C离心45min，溶液分为上下两层和上下两层的交界层，再取一支新的15mL离心管，加入3mL体积分数为35%的Percoll溶液和1mL上下两层的交界面溶液，再次1300g 4°C离心45min，分别收集上层溶液和下层溶液，最终实现方斑东风螺颗粒细胞和透明细胞的分离。本发明分选过程简单、方便、易操作、特异性强且成本低廉。

摘要： 本发明属于脂肪移植技术领域，具体涉及一种富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物及其制备方法和应用。该方法包括如下步骤：采用注射器手动负压抽脂后，将得到的脂肪离心获得脂肪层，再将脂肪层下层消化制得细胞悬液，上层推注得到用于移植的中间层，最后将细胞悬液与中间层混匀，即得到富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物。本发明的优点在于，该方法最终制得的脂肪移植物，与传统SVF‑gel相比得率更高，含有大量高活性的颗粒脂肪细胞、SVF‑cells及脂肪干细胞，这些细胞浓度是正常脂肪组织的5～10倍，移植脂肪存活率可以达到70％，移植脂肪质地更柔软均匀，出现油性纤维包块、纤维结节等不良反应的几率显著降低。