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反向重复转基因不同位置侧翼序列诱导的基因沉默差异比较

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本研究分别在植物表达载体pRIR202(带有马铃薯Y病毒CP基因的反向重复结构)反向重复结构的上游、中间间隔区(Loop环)和下游插入一段GFP 5’端521bp的片段，成功构建了植物双元表达载体pRIR202UP、pRIR202MID和pRIR202DWN，并用冻融法导入农杆菌C58C1，采用农杆菌共侵润的方法注射本氏烟16C中，通过瞬时表达系统检测比较反向重复结构不同位置侧翼序列诱导传递性RNA沉默的差异。分别在不同时段运用实时荧光定量PCR检测GFP mRNA的相对累积量，插入基因位于反向重复结构的下游时诱导基因沉默的强度要比位于反向重复结构的上游和Loop环区的高，而且Western blot的结果与荧光定量PCR的结果一致，进一步证明注射含pRIR202DWN的16C植株沉默效果要比注射pRIR202UP和pRIR202M1D强，推测在反向重复的不同位置中，靶基因的3’端在RdRp的作用下优先降解，即在3个不同位置中下游最先发生沉默。本研究同时证明了GFP基因位于Loop环区也能诱导基因沉默，而且沉默强度比插入反向重复上游的序列引发的强，推测茎环结构的dsRNA在沉默体系中被Dicer切割后，Loop的端部仍然带有因降解产生的一段siRNA，可以在RdRp的作用下合成新的dsRNA，使Loop环区的序列也发生沉默。

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来源
《中国植物病理学会2010年学术年会》|2010年|508|共1页
会议地点厦门
作者
孔令产; 景茂峰; 公娇芬; 李向东; 竺晓平;
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作者单位

中国植物病理学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S432.22;
关键词
转基因植物; 核糖核酸介导抗病毒基因工程; 反向重复结构; 基因沉默; 侧翼序列诱导;

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