摘要:目的:本文以合成的N-琥珀酰壳聚糖硫辛酸(NSC-LA)为载体,紫杉醇(PTX)为模型药物,低密度脂蛋白(LDL)与一端经胆固醇修饰过的小干扰RNA(siRNA)形成siRNA/LDL复合物,制备siRNA/LDL偶联的N-琥珀酰壳聚糖硫辛酸载药胶束,LDL作为基因载体的同时作为靶向配体,使得LDL偶联的载药胶束具备主动靶向和被动靶向双重作用,能增加PTX的药敏性,而且由此构成的特异性肿瘤靶向聚合体能缓解解决多药耐药这一现象.rn 方法:(1)合成NSC-LA,通过1H-NMR表征其结构,将从人血浆中分离出的LDL与chol-siRNA共孵育制成siRNA/LDL复合物,制备共转运胶束PTX-siRNA/LDL-NSC-LA并表征,考察其粒径、形态和表面电势及胶束在不同介质中的释放特性;(2)利用体外溶血试验和MTT试验考察胶束的体外安全性;(3)考察了共转运胶束的细胞毒性、摄取动力学,siRNA的转染效果和mRNA水平和蛋白水平逆转耐药性研究.(4)建立皮下瘤模型,以DiR标记胶束,利用小动物活体成像技术考察胶束的体内分布.rn 结果:(1)通过红外光谱、1H-NMR和透射电镜结果表明共转运胶束已经成功制备.共转运胶束平均粒径为(171.6±6.42)nm,Zeta电位为(-22.52±0.47)mV,包封率和载药量分别为(93.92±1.06)%和(14.45±0.78)%.TEM照片显示胶束外观较圆整.聚合物胶束在具有还原性物质的酸性条件下更容易释放药物.(2)空白载体LDL-NSC-LA对肿瘤细胞及正常细胞毒性均较低.(3)与PTX和未修饰胶束相比,LDL偶联的胶束对两种肿瘤细胞毒性更强,共转运胶束的摄取速率更快.体外转染、RT-PCR和Western blot结果显示,共转运胶束能有效转染进入细胞并在mRNA水平和蛋白水平抑制耐药基因的表达.(4)小动物活体成像实验显示胶束对皮下瘤具有较好的靶向性.rn 结论:基因药物共转运胶束的制备工艺简单易行,方法稳定.LDL偶联的胶束对肿瘤细胞更具亲和力,能在肿瘤微环境作出pH敏感和还原敏感智能化响应,能有效转染siRNA进入细胞抑制耐药基因的表达,LDL作为基因载体的同时作为靶向配体,共转运基因和药物来治疗肿瘤.研究结果表明,LDL偶联的共转运胶束有希望作为有效的肿瘤靶向递药系统.