小反刍兽疫新型快速实用检测方法的建立及评估

声明

摘要

缩略语表

第1章 文献综述

1．1 小反刍兽疫概述

1．2 小反刍兽疫病原学特征

1．2．1 病毒的分类、形态与结构

1．2．2 病毒基因组的结构与功能

1．2．3 PPRV病毒的理化特性

1．2．4 培养特性

1．2．5 病毒的致病机理

1．3 小反刍兽疫的流行病学

1．3．1 分布和流行地域

1．3．2 贮存宿主和传播媒介

1．3．4 流行特点

1．3．5 症状和病变

1．4 小反刍兽疫的免疫防控

1．4．1 RPV异源弱毒疫苗

1．4．2 PPRV同源弱毒疫苗

1．4．3 基因工程疫苗

1．5 小反刍兽疫的检测技术

1．5．1 病料采集

1．5．2 病原学检测

1．5．3 血清学检测

1．5．4 分子生物学检测

第2章 小反刍兽疫血清抗体超敏荧光量子点免疫层析快速检测技术(QDs-LFIAS)的建立及评估

2．1 研究目的与意义

2．2 实验材料

2．2．1 细胞、毒株

2．2．2 血清

2．2．3 其它试剂与材料

2．3 实验方法

2．3．1 PPRV重组N蛋白抗原的制备

2．3．3 量子点侧向流动免疫层析检测体系(QDs-LFIAS)的构建

2．3．5 QDs-LFIAS的分析学特异性、敏感性及最低检测限(LOD)评估

2．3．6 田间样本检测

2．4 结果与分析

2．4．1 PPRV N蛋白鉴定及划线浓度的选择

2．4．2 水溶性羧基功能化量子点与SPG的偶联

2．4．3 QDs-LFIAS的检测低限(LOD)

2．4．4 QDs-LFIAS分析敏感性、特异性

2．4．5 田间样品检测

2．5 讨论

第3章 小反刍兽疫病毒双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法的建立

3．1 研究目的与意义

3．2 实验材料

3．2．1 病毒和细胞株

3．2．2 血清

3．2．3 实验动物

3．2．4 主要生化试剂及试剂盒

3．2 实验方法

3．2．1 PPRV N蛋白单克隆抗体的制备

3．2．2 抗PPRV特异性IgY抗体的制备

3．2．3 PPRV双抗体夹心ELISA方法的建立

3．4 结果与分析

3．4．1 PPRV N蛋白单克隆抗体的制备

3．4．2 PPRV特异性IgY的制备

3．4．3 PPRV双抗体夹心ELISA方法的建立

3．5 讨论

3．5．1 双抗体夹心ELISA方法(DAS-ELISA)

3．5．2 单克隆抗体

3．5．3 鸡卵黄免疫球蛋白(egg yolk immunoglobulin，IgY)

第4章 区分小反刍兽疫疫苗株与野毒株的实时荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法的建立及评估

4．1 研究目的与意义

4．2 实验材料

4．2．1 病毒与细胞

4．2．2 病毒核酸、生化试剂及试剂盒

4．2．3 引物和探针

4．2．4 临床检测样本

4．3 实验方法

4．3．1 小反刍兽疫疫苗病毒株基因组序列的测定

4．3．2 小反刍兽疫疫苗株病毒滴度的测定

4．3．3 病毒核酸的提取

4．3．4 PPRV实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和条件优化

4．3．5 PPRV实时荧光定量RT-PCR的特异性试验

4．3．6 PPRV实时荧光定量RT-PCR灵敏度／检测低限(LOD)试验

4．3．7 PPRV实时荧光定量RT-PCR的重复性试验

4．3．8 PPRV实时荧光定量RT-PCR的临床检测

4．4 结果与分析

4．4．1 小反刍兽疫疫苗株病毒基因组序列测定结果

4．4．2 筛选及优化PPRV实时荧光定量RT-PCR反应条件

4．4．3 PPRV实时荧光定量RT-PCR方法的特异性试验结果

4．4．4 PPRV实时荧光定量RT-PCR的灵敏度／检测低限(LOD)试验结果

4．4．5 PPRV实时荧光定量RT-PCR检测方法重复性试验

4．4．6 PPRV实时荧光定量RT-PCR方法的临床检测

4．5 讨论

第5章 结论

参考文献

致谢

附录

个人资料

教育经历

在读期间发表的主要文章