植物乳杆菌p-8亚油酸异构酶点突变体的构建和活性研究

缩 略 词 表

1 引言

1.1 共轭亚油酸简介

1.1.1 共轭亚油酸概述

1.1.2 共轭亚油酸的来源

1.1.3 共轭亚油酸的合成

1.2.1 亚油酸异构酶概述

1.2.2 亚油酸异构酶的来源

1.2.3 亚油酸异构酶的酶学性质

1.2.4 亚油酸异构酶的催化机理

1.2.5 亚油酸异构酶的克隆与表达

1.3 研究的目的、意义和研究内容

2 材料与方法

2.1 材料与设备

2.1.1 菌株与质粒

2.1.2 主要仪器微量高速离心机

2.1.3 主要酶和试剂DpnⅠ限制性内切酶

2.1.4 主要溶液配制

2.2 实验技术路线

2.3 试验方法

2.3.1 定点突变技术的简介

2.3.2 突变体的构建

2.3.3 突变质粒的转化及鉴定

2.3.4 目的蛋白的诱导表达

2.3.5 目的蛋白的SDS-PAGE检测

2.3.6 Western Blot

3 结果与分析

3.1 重组质粒PQE30-LAI质粒的提取鉴定结果

3.2 突变位点的确定

3.3 突变体的构建

3.4 菌落PCR的阳性鉴定

3.5 序列比对

3.6 基因突变前后LAI在大肠杆菌中的表达和酶活测定

3.6.1 共轭亚油酸含量标准曲线

3.6.2 突变体粗酶液酶活力的测定

3.6.3 蛋白质含量标准曲线的绘制

3.6.4 突变体粗酶液蛋白含量的测定

3.7 突变体诱导表达LAI的SDS-PAGE电泳检测

3.8 突变体诱导表达LAI的Western Blot检测

4 讨论

5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介