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乳制品中蛋白质RP-HPLC指纹图谱的建立及其在乳源分析和乳制品质量控制中的应用

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摘要

缩略语表

第一章 文献综述

1.1 引言

1.2 乳成分

1.3 乳蛋白

1.3.1 乳中主要蛋白质的组成、结构和功能

1.3.2 乳中蛋白质的分析方法

1.3.3 指纹图谱

1.4 本文的研究思路和研究内容

1.4.1 研究思路

1.4.2 研究内容

第二章 RP-HPLC分析乳蛋白方法的建立

2.1 引言

2.2 材料和仪器

2.2.1 试剂与样品

2.3.2 HPLC色谱条件

2.3.3 方法考察和优化

2.3.4 方法验证

2.4 结果与讨论

2.4.1 RP-HPLC分离牛乳蛋白

2.4.2 流速对乳蛋白RP-HPLC分离的影响

2.4.3 柱温对乳蛋白RP-HPLC分离的影响

2.4.4 乳蛋白RP-HPLC波长选择

2.4.5 乳蛋白RP-HPLC梯度选择

2.4.6 乳蛋白RP-HPLC方法验证

2.4.7 乳蛋白RP-HPLC线性考察

2.5 本章小结

第三章 牛奶、绵羊奶和山羊奶的蛋白质分析

3.1 引言

3.2.1 试剂与样品

3.2.2 仪器设备

3.3 实验方法

3.3.1 RP-HPLC分析乳样品中的蛋白质

3.3.2 SDS-PAGE电泳分析乳样品中的蛋白质

3.3.3 乳样品中总蛋白含量测定

3.4 结果与讨论

3.4.2 羊乳样品蛋白质RP-HPLC

3.4.3 SDS-PAGE电泳分析乳样品中的蛋白质

3.4.4 乳样品总蛋白含量测定

3.5 本章小结

第四章 乳蛋白指纹图谱分析

4.1 引言

4.2 材料和方法

4.2.1 试剂与仪器

4.2.2 牛乳蛋白指纹图谱分析

4.2.3 羊乳蛋白指纹图谱分析

4.2.4 牛奶粉掺假羊奶粉乳蛋白指纹图谱分析

4.2.5 乳样品主成分分析

4.3 结果与分析

4.3.1 牛乳蛋白指纹图谱分析

4.3.2 羊乳蛋白指纹图谱分析

4.3.3 牛奶粉掺假羊奶粉指纹图谱分析

4.3.4 乳样品主成分分析

4.4 本章小结

第五章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

参考文献

作者简介

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摘要

乳中的蛋白质是乳质量评价的重要指标之一,关乎着乳的营养价值,建立合理稳定的乳蛋白评价方法对于乳质量评价具有重要的意义。本论文通过反相色谱法建立了乳蛋白的指纹图谱,进而用来检测不同来源的乳中的蛋白质,对乳源进行差异性分析。
  首先,建立了反相色谱分析乳蛋白的方法。考察了柱温、流速、梯度、波长等对乳蛋白RP-HPLC分离的影响,对RP-HPLC分离乳蛋白的条件进行优选。对方法进行了重复性和精密度验证,重复性和中间精密度实验表明,峰保留时间RSD%分别在0.04%~1.36%和0.38%~1.33%;峰面积RSD%分别在5.22%~15.04%和8.27%~30.73%。线性拟合了五种乳蛋白标准品的标准曲线,R2在0.990~0.999之间。通过κ-CN、α-CN、β-CN、α-la、β-lgB五种乳蛋白标准品色谱峰的保留时间的测定,确定了牛乳样品中的主要蛋白质。
  其次,对不同来源的牛、绵羊和山羊奶蛋白质进行分析。对牛奶中的蛋白质进行RP-HPLC分析,通过乳蛋白标准曲线测定了牛乳样品中的五种主要蛋白质。对羊奶中的蛋白质进行RP-HPLC分析,以比较不同来源的乳蛋白各组分在种类或含量上的差异。进一步通过SDS-PAGE比较了不同来源牛、羊奶中蛋白质的分子量和含量,通过BCA法测定了牛、羊奶中总蛋白的含量。
  最后,分别建立牛、羊奶蛋白质的指纹图谱。进行乳蛋白指纹图谱相似度分析,六批牛乳间的相似度在0.981~0.998;七批山羊乳间的相似度在0.721~0.989;两批绵羊乳间的相似度在0.996;在掺入羊乳的牛乳掺假样品中,牛、绵羊、山羊乳样品与掺假乳样品的相似度在0.578~0.887。对不同来源乳样品中的蛋白质进行主成分分析,牛、绵羊、山羊三种乳样品归到三个大类;在同一大类中,不同来源蛋白质,各个样品点之间具有一定的分散。在掺入羊乳的牛乳掺假样品中,样品点的分布远离牛、羊乳样品的大类,可以鉴别出乳制品的掺假。
  综上所述,本论文建立了稳定的乳蛋白RP-HPLC分析方法,得到具有代表乳样品个体性和整体性的色谱图谱,通过指纹图谱技术对样品进行相似度和差异性评价,以此来建立特定乳源的指纹图谱,对乳制品进行评价。本方法为乳中蛋白质的检测提供了合理的技术手段,为乳源鉴别、乳质量评价提供了理论依据,并为企业建立特定品牌乳的指纹图谱打下基础。

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