低能离子诱变选育华根霉高产L-乳酸菌株的研究

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为了满足乳酸尤其是对L-乳酸的大量需求，不断地发掘自然微生物资源中的优良菌株并对其进行诱变育种工作尤为重要。本研究以一株产L-乳酸的野生型华根霉(Rhizopuschinensis)为出发菌，对该菌株适宜产酸的条件进行了研究，然后以10kev氮离子对出发菌L-乳酸产率进行诱变，以期获得高产的L-乳酸菌株。同时为了比较出发菌株和突变菌株在分子水平的差异，利用108条RAPD随机引物对出发菌株和突变菌株进行了RAPD比较分析。主要研究结果如下： 1.出发菌华根霉适宜产酸的条件为：葡萄糖90‰、(NH4)2SO42‰、KH2PO40.6‰、MgSO4·7H2O0.25‰、ZnSO4·7H2O0.05‰、CaCO350.0‰pH值自然，接种量在5％左右，34℃，200rpm的培养条件下，可获得较高的L-乳酸产量(28.8g/L)。 2.选用能量10kev的N+离子，注入剂量为0.26×1015ions/cm2～2.86×1015ions/cm2对出发菌进行诱变，存活曲线与文献报道的“马鞍型”曲线基本符合。注入诱发高产L-乳酸突变的适宜剂量为1.30×1015ions/cm2。筛选获得的突变株RC-H13L-乳酸含量为33.7g/L，比出发菌株提高17％。经多次传代表明该菌株遗传稳定性较好。 3.利用108条随机引物对出发菌株和突变菌株进行了RAPD比较分析，83条引物在两池具有扩增产物，其中3条引物(S193，S271，S382)在两池间表现多态性，有多态性扩增的引物频率为2.78％，且多态性稳定，重复性较好。 4.选择其中2条(S193，S271)差异性片段进行克隆和测序，用BLAST程序在NCBI上进行比对，发现S271引物所扩增的序列部分与稻瘟病菌假设蛋白(Magnaporthegriseahypotheticalprotein)的序列有86％的同源性，与烟曲霉(AspergillusfumigatusAf293)DNAreplicationlicensingfactor具有79％的同源性。S193引物所扩增的序列经比对未发现有相似序列。

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作者
周小楠;
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作者单位

安徽农业大学;

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授予单位安徽农业大学;
学科生物物理学
授予学位硕士
导师姓名程备久,朱苏文;
年度 2006
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 Q939.117;
关键词
华根霉; L乳酸菌; 离子注入; 低能离子诱变;

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