DNMT1和MBD1对P19细胞DNA甲基化动力学影响的研究

声明

前 言

1材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞株

1.1.2 药品与试剂

1.1.3 主要仪器

1.1.4 主要试剂的配制

1.2.1 P19细胞的培养

1.2.2 携带MBD1 shRNA 的慢病毒感染P19 细胞

1.2.3检验MBD1 shRNA 慢病毒载体对MBD1 的敲减效率

1.2.5 MBD1对P19 细胞DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3以及5-Aza对P19细胞MBD1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1、TET2、TET3 mRNA 和蛋白表达水平的影响

1.2.6 ELISA 法测定细胞中5-mC、5-hmC的表达水平

1.3 统计学分析

2.1.1 荧光显微镜下GFP的表达情况

2.1.2 qPCR检验MBD1 shRNA 慢病毒载体对MBD1的敲减率

2.1.3 Western blotting 进一步验证MBD1 shRNA的效率

2.2 MBD1对P19细胞DNMT1、DNMT3a、DNMT3b 以及TET1、TET2、TET3 mRNA和蛋白表达水平的影响

2.2.1 qPCR检测shMBD1 细胞中DNMT1、DNMT3a 及DNMT3b 的mRNA水平

2.2.2 qPCR检测shMBD1 细胞中TET1、TET2 及TET3 的mRNA 水平

2.2.3 qPCR检测shMBD1 细胞中5-hmC的mRNA水平

2.2.4 Western blotting检测shMBD1细胞中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b 和TET1、TET2、TET3蛋白表达水平

2.3 MTT 法检测给予不同浓度的5-Aza对P19 细胞存活率的影响

2.4 5-Aza对P19细胞MBD1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b 以及TET1、TTE2、

2.4.1 qPCR检测5-Aza 作用后细胞中DNMT1、DNMT3a 和DNMT3b 的mRNA水平

2.4.2 qPCR检测5-Aza 作用后细胞中MBD1 的mRNA水平

2.4.3 qPCR检测5-Aza 作用后细胞中TET1、TET2和TET3的mRNA水平

2.4.4 qPCR检测5-Aza 作用后细胞中5-hmC 的mRNA水平

2.4.5 Western blotting 检测5-Aza作用后细胞中MBD1、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和TET1、TET2、TET3蛋白表达水平

2.5 ELISA结果

2.5.1 MBD1对P19 细胞5-mC、5-hmC含量的影响

2.5.2 5-Aza对P19细胞5-mC、5-hmC含量的影响

3 讨论

4 结论

参考文献

文 献 综 述:神经发生在抑郁症发生发展中的作用

参考文献

缩 略 语 表

攻读学位期间发表文章情况

个人简历

致谢