• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 中文期刊> 《肿瘤研究与临床》 >miRNA-34a靶向抑制高迁移率族蛋白B1逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药性机制研究

miRNA-34a靶向抑制高迁移率族蛋白B1逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药性机制研究

         
页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

目的探讨miRNA-34a（miR-34a）靶向高迁移率族蛋白B1（HMGB1）逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药的相关机制。方法采用剂量递增间歇作用的方法构建MG-63顺铂耐药细胞株（MG-63/DDP）。使用不同浓度顺铂（0、1、5、10、20、30 μg/ml）处理MG-63/DDP细胞, 采用CCK-8法检测细胞存活率。将MG-63/DDP细胞分别转染miR-34a过表达载体（miR-34a过表达载体组）及miR-34a空表达载体（miR-34a-NC组）, 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-34a的相对表达量;使用不同浓度顺铂（0、1、5、10、20、30 μg/ml）处理细胞, 采用CCK-8法检测细胞存活率, 流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a是否调控HMGB1的表达, 蛋白质印迹法检测转染后细胞的HMGB1蛋白表达量。将MG-63/DDP细胞分别转染HMGB1基因沉默载体（si-HMGB1组）及其阴性对照载体（si-NC组）, 采用蛋白质印迹法检测HMGB1蛋白表达量;CCK-8法检测细胞存活率。结果 MG-63/DDP细胞株构建成功。不同浓度顺铂作用后, MG-63/DDP细胞存活率均高于MG-63细胞（均P＆0.01）。MG-63/DDP细胞和MG-63细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）分别为25.80 μg/ml和0.47 μg/ml。MG-63/DDP细胞中miR-34a相对表达量低于MG-63细胞（0.46±0.04比1.02±0.05, t=15.14, P＆0.01）;与miR-34a-NC组相比, miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞中miR-34a相对表达量增加（1.67±0.09比1.00±0.02, t=-12.58, P＆0.01）。miR-34a过表达载体组、miR-34a-NC组细胞存活率随着顺铂浓度增加而降低, 5～30 μg/ml顺铂作用后, miR-34a过表达载体组细胞存活率均低于miR-34a-NC组（均P＆0.01）。20 μg/ml顺铂处理24 h后, miR-34a-NC组和miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞凋亡率分别为（25.1±1.7）%、（42.3±2.3）%, miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞具有更高的凋亡率（P＆0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示, 与miR-34a-NC组相比, miR-34a过表达载体组能够抑制PGL3-野生型-HMGB1荧光素酶活性, 差异具有统计学意义（t=6.37, P＆0.01）, 而miR-34a过表达载体组对PGL3-突变型-HMGB1荧光素酶活性无明显抑制效果（t=0.35, P=0.74）。miR-34a过表达载体组HMGB1蛋白相对表达量低于miR-34a-NC组（0.43±0.02比1.00±0.14, t=6.98, P＆0.01）。与si-NC组相比, si-HMGB1组HMGB1蛋白相对表达量及IC50均降低（均P＆0.05）。结论 miR-34a过表达能够增强骨肉瘤细胞MG-63/DDP对顺铂的化学敏感性, 其作用机制可能与抑制HMGB1的表达有关。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号