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不同液体培养对脂多糖刺激后人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549产生凝血及纤溶因子的影响

         
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目的 观察生理盐水(NS)、羟乙基淀粉130/0.4氯化钠溶液(万汶)及乳酸钠林格溶液对脂多糖(LPS)刺激后的人Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)株A549产生凝血及纤溶相关因子的影响,并寻找最佳刺激剂量.方法 将处于对数生长期的A549细胞按随机数字表法分为空白对照组、LPS损伤组、NS组、万汶组及林格组,每组再分为20％及40％组;各组加入终浓度为75 mg/L的LPS体外刺激A549细胞株,空白对照组仅加普通培养液.培养12h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中组织因子(TF)、可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)、纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的蛋白含量及mRNA表达水平,并计算PAI-1/t-PA蛋白和mRNA的比值.结果 与空白对照组比较,LPS损伤组TF、sEPCR、PAI-1、t-PA蛋白含量均明显增高,PAI-1/t-PA蛋白比值也明显增高;LPS损伤组相应的TF、EPCR、PAI-1及t-PA的mRNA表达也明显升高.与LPS损伤组比较,20％、40％ NS组TF、sEPCR、PAI-1、t-PA蛋白表达均明显降低,而40％ NS组降低更为明显,但仍高于空白对照组,40％ NS组PAI-1/t-PA蛋白比值较LPS组明显降低.20％、40％ NS组TF和sEPCR的mRNA表达及40％ NS组PAI-1和t-PAmRNA表达均较LPS损伤组明显降低,且仍以40％ NS组降低较为明显.20％林格组TF和sEPCR蛋白表达较LPS损伤组下降,40％林格组TF、sEPCR蛋白表达却高于LPS损伤组,两组PAI-1及PAI-1/t-PA蛋白比值均高于LPS损伤组,以40％林格组升高明显;20％、40％林格组sEPCR mRNA均较LPS损伤组明显升高,20％林格组PAI-1 mRNA较LPS损伤组降低,而40％林格组PAI-1 mRNA较LPS损伤组升高;20％万汶组sEPCR蛋白较LPS损伤组降低,40％万汶组TF及sEPCR蛋白均较LPS损伤组升高;20％、40％万汶组PAI-1、PAI-1/t-PA蛋白比值均高于LPS损伤组,以40％万汶组升高更为显著;20％、40％万汶组sEPCR mRNA及40％万汶组TF mRNA、PAI-1/t-PA mRNA比值均较LPS损伤组升高.20％林格组及20％万汶组TF、TF mRNA、EPCRmRNA、PAI-1、PAI-1/t-PA蛋白比值均高于20％ NS组;20％万汶组PAI-1、TF mRNA、EPCR mRNA高于20％林格组;40％林格组及40％万汶组TF、TF mRNA、sEPCR、EPCR mRNA、PAI-1、PAI-1 mRNA、PAI-1/tPA蛋白比值均高于40％ NS组,40％万汶组TF、TFmRNA、PAI-1、PAI-1 mRNA、PAI-1/t-PA蛋白比值高于40％林格组.结论 NS、乳酸林格液及万汶培养对LPS损伤后A549细胞产生凝血及纤溶相关因子存在不同影响,NS可抑制LPS刺激后A549细胞TF、sEPCR及PAI-1的合成,且其抑制作用随着培养量的增加而增加;而随着林格液及万汶培养量的增加,对TF、EPCR的合成由抑制逐渐转为促进作用,而对PAI-1则主要表现为促进作用,以万汶作用更为明显.

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