MDR1及MDR3基因沉默逆转卵巢上皮性癌细胞对紫杉醇耐药的实验研究

肖兰; 高瑞; 卢实; 卢美松; 梁铭霖; 任利容; 王泽华

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目的研究多药耐药基因——MDR1及 MDR3基因沉默逆转卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞 A2780/taxol 对紫杉醇耐药的作用。方法用真核质粒介导的针对 MDR1及 MDR3基因的短发夹状 RNA（shRNA）转染 A2780/taxol 细胞（分别为 MDR1组、MDR3组）,空质粒转染作为对照（空载体组）。流式细胞仪分别检测细胞早期凋亡、罗丹明123（Rh123）积聚情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法（TUNEL）检测细胞晚期凋亡情况,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50),RT-PCR 技术检测 MDR1及 MDR3 mRNA 的表达,蛋白印迹法（western blot）检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白的表达。结果转染后,MDR1组及MDR3组 A2780/taxol 细胞的早期凋亡率分别达（20.21±0.56）%和（10.87±1.24）%。MDR1、MDR3组 A2780/taxol 细胞内的 Rh123平均荧光强度分别为116.6±8.1、98.4±3.8,显著高于空载体组的40.2±1.6,差异有统计学意义（P＜0.05）。TUNEL 检测显示细胞发生了晚期凋亡。MDR1、MDR3组A2780/taxol 细胞对紫杉醇的 IC50明显下降,分别与空载体组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。转染48 h 后,A2780/taxol 细胞中 MDR1和 MDR3 mRNA 的表达水平分别下降了（73.3±0.8）%和（51.6±0.4）%;MDR1、MDR3组细胞 caspase-3的表达量分别为（80.8±2.6）%、（72.0±4.7）%,均较空载体组增加。结论 MDR1及 MDR3基因沉默能恢复 A2780/taxol 细胞对紫杉醇的敏感性并诱导细胞凋亡,从而逆转 A2780/taxol 细胞对紫杉醇的耐药性。

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来源
《中华妇产科杂志》 |2007年第6期|412-416|共5页
作者
肖兰; 高瑞; 卢实; 卢美松; 梁铭霖; 任利容; 王泽华;
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作者单位

华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科;

哈尔滨医科大学附属第一医院妇产科;

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正文语种 chi
中图分类卵巢肿瘤;
关键词
卵巢肿瘤; 紫杉酚; 基因; MDR; RNA; 小分子干扰; 抗药性; 肿瘤;

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