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环介导等温扩增快速检测临床假丝酵母菌属方法建立与应用

         

摘要

目的:建立一种环介导等温扩增(LAMP)反应,根据假丝酵母菌属 D1~ D226S rDNA 保守区域设计通用引物,直接对临床标本进行假丝酵母菌属检测。方法根据假丝酵母属的特异 D1~ D226S rDNA 基因序列比对后的相对保守区设计特异引物,分别提取5种假丝酵母菌、临床对照菌株以及临床标本 DNA ,然后以 LAMP 技术扩增,并对白色假丝酵母菌孢子悬液进行系列梯度稀释检测,确定最低检测限。结果5种假丝酵母菌直接提取 DNA 经 LAMP 和 PCR 方法检测均为阳性;30份经培养证实假丝酵母菌属感染标本,经 LAMP 检测有27份标本阳性,阳性检出率为90.0%;另10份临床对照标本和11种非假丝酵母菌属来源 DNA 样本经 LAMP 方法检测后结果均为阴性,无非特异性反应发生;LAMP 最低检测限达到103 CFU /ml 。结论结果证明 LAMP 是一种简便、快速、特异和敏感的检测方法,可以检测临床和环境标本中的常见假丝酵母菌属。

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