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首页> 中文期刊> 《黑龙江八一农垦大学学报》 >大肠杆菌外膜蛋白A在原核表达载体中的克隆表达

大肠杆菌外膜蛋白A在原核表达载体中的克隆表达

         
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对大肠杆菌的外膜蛋白A基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达,为大肠杆菌重组疫苗的构建奠定基础.以大肠杆菌分离株308-2菌株基因组DNA为模板,用PCR法对基因ompA进行扩增,产物与T载体连接,经测序鉴定正确后与表达载体pET32a(+)连接构建表达ompA的重组质粒,将此重组质粒转化入表达宿主E coli Rosetta菌株内抽提质粒,酶切鉴定正确后对转化菌株以IPTG进行诱导后,离心,上清进行SDS-PAGE,将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行western-blotting分析.测序结果显示,ompA为完整的编码区基因1041 bp,编码347个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为37 kDa.原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,以37℃、1 mM的IPTG诱导3 h,该基因表达效果最好,诱导产物是与理论值相符的60 kDa的融合蛋白.经western-blotting检测,表达的重组蛋白OmpA可与His抗体反应得到清晰且分子量正确的条带,表明表达的重组蛋白具有良好的反应原性.成功进行了大肠杆菌外膜蛋白OmpA基因的克隆表达,为进一步研究其免疫保护作用及功能奠定了试验基础.

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