外膜蛋白

摘要： 多杀巴氏杆菌是一种革兰氏阴性菌,能感染家禽、猪、牛、羊等多种动物,其中,牛、羊感染多杀巴氏杆菌通常表现为出血性败血症,家禽感染可引起禽霍乱,猪感染可引起猪肺疫,成为危害畜牧行业的病原之一[1]。本研究以广西某养殖场出现呼吸道症状的病牛为研究对象,采集肺脏组织,采用细菌的分离培养、多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt扩增、血清型扩增鉴定、毒力基因(转铁蛋白tbpA、编码4型菌毛基因ptfA、血红色获得受体hasR、脂蛋白plpE、外膜蛋白ompH)的扩增、药敏试验、致病性试验等方法对细菌特性进行研究。

摘要： 为探究沙门菌外膜蛋白基因fadL、ompN、ybfM以及sRNA RybB和伴侣蛋白Hfq缺失对该菌致病性的影响,构建了鼠伤寒沙门菌基因缺失菌株,并测定了基因缺失菌株的生长曲线,同时通过小鼠腹腔注射测定了基因缺失菌株的毒力及其在小鼠脾脏和肝脏上的定殖能力.结果显示,与鼠伤寒沙门菌亲本野生型菌株LT2相比,基因缺失菌株的生长能力变化不大.LT2对小鼠的LD_(50)为3.97×10^(7)CFU;外膜蛋白基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL和ΔybfM的LD_(50)分别为1.58×10^(5)、6.29×10^(5)、9.97×10^(5)CFU,毒性明显增强;sRNA敲除菌株(ΔrybB)的LD_(50)为9.97×10^(7)CFU,毒性有所下降;伴侣蛋白Hfq敲除组(Δhfq)及rybB&hfq双敲除组的小鼠死亡数未超过50%,毒性明显下降.感染48 h后,与对照组(LT2)相比,所有基因缺失菌株处理组的脾脏指数均极显著性升高;ΔrybB&Δhfq、Δhfq处理组的脾脏载菌量显著降低,其余菌株处理组的载菌量与LT2差异不显著;ΔrybB、ΔrybB&Δhfq、ΔfadL、ΔybfM处理组的肝脏指数均显著下降,而Δhfq、ΔompN处理组的肝脏指数变化不显著;ΔrybB、ΔfadL处理组肝脏载菌量变化不显著,Δhfq、ΔrybB&Δhfq处理组的肝脏载菌量显著下降,而ΔompN、ΔybfM处理组的载菌量显著上升.总的来说,hfq、rybB缺失降低了鼠伤寒沙门菌的致病力,而fadL、ompN、ybfM的缺失提高了鼠伤寒沙门菌的致病力.

摘要： 为构建弧菌铁蛋白受体pvuA重组质粒,提高其在大肠杆菌BL21中的表达产量,优化表达条件,并为其免疫原性研究奠定基础,从副溶血弧菌基因组DNA扩增了弧菌铁蛋白受体pvuA基因,构建了重组质粒pET-28a(+)-ferric vibrioferrin receptor,转入大肠杆菌BL21并经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达蛋白。在单因素试验的基础上,以菌体初始浓度、诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度为自变量,菌体蛋白浓度为响应值,根据响应面法的Box-Benhnken中心设计原理,研究自变量及其交互作用对弧菌铁蛋白产量的影响,利用Design-Expert和响应面分析相结合的方法对诱导条件进行优化。IPTG诱导获得的重组蛋白以包涵体的形式存在,优化后最终确定重组弧菌铁蛋白受体pvuA最佳表达条件为菌体初始浓度OD600=0.6,诱导时间10 h,诱导温度37°C,IPTG浓度为1.0 mmol·L^(−1),此时包涵体沉淀中蛋白含量最高,为11.00 mg·mL^(−1)。构建了弧菌铁蛋白受体pvuA的大肠杆菌重组表达质粒,通过优化表达条件提高了纯化蛋白产率,为研究弧菌铁蛋白受体蛋白的多克隆抗体的制备和应用奠定了基础。

摘要： 为了解RybB sRNA、RNA伴侣蛋白Hfq对沙门菌外膜蛋白fadL、ybfM、ompN的作用,利用λ-red同源重组系统构建fadL、ybfM、ompN基因lac融合菌株,通过P22噬菌体转导完成颜色指示菌株中RybB、hfq基因的单缺失与双缺失,进行β-半乳糖苷酶活性试验和qPCR,对其相应表达量进行分析.结果表明,Hfq抑制ybfM、ompN的表达,但fadL的表达上调;RybB sRNA抑制ompN、fadL的表达,但ybfM的表达上调.当Hfq与RybB共同对ybfM、fadL、ompN进行调控时,对ompN、ybfM的表达具有抑制作用,但fadL的表达上调,且Hfq的调控作用总体大于RybB.

摘要： 布鲁氏菌病是一种人畜共患传染病。外膜蛋白是布鲁氏菌重要的毒力因子,同时具有较好的免疫原性,能够刺激机体产生较强的免疫力,可以作为布鲁氏菌病诊断的抗原和布鲁氏菌病亚单位疫苗的候选物。本文对目前几种重要的布鲁氏菌外膜蛋白相关研究进展进行综述,以期进一步了解布鲁氏菌外膜蛋白的特性,为研制布鲁氏菌病的诊断试剂及相关疫苗提供参考价值。

摘要： 为系统评价外膜蛋白在环境胁迫条件下的生物学功能,以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)ATCC 7966为研究对象,选取33株外膜蛋白缺失菌株,对其贴太紧在渗透压、金属离子、H_(2)O_(2)及pH等胁迫条件下的生长状态进行测定。结果发现:编码TonB家族蛋白基因AHA_0461、AHA_4275被敲除的菌株在渗透压胁迫条件下较野生型菌株生长更好;编码未知功能蛋白基因AHA_2282被敲除的菌株在金属离子胁迫条件下生长较弱,而ΔAHA_0904菌株在渗透压胁迫条件下生长状况较好;编码长链脂肪酸转运蛋白基因AHA_2145被敲除的菌株在H_(2)O_(2)和金属离子胁迫条件下生长状态较弱;而编码OmpA家族蛋白基因AHA_1279、AHA_1281和分泌素家族蛋白基因pilQ、AHA_0569被敲除的菌株在H_(2)O_(2)胁迫条件下的生长均弱于野生型菌株。提示这些蛋白可能在细菌响应环境胁迫方面起重要作用。本研究结果有望为今后全面地了解嗜水气单胞菌外膜蛋白响应不同环境胁迫的机制提供思路,为该病原菌的防治提供可能的靶点。

摘要： 中国农业科学院植物保护研究所经济作物真菌病害流行监测与防控创新团队发现黄萎病菌利用大丽轮枝菌真菌细胞外膜蛋白(CFEM)家族蛋白结构结合铁元素位点突变特性,应对寄主植物的免疫反应从而维持侵染能力的过程,揭示了大丽轮枝菌逃逸植物免疫反应的进化机制。

摘要： 中国农业科学院植物保护研究所经济作物真菌病害流行监测与防控创新团队发现黄萎病菌利用大丽轮枝菌真菌细胞外膜蛋白(CFEM)家族蛋白结构结合铁元素位点突变特性,应对寄主植物的免疫反应从而维持侵染能力的过程,揭示了大丽轮枝菌逃逸植物免疫反应的进化机制。相关研究成果发表在《生物医学中心生物学》。

摘要： 旨在研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP16对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡和免疫活性的影响及其机制探讨。以OMP16处理RAW264.7细胞为模型,通过MTT以及Hoechst法检测OMP16对细胞活力的影响,通过Western blot检测Caspase-3、GRP78、CHOP的表达情况,流式细胞术检测OMP16对细胞凋亡的影响以及RTPCR检测免疫因子IL-1β、IL-6和TNF-α的变化。结果表明,OMP16能够影响RAW264.7细胞的活力,且有浓度依赖性;添加OMP16后能够显著增加凋亡标志因子Caspase-3的表达(P<0.001),并促进RAW264.7细胞的凋亡;作用24、36h之后,显著引起内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP的表达;并且能显著上调IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子的mRNA表达水平。布鲁氏菌OMP16能够诱导RAW264.7凋亡,OMP16显著引起内质网应激CHOP通路的激活。

摘要： 鸭疫里默氏杆菌(RA)病,是家禽中主要的细菌性传染病之一,血清型复杂且各血清型间缺少交叉免疫保护,其中血清1型、2型、10型是国内优势血清型。外膜蛋白A(OmpA)是RA的毒力因子之一,在不同血清型RA中保守性良好。用OmpA蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,与骨髓瘤细胞SP2/0融合后用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,腹腔注射BALB/c小鼠制备单克隆抗体。通过间接ELISA检测单克隆抗体效价及稳定性,秋水仙素法进行染色体分析,Western blot和玻片凝集试验鉴定单克隆抗体特异性。获得3株稳定分泌抗RA OmpA的单克隆抗体,分别命名为2D5、2A6、4H8;3株单克隆抗体的亚型均为IgG2a,腹水效价均为1∶2048000,均与鸭疫里默氏杆菌血清1型RA-CH3、血清2型RA-NJ3、血清10型RA-HXb2发生特异性反应,而与其他禽源致病菌不发生交叉反应。本研究成功研制的3株单克隆抗体具有良好的菌种特异性,有助于RA致病机理和RA快速诊断试剂盒的研制。

摘要： 铜绿假单胞菌是一种常见的非发酵革兰阴性杆菌,是医院感染的主要条件致病菌之一.目前耐药形式严峻收集2014年1月-12月新疆维吾尔自治区人民医院各种标本细菌培养4589份,随机选出对碳青霉烯抗生素耐药的不重复铜绿假单胞菌58株.进行药敏试验，亚胺培南E-test验证试验。结果证明，IMP-1型耐药基因是造成铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因，外膜蛋白OprD2编码基因的缺失也是造成铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的另一个主要原因。部分铜绿假单胞菌耐药原因没有找到，有待于进一步研究。

摘要： HBV对受染肝细胞的影响非常复杂且成多样化,HBV感染肝细胞所合成的外膜蛋白对肝细胞的生长、代谢、甚至是恶性转化产生一系列重要的生物学调节效应,影响慢性病毒性乙型肝炎及其相关疾病演变的病理机制.HBV外膜蛋白的L蛋白的双重拓扑结构，反式激活功能通过改变肝细胞的基因表达谱，以及中蛋白和小蛋白在病毒吸附和感染，以及在肝细胞炎症损伤，凋亡以及恶化方面发挥至关重要的作用。所以对HBV外膜蛋白结构及其功能的认识，将有助于了解慢性病毒性乙型肝炎及其相关发病机制。

摘要： 本文研究了OMP10和OMP19外膜蛋白对小鼠巨噬细胞胞内布氏小体与溶酶体融合的影响以及对其凋亡的影响，为研究布鲁氏菌外膜蛋白对其胞内生存的机制奠定基础。布鲁氏菌△omp10和△omp19具有一定的遗传稳定性，其胞内生存能力与亲本株2308相比有一定程度的下降;△omp10和△omp19与亲本株2308相比两者不能抑制小鼠巨噬细胞内布氏小体与溶酶体的融合;Domp10与亲本株2308相比不能抑制小鼠巨噬细胞的凋亡而△omp19与亲本株2308相比对小鼠巨噬细胞的凋亡处于相同水平。

摘要： 目的：本文旨在对53株临床鸭源大肠杆菌质粒介导的AmpC酶基因分子特点、毒力基因及外膜蛋白进行分析.方法：通过头孢西丁纸片法和三维试验筛选高产AmpC酶的菌株,并对AmpC酶阳性菌株进行AmpC酶基因PCR检测,通过质粒接合和基因克隆试验分析AmpC酶基因是否可通过质粒接合进行传播及AmpC酶基因的基因环境.通过种系发育分型和ERIC-PCR分析,研究不同地区菌株之间的克隆亲缘关系.用PCR扩增菌株的毒力基因,分析毒力基因与多重耐药表型及种系发育分型的关系.此外,使用SDSPAGE技术对菌株进行外膜蛋白条带分析,并采用PCR技术扩增常见外膜蛋白基因(OmpA、OmpC、OmpF),分析外膜蛋白缺失与菌株多重耐药的关系.结果：结果显示,53株试验菌中,3株检测出AmpC酶基因(DHA-1和CMY-2基因型).提取的接合子质粒通过酶切、连接转化、测序分析,得到一个长度为14583bp的插入片段,该片段同时携带DHA-1基因和qnrB4基因,此序列上还含有插入序列ISCR1的部分序列,转运蛋白(SapC、SapB、SapA),诱导蛋白cinA,噬菌体休克蛋白(pspF、pspA、pspB、pspC、pspD),AmpC酶的转录调控因子ampR基因.结论：由此可得出DHA-1和qnrB4基因位于同一个可接合质粒上,这两种耐药基因可共同转移,共同传播.种系发育进化分型表明:11株大肠杆菌的4株为A类(占36.4％),B1类7株(占63.6％),没有发现高毒力的B2类和D类菌株.毒力基因检测结果表明:毒力岛(HPI)中的铁离子调节种系基因irp2、P型菌毛结构基因papA、血清耐受基因iss、cvaC、粘附性菌毛基因csgA在临床分离株中的携带率分别为54.5％、90.9％、18.2％、9.1％、90.9％,没检测到鼠疫菌素受体基因fyuA、Ⅰ型菌毛必须蛋白基因fimC、粘附性菌毛基因fe1A.ERIC-PCR结果显示:不同来源的菌株可属于同一克隆型,相同来源的菌株也可属于不同的克隆来源.外膜蛋白检测表明外膜蛋白缺失在大肠杆菌中十分常见,本试验中OmpC缺失更为常见,外膜蛋白缺失是造成细菌多重耐药机制的原因之一.

摘要： 钩端螺旋体的感染是通过其表面被称为粘附素的外膜蛋白与宿主细胞外膜基质(ECM)的结合来启动的。钩体表面的各种粘附素中,Lig蛋白和Lipl32的量最大,在各种血清型中较保守,其特性研究较透彻。基于外膜蛋白(OMP)构建的亚单位疫苗是全细胞灭活疫苗的有利替代品,因为它们在各种血清型之间具有抗原的保守性,并且可以把高通量的技术用于疫苗生产。目前,钩端螺旋体外膜蛋白,例如,OmpL1,LipL41,LigA,LigB,Lp0607,Lp1118和Lp1454都已证明可以作为钩端螺旋体病的亚单位候选疫苗。

摘要： 采用FOCUSTM Global Fractionation试剂盒制备副鸡禽杆菌A(221株)、B(O222株)、C(Modesto株)3个血清型标准菌株的外膜蛋白,进行SDS-PAGE凝胶电泳.结果表明,不同血清型标准菌株的电泳图谱相似,经凝胶定量软件分析得出,主要条带均有7个,其分子质量相似,分别占A、B、C蛋白总量的70.01％、76.27％、76.64％.此外共有5个蛋白条带分子质量相似,但蛋白含量差异显著.本实验为副鸡禽杆菌外膜蛋白的进一步研究提供了理论依据.

摘要： 从本实验室对广东省鉴定的猪大肠杆菌优势血清型O107中，选出一株有致病性菌株。通过细菌培养、超声波裂解、N一十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取出大肠杆菌O107的外膜蛋白。提取物经SDS—PAGE电泳检测后发现蛋白条带大小与预期的实验结果相同。

摘要： 为提高猫汉赛巴尔通氏体(B.henselae)病诊断方法的便捷性、特异性与敏感性,本研究通过确定抗原的最佳包被浓度、最佳血清稀释倍数及其他优化条件,建立基于纯化的原核重组表达的B.henselae外膜蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法.经特异性试验、敏感性试验、重复性试验等证实,该方法特异性与敏感性较高、批内与批间变异系数分别控制在0.65～3.93％和0.63～3.5％.经临床应用试验证明,上海近郊地区B.henselae血清阳性率为41.35％,其中流浪猫感染率差异极显著(x2=13.85、p＜0.01),老龄宠物猫的感染率差异显著(x2=7.10、p＜0.05).该方法易于操作,具有较好的应用前景,对猫B.henselae的诊断、防控及公共卫生安全均具有重要意义.

摘要： 构建金黄色葡萄球菌FnBPA(纤连蛋白结合蛋白)的两种原核表达载体,制备其单克隆抗体(mAb)并对其特异性进行鉴定.筛选FnBPA的抗原表位富集区,优化基因序列,分别构建FnBPA-pGEX4T-2和FnBPA-pET28a(+)两种表达载体,纯化目的蛋白FnBPA-GST和FnBPA-His.以纯化FnBPA-GST为抗原免疫Balb/c小鼠,采用常规融合技术制备杂交瘤细胞,通过有限稀释法获得单克隆细胞株.以纯化的FnBPA-His为检测抗原,采用间接ELISA法、Western Blot筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株.杂交瘤细胞注射小鼠腹腔制备腹水抗体,采用protein G Resin进行纯化.成功构建两种重组表达质粒FnBPA-pGEX4T-2和FnBPA-pET28a(+),筛选获得了高表达工程菌,纯化后获得高纯度目的蛋白.获得稳定分泌单克隆抗体的细胞株,制备的腹水效价大于2x105,腹水纯化后获得纯度大于95％的特异性抗体.单克隆抗体的制备为金黄色葡萄球菌检测方法的建立奠定了良好的基础.

摘要： 目的:了解中国咽部感染患者肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)的基因型.方法:从中国不同城市收集疑为Cpn感染患者的咽拭子标本465份,巢式PCR扩增Cpn主要外膜蛋白基因(ompA)片段,其中包括4个变异区,对所得58份阳性标本进行ompA基因序列测序,对照Cpn参考株基因,根据同源性对这些临床株基因进行分型.结果:从58份Cpn临床株标本中,检出A、B、C、D4种基因型共14个基因变体,其中以C型最为常见(89.7％),另外几种是A型(5.2％)、B型(3.4％)、D型(1.7％).结论:实验结果表明在我国几个城市,Cpn存在多个基因型,其中以C型最为常见,另外几种是A型、B型、D型,呈现较大的多态性,可为其疫苗的研制及感染的防治提供重要的实验依据.

摘要： 含有(a)脑膜炎奈瑟球菌B血清群(Neisseria meningitidis serogroup B，NmB)外膜囊(OMV)和(b)选自其它奈瑟球菌蛋白质的免疫原性成分或其免疫原性片段的组合物。成分(b)较佳包括获得成分(a)的OMV的不同NmB菌株的蛋白质。较佳通过脱氧胆酸盐抽提法获得所述OMV。任选地，该组合物还可含有抗其它病原体的保护性抗原。

摘要： 含有(a)脑膜炎奈瑟球菌B血清群(Neisseria meningitidis serogroup B，NmB)外膜囊(OMV)和(b)选自其它奈瑟球菌蛋白质的免疫原性成分或其免疫原性片段的组合物。成分(b)较佳包括获得成分(a)的OMV的不同NmB菌株的蛋白质。较佳通过脱氧胆酸盐抽提法获得所述OMV。任选地，该组合物还可含有抗其它病原体的保护性抗原。

摘要： 含有(a)脑膜炎奈瑟球菌B血清群(Neisseria meningitidis serogroup B，NmB)外膜囊(OMV)和(b)选自其它奈瑟球菌蛋白质的免疫原性成分或其免疫原性片段的组合物。成分(b)较佳包括获得成分(a)的OMV的不同NmB菌株的蛋白质。较佳通过脱氧胆酸盐抽提法获得所述OMV。任选地，该组合物还可含有抗其它病原体的保护性抗原。

摘要： 本发明提供了一种禽鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)多形外膜蛋白PmpG蛋白的制备方法及其应用。本发明提供：1)鹦鹉热衣原体PmpG蛋白包括17G、19G、20G和21G蛋白表达的引物、载体、表达条件、蛋白复性技术。2)利用制备的Pmp20G蛋白为包被抗原，制备ELISA诊断试剂盒，具有良好的特异性、敏感性和重复性，与国外商品化试剂盒相比符合率达到98.1％，且与其它相关呼吸道病原无交叉反应。3)以鹦鹉热衣原体Pmp17G、19G、20G、21G四种蛋白组合物为抗原，制备的疫苗具有使用剂量小，协同效应高，免疫保护效力高等特点。4)以鹦鹉热衣原体Pmp17G、19G、20G、21G四种蛋白组合物为抗原，以壳聚糖凝胶为佐剂可通过气雾免疫途径，产生良好的呼吸道粘膜免疫，防治鹦鹉热衣原体的感染，阻断鹦鹉热衣原体从畜禽向人群传播。

摘要： 本发明公开了一种融合表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白的重组乳酸菌菌株及其用途。本发明所述的重组乳酸菌菌株，含有经优化后的编码鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白的基因序列以及编码沙门菌属外膜蛋白OMP的基因序列。实验证明该重组乳酸菌菌株其能够高效融合表达VP2蛋白和外膜蛋白OMP，且以可溶性形式存在于细胞质中。将本发明的重组乳酸菌菌株直接作为疫苗免疫鸡，实验结果表明：该重组乳酸菌菌株能有效诱导机体产生特异性的免疫应答，主要产生特异性中和抗体，使免疫鸡获得100％的抵抗高致病力vvIBDV致死性攻击的保护，并可清除体内残留的病毒，达到清除性免疫的目的。因此，本发明的提出为鸡传染性法氏囊病的防治提供了一种新的技术手段。

摘要： 本发明属蛋白质分析技术领域，具体为一种外膜蛋白酶T酶解组蛋白并进行质谱分析的方法。本发明方法包括：从细胞或组织样本中采用酸提法抽提核心组蛋白，超滤纯化组蛋白后与外膜蛋白酶T进行特定条件下的孵育酶解，最后将酶解完成的肽段经过除盐处理，送入液相色谱‑质谱鉴定和定量翻译后修饰。本发明方法操作方便，步骤简单，避免了传统组蛋白分析中的衍生化步骤，可实现对组蛋白翻译后修饰的精确鉴定和定量。

摘要： 本发明公开了一种融合表达IBDV VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白RCK的重组乳酸菌菌株及其用途，本发明所述的重组乳酸菌菌株，含有经优化后的编码鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白以及沙门菌属外膜蛋白RCK融合蛋白的基因序列，其能够高效融合表达VP2蛋白和沙门菌属外膜蛋白RCK，且表达的融合蛋白VP2‑RCK以可溶性形式存在于乳酸菌的细胞质中。将本发明的重组乳酸菌菌株直接作为疫苗免疫鸡，实验结果表明：该重组菌株疫苗能有效诱导机体产生特异性的免疫应答，使免疫鸡获得100％的抵抗高致病力vvIBDV致死性攻击的保护，并可清除体内残留的病毒，达到清除性免疫的目的，本发明的提出为鸡传染性法氏囊病的防治提供了一种新的技术手段。

摘要： 本发明公开了一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白及其表达和应用，将OMP25蛋白N端信号肽序列与BP26蛋白N端信号肽序列删除，保留其抗原决定簇序列，中间通过Linker序列GGAGGCGGGGGTTCTGGAGGCGGGGGTTCT将之连接成为融合蛋白；所述的OMP25蛋白N端信号肽序列为第1个aa～29个aa，所述的BP26蛋白N端信号肽序列为第1个aa～24个aa。本发明比单独蛋白更经济、方便，抗原性更优。蛋白获得耗时少产量高，避免了活菌的培养和生物安全风险，特异性强，定位布鲁氏菌细胞抗原表位更有利于揭示体液免疫的本质。

摘要： 本发明提供了一种禽鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)多形外膜蛋白PmpG蛋白的制备方法及其应用。本发明提供：1)鹦鹉热衣原体PmpG蛋白包括17G、19G、20G和21G蛋白表达的引物、载体、表达条件、蛋白复性技术。2)利用制备的Pmp20G蛋白为包被抗原，制备ELISA诊断试剂盒，具有良好的特异性、敏感性和重复性，与国外商品化试剂盒相比符合率达到98.1％，且与其它相关呼吸道病原无交叉反应。3)以鹦鹉热衣原体Pmp17G、19G、20G、21G四种蛋白组合物为抗原，制备的疫苗具有使用剂量小，协同效应高，免疫保护效力高等特点。4)以鹦鹉热衣原体Pmp17G、19G、20G、21G四种蛋白组合物为抗原，以壳聚糖凝胶为佐剂可通过气雾免疫途径，产生良好的呼吸道粘膜免疫，防治鹦鹉热衣原体的感染，阻断鹦鹉热衣原体从畜禽向人群传播。

摘要： 本发明涉及一种大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法，该方法包括以下步骤：(1)诱导表达的rOmpA包涵体蛋白沉淀的收集；(2)rOmpA包涵体蛋白用8M尿素溶液变性；(3)用含15mMβ‑环糊精、pH8.5的100mM Tris‑HCl缓冲液进行5倍稀释复性；(4)复性的rOmpA亲和层析纯化；(5)纯化的rOmpA置透析袋中，于pH7.6的PBS缓冲液中4°C透析12h以上，离心后收集上清，即获得纯化的复性rOmpA蛋白。本发明对表达的rOmpA包涵体蛋白进行复性和纯化，可获得纯度高达95％的可溶性rOmpA蛋白；本发明使用的复性方法简便快捷，有效解决了大肠杆菌rOmpA包涵体蛋白的复性纯化问题，为大规模生产利用rOmpA降低成本。