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SIRPα-GFP真核表达载体构建及其在HEK293T细胞中的表达

         

摘要

目的:构建信号调节蛋白α-绿色荧光蛋白(SIRPα-GFP)真核表达载体,转染HEK293T细胞获得稳定表达SIRPα-GFP融合蛋白的细胞系,研究SIRPα-GFP融合蛋白在HEK293T细胞的膜定位.方法:将SIRPα质粒和带有GFP的表达载体分别用限制性内切酶MluⅠ和SgfⅠ进行双酶切,将SIRPα基因克隆到pLenti-GFP载体中,构建pLenti-SIRPα-GFP质粒;将pLenti-SIRPα-GFP质粒转化DH5α大肠杆菌感受态细胞,对重组质粒pLenti-SIRPα-GFP进行DNA测序;采用Lipofectamine 3000转染试剂将pLenti-SIRPα-GFP质粒转染到HEK293T细胞中,通过荧光显微镜观察SIRPα-GFP在稳定转染HEK293T细胞中的表达,采用Western blotting法检测HEK293T细胞中SIRPα-GFP融合蛋白的表达.结果:酶切鉴定和DNA测序,重组质粒pLenti-SIRPα-GFP构建成功.荧光显微镜检测,SIRPα-GFP融合蛋白在HEK293T细胞膜上表达.Western blotting法检测,SIRPα蛋白在pLenti-SIRPα-GFP质粒转染的HEK293T细胞中成功表达.结论:成功构建了pLenti-SIRPα-GFP质粒.通过在HEK293T细胞中转染pLenti-SIRPα-GFP质粒,成功制备了稳定表达SIRPα-GFP的细胞系.SIRPα-GFP蛋白定位于HEK293T细胞的细胞膜上.

著录项

  • 来源
    《吉林大学学报(医学版)》 |2020年第5期|925-929|共5页
  • 作者单位

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

    北华大学医学技术学院肿瘤靶向治疗重点实验室 吉林 吉林132013;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 免疫细胞生物学;
  • 关键词

    信号调节蛋白α; 绿色荧光蛋白; 真核表达载体; 细胞转染;

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