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Binding constant determination of high-affinity protein-ligand complexes by electrospray ionization mass spectrometry and ligand competition

机译：通过电喷雾电离质谱和配体竞争结合高亲和力蛋白 - 配体配合物的结合常数

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We describe an approach for the determination of binding constants for protein-ligand complexes with electrospray ionization mass spectrometry, based on the observation of unbound ligands competing for binding to a protein target. For the first time, dissociation constants lower than picomolar could be determined with good accuracy by electrospray ionization mass spectrometry. The presented methodology relies only on the determination of signal intensity ratios for free ligands in the low mass region. Therefore, all the advantages of measuring low masses with mass spectrometry, such as high resolution are preserved. By using a reference ligand with known binding affinity, the affinity of a second ligand can be determined. Since no noncovalently bound species are observed, assumptions about response factors are not necessary. The method is validated with ligands binding to avidin and applied to ligands binding to p38 mitogen-activated protein kinase.
机译：我们描述了一种方法，用于测定用电喷雾电离质谱法测定蛋白质 - 配体复合物的结合常数，基于未结合的配体对蛋白质靶标进行竞争的未结合配体的观察。 首次，通过电喷雾电离质谱法以良好的精度测定低于皮摩尔的解离常数。 所提出的方法仅依赖于测定低质量区域中的游离配体的信号强度比。 因此，保留了用质谱法测量低质量的所有优点，例如高分辨率。 通过使用具有已知结合亲和力的基准配体，可以确定第二配体的亲和力。 由于没有观察到非共价束缚物种，因此不需要对响应因子的假设。 该方法用与抗生物素蛋白结合的配体验证并施加到与P38丝裂原激活蛋白激酶结合的配体。

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