类胡萝卜素和类胡萝卜素原与多元酚联合使用的配方

本发明涉及亲脂性成亲水性抗氧化剂的联合使用和新配方，和其在治疗、食品和化妆品领域中的用途。这些配方是基于类胡萝卜素、类胡萝卜素原（procaroteioids）（和其衍生物）与纯的或含在提取物中的儿茶素（catechic）和黄酮木脂素结构的多元酚的联合使用。

文献中已熟知通过饮食或药物和营养配方服用维生素E、β-胡萝卜素、番茄红素和癸烯醌（辅酶Q10）明显减低心血管疾病的发病率，其还在预防某些肿瘤中起重要作用。至于类胡萝卜素的抗粥样硬化活性，根据最近的研究，类胡萝卜素防止脂蛋白氧化（从而干涉血管对它们的吸收）看来是一个最重要的机制。实际上，从生理角度看类胡萝卜素含在低密度脂蛋白（LDL）中，防止其氧化，它们有效地抵抗粥样硬化损伤的主因（prinum    movens），后者主要发生对内皮组织的损伤〔1-4〕。

类胡萝卜素是细胞水平上有效的抗氧化剂，它们的功能特别在繁殖活跃的细胞中起作用，在这些细胞中基团错误率较高。为支持类胡萝卜素的生物利用度，熟知的有口服后其对紫外辐射所产生损伤的预防作用，已知紫外辐射产生氧游离基，还有其在外周水平上对眼功能的作用。

由于它们对大小血管的作用，二聚和寡聚型的儿茶素结构的多元酚广泛地用于心血管治疗和眼科。这些天然多元酚实际上对毛细血管脆性和渗透性起有益的调节作用，还对内皮起保护作用。基于所谓化合物的生物效应，最近的文献一致认为抗氧化活性为重要的机制。

黄酮木脂素为水飞蓟素和其三个主要组分（水飞蓟素、异水飞蓟素和次水飞蓟素），其特征在于肝和周围水平上明显的抗自由基能力。最近申请人证明从葡萄Vitis    Vinifera中提取的儿茶素原（procyanidole）寡聚物有此活性〔5〕，其它作者还证明从不同疏菜资源提取的一些多元酚物质有此活性〔6，7〕，该系列化合物的另一有趣生物性能是它们具有明显的抗诱变作用。这种特性与抗氧化作用部分相关，其既作用于自动诱变还作用于或由紫外辐射或致突变剂如药品或大气污染物诱导的诱变。

多元酚物质的作用位点与类胡萝卜素和其类似物的作用位点很不相同，因此，从生物角度看同时服用亲脂和亲水化合物产生意外的令人惊异的优势。

类胡萝卜素如维生素E、β-胡萝卜素、番茄红素、辅酶Q10和其异构体已证明是对活化形式的氧非常有效的抗自由基化合物，既在常规的脂质过氧化实验如黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统中有效，还在申请人最近制备的高选择性模型中有效，后者涉及用超声在水介质中将不饱和磷脂脂质过氧化〔8〕。在相同实验中，本发明的多元酚显示活性等于或高于现有化合物。

一些多元酚物质和亲脂性抗氧化剂维生素E和番茄红素在这些实验中所得结果列于表1和2中。

表1-

对OH⁰羟基自由基的清除活性-诱发期

物质 CI₅₀

花色素原A2 1.7×10^-7

来自葡萄Vitis vinifera的90%儿茶素原寡聚物 1.1×10^-7

水飞蓟素 1.2×10^-7

维生素E 1.5×10^-6

番茄红素 2.1×10^-6

表2-对R⁰、R00⁰脂质自由基的清除活性-增长期。

物质 CI₅₀

花色素原A2 4.0×10^-7

来自葡萄Vitis vinifera的90%儿茶素原寡聚物 5.1×10^-7

水飞蓟素 5.2×10^-7

维生素E 1.0×10^-7

番茄红素 1.8×10^-7

番茄红素+来自葡萄vitis Vinifera 1.2×10^-9

的儿茶素原寡聚物

令人惊异地发现，本发明的目的之一，亲水性抗氧化剂与亲脂性抗氧化剂联合使用产生的抗氧化作用在相同浓度下远高于单一实验化合物的作用（表2）。

此发现被另一体外模型证实，其中用酵母聚酶激发人成纤维细胞并用化学发光评价过氧化过程。例如番茄红素和水飞蓟素结合证明抗氧化效果比单一组分惊人地显著（图1）。

用亲脂性抗氧化剂（癸烯醌、维生素E）和亲水性抗氧化剂（从葡萄Vitis    Vinifera中提取的寡聚物）的其它结合得到了相同的结果。

用纯番茄红素进行的体外模型所得结果得到体内模型的证实，其中亲脂性抗氧化剂和亲水性抗氧化剂的联合使用对自由基起重要作用的实验损伤产生意外的有效改善。

作为对照，我们实际上选择了炎症过程模型，其中使用刺激剂（大戟二萜醇酯），它引起生物膜水平的脂质过氧化反应，然后通过自由基链反应增长。

表3显示鼠中抗水肿活性的数据，这是用水飞蓟素、水飞蓟素与富含番茄红素（5%）的亲脂级分结合得到的，该级分通过Licopersicum    aeculentum的干皮用已烷提取制备，并且该级分含番茄红素。数据用实验开始后第6小时测得的水肿减小百分率表示。表3-鼠中水飞蓟素、番茄红素和它们的结合对大戟二萜醇酯水肿的抗水肿活性

物质        剂量μg/鼠        水肿        %减小

对照        --        8.1±0.2        --

水飞蓟素        300        6.3±0.2        22.2NS

150        7.3±0.4        9.9NS

5%番茄红素        200        6.8±0.3        16.0NS

100        7.5±0.4        12.4NS

5%番茄红素 200+100 1.2±0.2^*86.4

+水飞蓟素

5%番茄红素 100+50 5.1+0.0^*37.0

+水飞蓟素

所有以上报告的数据显示两种不同极性的抗氧化剂结合比单一化合物的效力高得多。很可能这种协同作用由于对更多自由基种类的共同作用作用，这使过氧化过程几乎被完全阻断。

当检查这些结合的抗诱变效果时发生了相同的现象，抗氧化组分对这种效果起主要作用，由于涉及预防癌和心血管疾病，这种效果特别重要。

作为举例，表4中报导了从绿茶中提出的多元酚、番茄红素及它们的结合的效果。

表4-从绿茶中提取的儿茶素原寡聚物、番茄红素和它们的结合对鼠伤寒沙门氏菌中自动突变频率的抗诱变活性。

物质        TA98        TA100

mg/平皿        -S9        +S9        -S9        +S9

0        1.0(41)        1.0(48)        1.0(163)        1.0(133)

儿茶素原寡聚物

1.0        1.0        0.8        0.9        1.0

2.5        1.0        0.7        1.1        1.0

5.0        0.5        0.5        0.7        0.9

番茄红素

0.2        1.0        0.9        0.9        0.8

0.4        0.8        0.8        1.0        0.9

0.5        0.7        0.7        0.9        0.8

儿茶素原寡聚物+番茄红素

0.50+0.10        0.6        0.5        0.7        0.7

1.25+0.20        0.5        0.5        0.7        0.8

2.50+0.25        0.4        0.3        0.7        0.7

源自绿茶的多元酚级分中，使用多元酚滴定度为85%（用表棓儿茶素棓酸盐代表）、咖啡因含量低（＜0.3%）的产品。用番茄红素级分与茶多元酚的混合物在Ames试验（鼠伤寒沙门氏菌TA-100和TA-98）中得到约50%的自动突变抑制。

这种效果证明与代谢活化作用（-S9或+S9）无关。在酿酒酵母株上得到类似效果，其中对自动突变的作用控制在核水平，更重要的是控制在线粒体信息水平。

两种级分的比例1份多元酚对1份亲脂抗氧化剂可以变化，决定于不同配方的应用领域。

在这些配方中用作赋形剂，特别重要的是磷脂（天然的和合成的）和不同磷脂含量的粗卵磷脂。磷脂是促进儿茶素和黄酮木脂素结构的多元酚物质吸收的特别适合的载体。这些联合使用的优先服用形式是软明胶胶囊，但也可以用硬明胶胶囊、纤维素或其它基质以及栓剂和经皮肤的方式。下列实施例进一步说明本发明。

实施例Ⅰ-花生油中含水飞蓟素和番茄红素的配方

将200mg含5%番茄红素的Licopersicum    aesculentum的亲脂提取物与50mg水飞蓟素、50mg天然大豆磷脂酰胆硷和50mg花生油混合;将产品装入软明胶胶囊中。剂量为每天1-5个胶囊。

实施例Ⅱ-花生油中含儿茶素原寡聚体和番茄红素的配方

将200mg含5%番茄红素的Licopersicum    aesculentum的亲脂提取物与80mg来自葡萄Vitis    Vinifera的儿茶素原、50mg天然大豆磷脂酰胆硷和50mg花生油混合;将产品装入软明胶胶囊中。剂量为每天1-5个胶囊。

实施例Ⅲ-含癸烯醌和儿茶素原寡聚物的配方

将20mg癸烯醌与20mg维生素E和80mg来自绿茶的儿茶素原寡聚物混合;将此混合物分散在含50mg纯化大豆磷脂的100mg花生油中。该悬浮液可装入胶囊，或吸附在适当的赋形剂上制成片剂。剂量为每天1-3个胶囊。

实施例Ⅳ-含泛氢醌（还原的癸烯醌）、不饱和磷脂和花色素原（Proanthocyanidin）A2的配方

将20mg泛氢醌与100mg大豆磷脂酰胆硷混合，并溶解在100mg花生油中。向此溶液中加入80mg花色素原A2。此悬浮液可加入软明胶胶囊中。剂量为每天1-3个胶囊。

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