利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法

技术领域

本发明涉及一种利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法。

背景技术

欧洲越橘为落叶灌木，叶较小，呈卵形，花为球形，为玫瑰色带淡绿色。分布于欧洲。野生欧洲越橘 大量分布在斯堪的纳维亚半岛(挪威)。

欧洲越橘，学名Vacciniummyrtillus，在英国称之bilberry，bleaberry，wineberry，whortleberries， 在美国称之为huckleberries。自远古以来就作为食用植物。在16世纪的欧洲始作为药用植物，叶子习惯 上已用于收敛、抗炎、抗菌、强壮，有弱的抗糖尿病活性，已被用作治疗糖尿病的各种植物药合剂中。叶 中含一种组分(glucoquinine)实验表明可降低血糖，根据现代研究在德国已建议叶子的制剂用作治疗风湿和 痛风的药物。属于杜鹃花科(Ericaceae)，越橘属(Vacciniumspp.)。通常所说的欧洲越橘是包含Vaccinium myrtillus在内的一系列植物品种，如覆盆子(blaeberry)等；当特指单一植物时，即是指Vacciniummyrtillus。

欧洲越橘含有大量的黄酮类化合物，其中以花青素类为主，包括花青素(cyanidin)、翠雀花素、芍 药花素、矮牵牛素、棉葵花素等及其牛乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖苷。

发明内容

本发明采用微波提取，以乙醇为溶剂，大大降低了提取时间，提高了生产效率，方法简单。大孔树脂 再生方便迅速，适合大生产，且成本大大降低，水洗脱除去大部分杂质；大孔树脂和硅胶柱层析结合，分 离和纯化效果好，所以本发明所得产品纯度高，显著提高有效成分含量，克服了常规提取方法纯度低、时 间长等缺点。

利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤如下：

(1)微波逆流提取：

欧洲越橘粉碎至60-80目，加入60-75％乙醇溶液，在400～600W，时间80min～120min，8～12倍料 液比条件下微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；

(2)大孔树脂吸附：

回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201、D101、AB-8树脂中的一种，树脂 柱的高径比为8∶1-15∶1；

(3)纯水洗脱：

在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为3-5BV；

(4)乙醇洗脱：

再用60％-95％的乙醇溶液在1-3BV/h流速、洗脱体积为6-8BV下进行洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪 监测；

(5)得欧洲越橘花青素：

收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；

(6)硅胶柱层析：

将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样，上工业级 柱200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95～85∶2比例进行洗脱，薄层色谱法 跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；

(7)洗脱液在压力-0.07～0.08Mpa，60℃条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在 1.08～1.12。

(8)浓缩液在70～80℃进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25％以上。

具体实施方式：

实施例1：利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤包括：

(1)微波逆流提取：

欧洲越橘粉碎至60目，加入75％乙醇溶液，在400W，时间80min，8倍料液比条件下微波逆流提取， 正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；

(2)大孔树脂吸附：

回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为AB-8树脂，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1；

(3)纯水洗脱：

在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV；

(4)乙醇洗脱：

再用60％、70％、75％、80％、85％、95％的乙醇溶液在1BV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱， 洗脱液用薄层层析跟踪监测；

(5)得欧洲越橘花青素：

收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；

(6)硅胶柱层析：

将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱 200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95∶2或85∶2比例进行洗脱，薄层色谱 法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；

(7)洗脱液在压力-0.07～0.08Mpa，60℃条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在 1.08～1.12。

(8)浓缩液在70～80℃进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25％以上。

实施例2：利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤包括：

(1)微波逆流提取：

欧洲越橘粉碎至80目，加入60％乙醇溶液，在400W，时间100min，10倍料液比条件下微波逆流提取， 正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；

(2)大孔树脂吸附：

回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为DA201树脂中，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1；

(3)纯水洗脱：

在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV；

(4)乙醇洗脱：

再用60％、70％、75％、80％、85％、95％的乙醇溶液在1BV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱， 洗脱液用薄层层析跟踪监测；

(5)得欧洲越橘花青素：

收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；

(6)硅胶柱层析：

将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样，上工业级柱 200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95∶2或85∶2比例进行洗脱，薄层色谱 法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；

(7)洗脱液在压力-0.07～0.08Mpa，60℃条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在 1.08～1.12。

(8)浓缩液在70～80℃进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25％以上。

实施例3：利用微波逆流提取、大孔吸附树脂吸附纯化欧洲越橘花青素的方法，其步骤包括：

(1)微波逆流提取：

欧洲越橘粉碎至80目，加入70％乙醇溶液，在400W，时间100min，12倍料液比条件下微波逆流提取， 正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动；

(2)大孔树脂吸附：

回收乙醇至无醇后，将所得溶液上大孔树脂吸附，型号为D101树脂中，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1；

(3)纯水洗脱：

在常温常压下，以1BV/h流速，先用蒸馏水洗脱，洗脱体积为5BV；

(4)乙醇洗脱：

再用60％、70％、75％、80％、85％、95％的乙醇溶液在1BV/h流速、洗脱体积为6BV下进行洗脱， 洗脱液用薄层层析跟踪监测；

(5)得欧洲越橘花青素：

收集乙醇洗脱液浓缩，回收乙醇，减压干燥，得到欧洲越橘花青素半成品粗粉；

(6)硅胶柱层析：

将所得欧洲越橘花青素粗粉溶于醋酸乙酯加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样，上工业级柱 200-300目硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇或石油醚-乙酸乙酯溶液以95∶2或85∶2比例进行洗脱，薄层色谱 法跟踪检测，收集欧洲越橘各阶段洗脱液；

(7)洗脱液在压力-0.07～0.08Mpa，60℃条件下，经减压回收乙醇，得到欧洲越橘浓缩液，其比重在 1.08～1.12。

(8)浓缩液在70～80℃进行真空干燥，得欧洲越橘花青素成品，含量在25％以上。