一种犬促甲状腺激素检测试剂盒及其检测方法

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种犬促甲状腺激素检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

犬促甲状腺激素(缩写:TSH)是由腺垂体分泌的激素，主要负责调节甲状腺细胞的增殖、甲状腺血液供应以及甲状腺激素的合成和分泌，在维持正常甲状腺功能中起最重要的调节作用。腺垂体中TSH分泌主要受到互相拮抗的两种机制的精细调控：一方面，下丘脑分泌的TSH释放激素(TRH)可以促进腺垂体中TSH分泌；另一方面，甲状腺激素(T3、T4)可以反馈性地抑制腺垂体中TSH分泌。当甲状腺功能改变时，游离甲状腺浓度的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显著调整，甲状腺激素水平15％-20％的改变可引起TSH水平50％-100％的变化。因此，TSH检测是衡量甲状腺功能的重要初筛试验，血清或血浆中TSH的含量变化是甲状腺疾病筛查和诊断过程中可依据的重要指标。

目前，TSH含量检测常用的方法包括：免疫放射分析法、酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法、电化学发光免疫分析法和胶体金免疫层析法等。国内医院检验科通常采用化学发光免疫分析法和电化学发光免疫分析法来测定血清或者血浆中TSH水平，这两种方法精准性较高但需要大型精密仪器及专业操作人员；免疫放射分析法检测时间长，致使临床价值受到很大的限制，已基本退出市场；胶体金免疫层析法检测速度快，但是灵敏度不高，检测通量低，不适合样本量大(>100样)的时候使用。酶联免疫分析法将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试，具有检测速度快、费用低廉、仪器简单易携等优点，可用于现场检验，但是酶联免疫分析法的灵敏度和特异性还有待于提高。

发明内容

本发明的目的在于创新出一种灵敏度高、检测通量大、成本低制备方便的的犬促甲状腺激素检测的试剂盒，应用于宠物医院和犬生产繁殖单位使用，使得促甲状腺激素的检测简洁、准确和高效，从而指导生产实践。

为实现上述目的，本申请提供了一种犬促甲状腺激素检测的试剂盒，包括微孔板、酶标液、封闭试剂、显色试剂、样品稀释液、标准样品和终止试剂，其中，所述微孔板上预包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ，所述酶标液为HRP标记的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。

作为本申请的进一步改进，所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ由犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ经免疫制备而得；所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ由犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ经免疫制备而得。

作为本申请的进一步改进，所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ是经如下免疫方法制备而得：S1、将200μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ与弗氏完全佐剂等量混合均匀，乳化后，向选用的第一只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内注射100μl，每隔2～3周，对选用的所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠进行加强免疫；S2、以纯犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ注射小鼠腹腔和尾静脉各50μg，3d后取所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞，无菌条件下，将所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞和SP2/0细胞进行融合，使融合后的细胞在HAT培养基中生长，置于有饲养层细胞的培养板中；S3、通过阳性克隆筛选和克隆化培养得到杂交瘤细胞株Ⅰ，将所述杂交瘤细胞株Ⅰ接种于预先用诱导剂处理的第二只6周龄Balb/c雌小鼠，收取腹水，纯化后，用ELISA法测定抗体效价，得到犬促甲状腺激素单克隆抗体I。

作为本申请的进一步改进，所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ是经如下免疫方法制备而得：S1、将200μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ与弗氏完全佐剂等量混合均匀，乳化后，向选用的第三只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内注射100μl，每隔2～3周，对选用的所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠进行加强免疫；S2、以纯犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ注射小鼠腹腔和尾静脉各50μg，3d后取所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞，无菌条件下，将所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞和SP2/0细胞进行融合，使融合后的细胞在HAT培养基中生长，置于有饲养层细胞的培养板中；S3、通过阳性克隆筛选和克隆化培养得到杂交瘤细胞株Ⅱ，将所述杂交瘤细胞株Ⅱ接种于预先用诱导剂处理的第四只6周龄Balb/c雌小鼠，收取腹水，纯化后，用ELISA法测定抗体效价，得到犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。

作为本申请的进一步改进，所述封闭试剂为含有0.01％Proclin200的5％的牛奶，所述样品稀释液为0.01mol/L的PBS缓冲溶液，所述显色试剂为ABTS，所述终止试剂为1.25％的NaF溶液，所述微孔板为NUNC板，所述标准样品中促甲状腺激素的含量为0.2ug/ml。

作为本申请的进一步改进，在所述微孔板上包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ的步骤如下：S1、应用碳酸盐缓冲溶液对犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ进行稀释；S2、将稀释后的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ按100ul/孔的加入量加入所述微孔板内，4℃下静置包被，包被后将多余的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ吸去；S3、应用所述封闭试剂对包被后的所述微孔板进行封闭，弃去多余的所述封闭试剂，扣干；S4、将所述微孔板置于室温真空环境下干燥，得到预包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ的微孔板，真空密封环境下保存，备用。

作为本申请的进一步改进，步骤S1中，稀释后所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ的浓度为0.1mg/ml～0.25mg/ml；步骤S2中，所述静置包被的时间为15h～23h；步骤S3中，所述封闭的时间为30min。

作为本申请的进一步改进，所述酶标液由以下方法制备得到：S1、HRP前处理：将1mgHRP溶于1000ul 0.25mol/L的PBS缓冲溶液中，充分溶解后，再加入25％的戊二醛10ul，充分混合均匀后37℃孵育1h，再加入预冷的无水乙醇0.3ml，充分混合均匀，离心，弃去上清液，收集沉淀；S2、酶标记：将步骤S1中所述的沉淀用1ml 0.05mol/L的碳酸盐缓冲溶液充分溶解，加入浓度为1.5mg/ml的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ，充分混合均匀，置于冷藏箱内静置过夜后，加入0.5ml KH

作为本申请的进一步改进，步骤S1中，所述离心的转速为2500r/min，所述离心的时间为10min。

为实现上述目的，本申请还提供了一种犬促甲状腺激素检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：S1、首先，先应用样品稀释液对待测样本和标准样品进行稀释，所述标准样品至少稀释六个梯度，然后按照100ul/孔的加入量将稀释后的所述待测样本和所述标准样品加入到微孔板内，37℃孵育30min，最后再应用所述样品稀释液洗涤3次，扣干；S2、向步骤S1处理后的所述微孔板内加入酶标液，37℃孵育30min，最后再应用所述样品稀释液洗涤3次，扣干；S3、向步骤S2处理后的所述微孔板内加入显色试剂，37℃显色15min后，再按100ul/孔的加入量向所述微孔板内加入终止试剂；S4、用酶标仪读数，记录所述标准样品和所述待测样本的吸光度数值，应用记录的所述标准样品的吸光度值及促甲状腺激素的浓度制作标准曲线，可知所述待检测样本的犬促甲状腺激素的浓度。

本发明的有益效果在于，本申请通过提供了一种犬促甲状腺激素检测的试剂盒，包括微孔板、酶标液、封闭试剂、显色试剂、样品稀释液、标准样品和终止试剂，其中，所述微孔板上预包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ，所述酶标液为HRP标记的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。能够快速、准确的检测犬促甲状腺激素，成本低，对临床检测有重要意义，可推广性高，市场应用前景广阔，整个检测过程在1.5h内即可完成，通过酶标仪读数，简单处理数据，可知犬血液中的促甲状腺激素含量。此外，本发明检测通量高，在样本数量多的情况下比免疫层析试纸条检测效率更高，检测所需要的仪器也简单，整个实验只需要酶标仪、孵育器即可完成检测，有较强的经济效益，特别适合犬养殖单位和宠物医院使用，成本低，检测实惠，可大量推广。

具体实施方式

为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请具体实施例对本申请技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例，不用来限制本发明的范围。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

为快速、准确的检测犬促甲状腺激素，本发明提供了一种犬促甲状腺激素检测的试剂盒，包括微孔板、酶标液、封闭试剂、显色试剂、样品稀释液、标准样品和终止试剂，其中，所述微孔板上预包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ，所述酶标液为HRP标记的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。本申请中，所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ由犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ免疫制备而得，所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ由犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ免疫制备而得；制备所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ和所述犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ时，选用的物种为6周龄Balb/c雌小鼠4只。

本申请中，所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ是经如下免疫方法制备而得：S1、将200μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ与弗氏完全佐剂等量混合均匀，乳化后，向选用的第一只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内注射100μl，每隔2～3周，对选用的所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠进行加强免疫；S2、以纯犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ注射小鼠腹腔和尾静脉各50μg，3d后取所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞，无菌条件下，将所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞和SP2/0细胞进行融合，使融合后的细胞在HAT培养基中生长，置于有饲养层细胞的培养板中；S3、通过阳性克隆筛选和克隆化培养得到杂交瘤细胞株Ⅰ，将所述杂交瘤细胞株Ⅰ接种于预先用诱导剂处理的第二只6周龄Balb/c雌小鼠，收取腹水，纯化后，用ELISA法测定抗体效价，得到犬促甲状腺激素单克隆抗体I。所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ是经如下免疫方法制备而得：S1、将200μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ与弗氏完全佐剂等量混合均匀，乳化后，向选用的第三只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内注射100μl，每隔2～3周，对选用的所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠进行加强免疫；S2、以纯犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ注射小鼠腹腔和尾静脉各50μg，3d后取所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞，无菌条件下，将所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞和SP2/0细胞进行融合，使融合后的细胞在HAT培养基中生长，置于有饲养层细胞的培养板中；S3、通过阳性克隆筛选和克隆化培养得到杂交瘤细胞株Ⅱ，将所述杂交瘤细胞株Ⅱ接种于预先用诱导剂处理的第四只6周龄Balb/c雌小鼠，收取腹水，纯化后，用ELISA法测定抗体效价，得到犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。

本申请中，作为制备所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ的一实施例，制备方法如下：用犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ型进行免疫制备，首先将200μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ与弗氏完全佐剂等量混合均匀，乳化后，向选用的第一只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内注射100μl；其次，每隔2～3周，对选用的第一只6周龄Balb/c雌小鼠加强免疫，加强免疫的方法为：将50μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ型与弗氏不完全佐剂等量混合均匀，乳化后，取100μl注射到所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内，加强免疫的次数进一步优选为3～5次；再次，以纯犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ注射小鼠腹腔和尾静脉各50μg，3d后取所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞进行细胞融合；最后，在无菌条件下，取所述第一只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞和SP2/0细胞(小鼠骨髓瘤细胞)在融合剂PEG4000作用下，进行融合，融合细胞在HAT(H—Hypoxanthine次黄嘌呤，A—Aminopterin氨基蝶呤，T—Thymidine胸腺嘧啶核苷)培养基的选择性培养液中生长，培养在有饲养细胞层的96孔细胞培养板中。阳性克隆筛选和克隆化培养：通过棋盘滴定法确定TSH(犬促甲状腺激素)10μg/ml的包被浓度。以免疫小鼠抗血清为阳性对照，正常小鼠血清为阴性对照，用ELISA方法对克隆进行阳性筛选，再用有限稀释法进行克隆化培养。经过3～4次的阳性克隆筛选和克隆化培养，可得到杂交瘤细胞株，接种于预先用诱导剂处理的第二只6周龄Balb/c雌小鼠，收取腹水，辛酸法纯化后，用ELISA法测定抗体效价，得到犬促甲状腺激素单克隆抗体I。

本申请中，作为制备所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ的一实施例，制备方法如下：用犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ型进行免疫制备，选用的物种为6周龄Balb/c雌小鼠2只，首先将200μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ与弗氏完全佐剂等量混合均匀，乳化后，向选用的第三只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内注射100μl；其次，每隔2～3周，对选用的第三只6周龄Balb/c雌小鼠加强免疫，加强免疫的方法为：将50μg犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ型与弗氏不完全佐剂等量混合均匀，乳化后，取100μl注射到所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠的腹腔内，加强免疫的次数进一步优选为3～5次；再次，以纯犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ注射小鼠腹腔和尾静脉各50μg，3d后取所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞进行细胞融合；最后，在无菌条件下，取所述第三只6周龄Balb/c雌小鼠的脾细胞和SP2/0细胞(小鼠骨髓瘤细胞)在融合剂PEG4000作用下，进行融合，融合细胞在HAT(H—Hypoxanthine次黄嘌呤，A—Aminopterin氨基蝶呤，T—Thymidine胸腺嘧啶核苷)培养基的选择性培养液中生长，培养在有饲养细胞层的96孔细胞培养板中。阳性克隆筛选和克隆化培养：通过棋盘滴定法确定TSH(犬促甲状腺激素)10μg/ml的包被浓度。以免疫小鼠抗血清为阳性对照，正常小鼠血清为阴性对照，用ELISA方法对克隆进行阳性筛选，再用有限稀释法进行克隆化培养。经过3～4次的阳性克隆筛选和克隆化培养，可得到杂交瘤细胞株，接种于预先用诱导剂处理的第四只6周龄Balb/c雌小鼠，收取腹水，辛酸法纯化后，用ELISA法测定抗体效价，得到犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。

本申请中，作为优选的实施例，所述封闭试剂为含有0.01％Proclin200的5％的牛奶，所述样品稀释液为0.01mol/L的PBS缓冲溶液，所述显色试剂为ABTS，所述终止试剂为1.25％的NaF溶液，所述微孔板为NUNC板，进一步优选的，所述微孔板的材质为高结合力NUNC板，所述标准样品中促甲状腺激素的含量为0.2ug/ml。

本申请中，在所述微孔板上包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ的步骤如下：S1、应用碳酸盐缓冲溶液对犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ进行稀释；S2、将稀释后的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ按100ul/孔的加入量加入所述微孔板内，4℃下静置包被，包被后将多余的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ吸去；S3、应用所述封闭试剂对包被后的所述微孔板进行封闭，弃去多余的所述封闭试剂，扣干，进一步优选的，所述封闭试剂为5％的牛奶，封闭时间为30min；S4、将所述微孔板置于室温真空环境下干燥，过夜，得到预包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ的微孔板，真空密封环境下保存，如铝箔袋加干燥剂抽真空密封保存，备用。本申请中，作为优选的实施例，步骤S1中，所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ的浓度范围为0.1～0.25mg/ml，实现该浓度的方法为将所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ与所述碳酸盐缓冲溶液按体积比为1:2000～1：5000配制而成；步骤S2中，所述静置包被的时间为15h～23h；步骤S3中，所述封闭的时间为30min。

本申请中，所述酶标液由以下方法制备得到：S1、HRP前处理：将1mgHRP溶于1000ul0.25mol/L的PBS缓冲溶液中，充分溶解后，再加入25％的戊二醛10ul，充分混合均匀后37℃孵育1h，再加入预冷的无水乙醇0.3ml，充分混合均匀，离心，弃去上清液，收集沉淀；S2、酶标记：将步骤S1中所述的沉淀用1ml 0.05mol/L的碳酸盐缓冲溶液充分溶解，加入浓度为1.5mg/ml的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ，充分混合均匀，置于冷藏箱内静置过夜，后加入0.5ml KH

本申请中，为快速、准确的检测犬促甲状腺激素，本申请还提供了一种犬促甲状腺激素检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：S1、首先，先应用样品稀释液对待测样本和标准样品进行稀释，所述标准样品至少稀释六个梯度，六个梯度的所述犬促甲状腺激素的浓度分别为200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml、25ng/ml、12.5ng/ml和6.25ng/ml，然后按照100ul/孔的加入量将稀释后的所述待测样本和所述标准样品加入到微孔板内，37℃孵育30min，最后再应用所述样品稀释液洗涤3次，扣干；S2、向步骤S1处理后的所述微孔板内加入酶标液，37℃孵育30min，最后再应用所述样品稀释液洗涤3次，扣干；S3、向步骤S2处理后的所述微孔板内加入显色试剂，37℃显色15min后，再按100ul/孔的加入量向所述微孔板内加入终止试剂；S4、用酶标仪读数，记录所述标准样品和所述待测样本的吸光度数值，应用记录的所述标准样品的吸光度值及促甲状腺激素的浓度制作标准曲线，可知所述待检测样本的犬促甲状腺激素的浓度。

本申请中，提供了一种犬促甲状腺激素检测试剂盒的检测方法的一个具体实施方式：将犬血清或者血浆用PBS稀释50倍后加入微孔板内，100ul/孔，同时加入标准样品，标准样品品需要梯度稀释6个，血清或血浆中的犬促甲状腺激素会与微孔板内的抗原特异性结合，37度孵育30min，然后洗涤3次，扣干，加入稀释后的酶标液100ul，37度孵育30min，然后洗涤3次，扣干，加入ABTS，室温显色30min或37℃显色15min后，用酶标仪读数，波长405nm和492nm，如不能在2min内读数，应加入终止试剂100ul/孔，15min内读数，所得结果样品OD＝△405-△492，做标准曲线，而后可知每个样本的促甲状腺激素含量，每次检测必须做标准品梯度，且与提供的试剂盒提供的标准曲线相关系数R>0.99，实验有效，每次实验最多可测90个样本，在1.5h内完成全部测试。进一步优选的，本检测方法中，所述酶标液稀释方法为：取1ul上述制备的所述酶标液充分溶解到99ul所述样品稀释液中。

为了检测本试剂盒的性能，分别做如下检测：

敏感性：将犬促甲状腺激素含量100ng/ml的标准品做2倍梯度稀释，与化学发光方法比对，结果如表一所示：

表一：本发明试剂盒与化学发光法对犬促甲状腺激素敏感性测试结果比对

由表一的测试结果显示，本试剂盒的最低检出限为3.125ng/ml，表明本试剂盒具有良好的敏感性。

特异性：随机选择104份临床犬血清样本用本发明试剂盒和化学发光方法做检测，所得犬促甲状腺激素含量范围样本数量如表二所示：

表二：不同犬促甲状腺激素含量的犬血清样本分析结果

由表二的测试结果显示，本发明试剂盒与化学发光法检测结果符合率100％，表明本发明试剂盒对犬促甲状腺激素的检测具有良好的特异性。

稳定性：将试剂盒在37℃培养箱内，分别放置7d，14d，28d后取出检测敏感性，结果与未作破坏性实验数据一致，表明本发明试剂盒具有良好的稳定性。

批内变异：取25ng/mL、100ng/mL两水平质控品分别进行32孔平行实验，计算测定值的平均值(v)和标准差(s)，按公式CV＝s/v×100％计算变异系数，批内变异系数CV分别为4.21％、3.28％；批间变异：选择5批不同微孔板样品对同一份血清进行3次重复测定，计算其批间变异系数(CV％)，批间变异CV小于10％。通过批内变异和批间变异测试结果表明，本发明试剂盒具有良好的精密度。

综上所述，本申请通过提供了一种犬促甲状腺激素检测的试剂盒，包括微孔板、酶标液、封闭试剂、显色试剂、样品稀释液、标准样品和终止试剂，其中，所述微孔板上预包被犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ，所述酶标液为HRP标记的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。本发明的试剂盒是一种犬促甲状腺激素酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒，保护的重点在于微孔板、酶标液以及标准样品，所述微孔板为经过所述犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ包被的微孔板，所述酶标液是一种酶标二抗，为HRP标记的犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ。

本申请中所述的犬促甲状腺激素重组抗原Ⅰ和犬促甲状腺激素重组抗原Ⅱ是经过大量实验选择的抗原种类，本申请中的微孔板的包被条件是针对犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅰ进行了一系列包被条件的探索实验而得出，所述的酶标液也是针对犬促甲状腺激素单克隆抗体Ⅱ进行了一系列的酶标记实验而得到，本申请所应用的试剂盒更有利于检测，质量更稳定，批间批内差异性小，敏感性更高，适合长期保存；本申请中所述的酶标液的使用对于犬促甲状腺激素有更佳的检测敏感性和特异性，和量子点标记免疫层析试纸条一致，抗体更有利于保存；本申请中所述的标准样品较佳的确认检出率，保证实验结果的稳定有效；该试剂盒需要借助酶标仪读取数据，通过提供的数据处理软件，简单操作即可完成促甲状腺激素含量准确测定，从而对后续治疗提出建议，适合养殖单位和宠物医院使用，实验流程简单，适合基层从业人员使用。

因此，本发明的试剂盒能够快速、准确的检测犬促甲状腺激素，成本低，对临床检测有重要意义，可推广性高，市场应用前景广阔，整个检测过程在1.5h内即可完成，通过酶标仪读数，简单处理数据，可知犬血液中的促甲状腺激素含量。此外，本发明检测通量高，在样本数量多的情况下比免疫层析试纸条检测效率更高，检测所需要的仪器也简单，整个实验只需要酶标仪、孵育器即可完成检测，有较强的经济效益，特别适合犬养殖单位和宠物医院使用，成本低，检测实惠，可大量推广。

虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施方式中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。