新型(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物及其用途

技术领域

本公开涉及新型(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物，或其药学上可接受的盐；其制备方法；以及包含其作为活性成分通过调节异常来用于预防或治疗ASK-1介导的疾病的用途。

背景技术

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号级联涉及将各种细胞外和细胞内队列引导到细胞应激反应，包括细胞生长、分化、炎症和凋亡。MAPK以不同类型(如MAP3K、MAP2K和MAPK)存在。MAPK3直接响应于环境信号并磷酸化MAP2K，MAP2K进而磷酸化特定的MAPK。随后，MAPK用于通过磷酸化细胞底物(包括调节基因表达的转录因子)来介导适当的细胞反应。

凋亡信号调节激酶1(ASK1)，其也称为丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶5(MAP3K5)，是MAP激酶激酶激酶(MAP3K)家族的一员，其活化c-Jun N末端蛋白激酶(JNK)和p38 MAP激酶。

ASK1由一系列各种刺激(包括氧化应激、活性氧(ROS)、LPS、TNF-α、FasL、内质网(ER)应激和细胞内钙流入)活化，并因此活化c-Jun N末端蛋白激酶(JNK)和p38 MAP激酶。

ASK1蛋白的磷酸化可以根据细胞类型导致细胞凋亡或其他细胞反应。据报道，ASK1活化与大范围的疾病相关，包括神经退行性疾病、心血管疾病、炎症性疾病、自身免疫性疾病和代谢障碍。另外，ASK1在心身疾病中发挥着至关重要的作用，例如肾病、糖尿病性肾病、慢性肾病、纤维化(包括肺纤维化和肾纤维化)、呼吸系统疾病(包括慢性阻塞性肺病(COPD)和急性肺损伤)以及急性和慢性肝病。

因此，开发具有抑制ASK1信号复合物功能的治疗剂有望补救或改善需要预防和治疗此类大范围疾病的患者的生活。

发明内容

技术问题

本发明人进行了大量工作来开发可以抑制ASK-1活性的新型化合物，而作为结果，他们证实了一系列(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物可以有效地抑制ASK-1活性，并因此可以用于预防和治疗ASK-1介导的疾病，从而完成了本发明。

问题的解决方案

本公开的目的是提供(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物或其药学上可接受的盐。

本公开的另一个目的是提供一种用于制备前述(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物的方法。

本公开的又另一个目的是提供一种用于预防或治疗ASK-1介导的疾病的药物组合物，其包括前述(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

本公开的又另一个目的是提供一种用于预防或治疗ASK-1介导的疾病的方法，包括向有需要的受试者施用前述药物组合物。

发明的有益效果

该新型(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物或其药学上可接受的盐表现出对ASK-1活性的抑制效果，并且因此可以有效地用于预防和治疗ASK-1介导的疾病。

具体实施方式

在本公开的一个方面，为了实现上述目的，提供了(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物或其药学上可接受的盐。

在本公开的另一个方面，提供了一种用于制备(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物的方法。

在本公开的又另一个方面，提供了一种用于预防或治疗ASK-1介导的疾病的药物组合物，其包括(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

在本公开的又另一个方面，提供了一种用于预防或治疗ASK-1介导的疾病的方法，包括向有需要的受试者施用该药物组合物。

在下文中，将详细地描述本公开。

下面列出的是用于描述本公开化合物的各种概念的定义。

除非另外限定于具体的实例，否则无论单独的还是作为更大基团的一部分，这些定义适用于整个说明书中使用的术语。

术语“烷基”是指直链、支链或环状烃基，并且每个碳原子可以任选地被一个或多个取代基取代。

术语“烷氧基”是指-O-烷基，并且烷基如以上所定义。

术语“芳基”是指包括苯基、萘基等的芳族基团。芳基可以任选地被一个或多个取代基取代。

术语“杂芳基”是指含有1至4个选自N、O和S的杂原子的饱和、部分饱和或芳族基团，其可以任选地与苯基或环烷基稠合。

术语“卤素(halo/halogen)”是指选自由氟、氯、溴或碘组成的组的取代基。

除非另有定义，否则本文使用的术语和缩写均具有其原始含义。

本公开的(异丙基-三唑基)吡啶基取代的苯并噁嗪酮或苯并噻嗪酮衍生物可以是由以下化学式1表示的化合物：

[化学式1]

在上述化学式1中，

X是O或S；

R

R

该芳基或杂芳基是未取代的，或被选自由以下组成的组中的至少一者取代：C

例如，在上述化学式1中，R

具体地，在上述化学式1中，R

具体地，在上述化学式1中，R

例如，在本公开的化合物中，芳基或杂芳基可以是未取代的，或可以被选自由以下组成的组中的至少一者取代：甲基、异丙基、异丁基、异戊基、环丙基、环丙基甲基、乙氧基乙基、二氟甲基、氰基环丙基、甲硫基、甲磺酰基、四氢呋喃基和吡唑基甲基。然而，本公开不限于此。

更具体地，本公开的化合物可以是

1. 6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

2. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(4-(甲磺酰基)苯基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

3. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(吡啶-4-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

4. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(4-甲基嘧啶-2-基氨基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

5. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

6. 6-(1-(1-乙氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

7. 6-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

8. 6-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

9. 6-(1-异丁基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

10. 6-(4-(二氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

11. 6-(1-异戊基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

12. 1-(4-(3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-4-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[e][1,3]噁嗪-6-基)苯基)环丙腈，

13. 6-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

14. 6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

15. 6-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

16. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-6-(嘧啶-5-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

17. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

18. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

19. 6-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

20. 6-(1-(1-乙氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮，

21. 6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮，

22. 6-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮，

23. 6-(2-环丙基嘧啶-5-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮，

24. 6-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮或

25. 3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮，但不限于此。

另外，本公开的化合物可以以药学上可接受的盐的形式存在。由药学上可接受的游离酸形成的酸加成盐可以用作盐。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指化合物的任何有机或无机加成盐，其具有的浓度使得其表现出对于患者相对无毒且无害的有效作用，并且由该盐引起的副作用不削弱由化学式1表示的化合物的有益作用。药学上可接受的盐可以包括由酸形成的酸加成盐，该酸可以形成含有药学上可接受的阴离子的无毒酸加成盐，例如无机酸(如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢溴酸、氢碘酸等)、有机碳酸(如酒石酸、甲酸、柠檬酸、乙酸、己二酸、三氯乙酸、三氟乙酸、葡萄糖酸、苯甲酸、乳酸、富马酸、马来酸等)或磺酸(如甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸或萘磺酸等)。根据本公开的化学式1的化合物可以通过常规方法转化为其盐。

酸加成盐可以通过常规方法制备，例如，通过将化合物溶解在过量的酸性水溶液中，随后使用水溶性的有机溶剂(如甲醇、乙醇、丙酮或乙腈)沉淀该盐。可以加热化合物等摩尔量的酸或醇(例如，乙二醇单甲醚)和水，并且随后，可以通过蒸发干燥混合物，或者可以抽吸过滤沉淀的盐。

此外，可以使用碱制备药学上可接受的金属盐。例如，通过以下获得碱金属盐或碱土金属盐：将化合物溶解在过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，随后过滤不溶解的化合物盐，并且蒸发并干燥滤液。

除非另外具体说明，否则本公开化合物的药学上可接受的盐可以包括可以存在于化学式1的化合物中的酸性基团或碱性基团的盐，并且可以通过本领域已知的制备盐的方法来制备。

另外，本公开旨在不仅包括化学式1的化合物及其药学上可接受的盐，而且还包括可以由其制备的可能的溶剂化物。

此外，由于本公开的化合物在母体结构及其取代基中具有不对称碳中心，因此它可以作为R-或S-异构体、外消旋混合物、非对映异构体混合物和单个非对映异构体存在，并且所有这些异构体及其混合物均在本公开的范围内。也就是说，如果一个或多个不对称碳存在于化学式1的结构中，则应理解，只要没有单独描述方向，所有立体异构体均包括在本公开的范围内。

由本公开的化学式1表示的化合物可以根据包括以下步骤的方法来制备：使由以下化学式2表示的化合物与R

[化学式2]

在上述化学式2中，

X是O或S；

Y是卤素或胺；并且

R

具体地，该反应可以通过使用钯(0)催化剂的偶联反应来完成，但本公开不限于此。

钯(0)催化剂可以是四(三苯基膦)钯(0)，并且该反应可以在碳酸钾存在下使用二噁烷和水的混合溶剂作为溶剂来进行，但不限于此。在这种情况下，可以将反应温度调节至80℃至100℃，但不限于此。

更具体地，本公开的化学式1的化合物可以根据以下反应方案1来制备。

[反应方案1]

例如，当化学式2中的X是O时，化学式2的化合物可以通过以下来制备：步骤a-1)使6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-胺与2-(苄氧基)-3-R

[化学式3]

在上述化学式3中

Y是卤素或硝基；并且

R

具体地，步骤a-1)可以在1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)和碱的存在下进行，并且步骤a-2)可以通过与对甲醛的环化反应来进行。然而，本公开不限于此。

更具体地，当Y是硝基时，该反应可以进一步包括步骤a-3)：在步骤a-2之后通过还原反应将硝基转化为胺基。

步骤a-2)中使用的碱可以是N-甲基吗啉，但不限于此。此外，步骤a-1)可以使用N,N-二甲基甲酰胺作为溶剂进行，并且步骤a-2)可以使用三氟乙酸作为溶剂进行，但本公开不限于此。另外，在步骤a-1)中，可以将反应温度调节至80℃至100℃，并且在步骤a-2)中，可以将反应温度调节至90℃至110℃，但本公开不限于此。

更具体地，在制备本公开的化学式1的化合物的方法中，当X是O时，化学式2的化合物可以根据以下反应方案2来制备。

[反应方案2]

例如，当在上述化学式2中的X是S时，上述化学式2的化合物可以通过以下来制备：步骤b-1)使6-卤代吡啶甲酸甲酯与肼反应，以获得6-卤代甲基吡啶酰肼，步骤b-2)使6-卤代甲基吡啶酰肼与二甲基甲酰胺二甲基缩醛反应，以获得N'-(6-卤代甲基吡啶酰)-N,N-二甲基甲腙酰胺，步骤b-3)使N'-(6-卤代甲基吡啶酰)-N,N-二甲基甲腙酰胺与异丙胺反应，以获得2-卤代-6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶，以及步骤b-4)使2-卤代-6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶与6-卤代-2,3-二氢-1,3-苯并噻嗪-4-酮反应，以获得由化学式2表示的噻嗪衍生物化合物。

具体地，步骤b-1)可以在70℃至110℃下使用一水合肼在乙醇溶剂中进行，步骤b-2)可以在80℃至120℃下在N,N-二甲基甲酰胺溶剂中进行，步骤b-3)可以在60℃至80℃下在乙酸和乙腈的混合溶剂中进行，并且步骤b-4)可以在80℃至100℃下，在钯(0)催化剂、碳酸铯和4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基黄嘌呤的存在下在N,N-二甲基甲酰胺溶剂中进行。

更具体地，在制备本公开的化学式1的化合物的方法中，当X是S时，化学式2的化合物可以根据以下反应方案3来制备。

[反应方案3]

例如，在完成每个反应后，可以进一步进行分离和/或纯化过程以便提高反应的效率，或增加产物的纯度。分离和纯化过程可以使用本领域已知的任何方法进行，没有限制。

同时，提供上述一系列反应方案仅用于说明本公开化合物的制备方法，并且本公开化合物的制备方法不限于此，并且可以使用本领域已知的方法或适当的修改来进行。

另外，本公开提供了一种用于预防或治疗ASK-1介导的疾病的药物组合物，其包括由化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

此外，本公开提供了一种用于预防或治疗ASK-1介导的疾病的方法，包括向有需要的受试者施用该药物组合物。

具体地，本公开的化合物或其药学上可接受的盐具有抑制ASK-1活性的特征。

如本文所用，术语“预防(preventing)”或“预防(prevention)”是指通过施用药物组合物来抑制或延迟ASK-1介导的疾病的发作、扩散和复发的所有动作。另外，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指通过施用药物组合物来减轻或有利地改变上述疾病的症状的所有动作。

例如，根据本公开的药物组合物可以基于该组合物的总重量，以按重量计0.1％至75％、特别是按重量计1％至50％的量，含有由化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

可以通过施用包括根据本公开的化学式1的化合物的药物组合物来预防或治疗的ASK-1介导的疾病可以包括糖尿病、糖尿病性肾病、肾病、肾纤维化、肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、肝纤维化、肺动脉高血压、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性肺损伤、非酒精性脂肪性肝炎、肝病、酒精性肝病、酒精性肝炎、炎性病症、自身免疫性疾病、增殖性疾病、移植排斥、伴随软骨转换(cartilage turnover)障碍的疾病、先天性软骨畸形或与IL6分泌过多相关的疾病，但该疾病不限于此。

在本公开的具体实施方案中，证实可以通过施用根据本公开的化学式1的化合物有效地抑制ASK-1活性。基于此发现，发现根据本公开的化学式1的化合物可以用于预防或治疗由ASK-1活化引起的疾病。

如本文所用，术语“受试者”是指患有ASK-1介导的疾病或处于患有该疾病风险的所有动物，包括猴、牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠，以及人，并且可以通过向受试者施用本公开的药物组合物来有效地预防或治疗该疾病。本公开的药物组合物可以与常规治疗剂组合施用。

如本文所用，术语“施用”是指通过任何适当的方法将预定的物质引入患者中。本公开的组合物可以通过任何普通途径施用，只要它可以到达所需组织即可。该组合物可以通过腹膜内途径、静脉途径、肌内途径、皮下途径、皮内途径、口服途径、局部途径、鼻内途径、肺内途径或直肠内途径施用，但不限于此。另外，该药物组合物可以通过能够将活性组分递送至靶细胞的任何装置施用。

根据本公开的药物组合物可以含有由化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分，并且可以进一步包括药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。如本文所用，术语“药学上可接受的载体或稀释剂”是指既不对生物体导致显著刺激也不会消除对其施用的化合物的生物活性或特性的载体或稀释剂。另外，如本文所用，术语“药学上可接受的赋形剂”是指添加至药物组合物中的惰性材料，以促进由本公开的化学式1表示的化合物的施用。赋形剂的实例可以包括碳酸钙、磷酸钙、各种类型的糖和淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇，但不限于此。此外，取决于所需目的，根据常规方法，该组合物可以被制备成各种制剂，包括口服制剂，如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊、混悬剂、乳剂、糖浆、气雾剂等，以及无菌注射溶液的注射等。

本公开的药物组合物可以以药学有效量或治疗有效量施用。如本文所用，术语“药学有效量”是指足以以适用于任何医学治疗的合理益处/风险比治疗疾病而不会导致不良反应的量，并且有效剂量水平可以基于包括以下的因素来确定：患者的健康状况、疾病的类型和严重程度、药物的活性、对药物的敏感性、施用方法、施用时间、施用途径和排泄率、治疗持续时间、同时或组合使用的药物以及医学领域中熟知的其他因素。鉴于所有上述要素，重要的是以可以以最小量实现最大效果而无不良反应的剂量施用该组合物。因此，该组合物的剂量可以由本领域技术人员容易地确定。由化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的日剂量可以具体是1mg/kg至1000mg/kg，并且该组合物可以根据需要每天施用一次或每天施用几次。

发明模式

在下文中，提供了优选的实施例来帮助理解本公开。然而，给出这些实施例仅用于说明目的，以帮助更好地理解本公开，并且本公开的范围不旨在局限于这些实施例或受这些实施例的限制。

用于合成本公开化合物的起始材料的各种合成方法是已知的，并且这些起始材料可以从供应商处购买(如果市场上有)。试剂供应商的实例包括Sigma-Aldrich、TCI、Wako、Kanto、Fluorchem、Acros、Alfa、Fluka、Dae-Jung、Combi-Blocks等，但不限于此。此外，除非另有说明，否则所有可商购获得的材料在不进行进一步纯化的情况下使用。

首先，根据以下制备实施例制备实施例中用于合成的化合物。制备实施例是上述反应方案1中的由化学式1表示的化合物的示例性实施方案，并且可以对应于待制备的实施例中的化合物的结构进行适当调整。

制备实施例1：制备6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

步骤1-1)制备2-(苄氧基)-5-溴-N-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺

将6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-胺(240mg，1.18mmol)溶解在5mLN,N-二甲基甲酰胺中，然后向其中添加2-(苄氧基)-5-溴苯甲酸(435mg，1.42mmol)、1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)(897mg，2.36mmol)和N-甲基吗啉(239mg，2.36mmol)，并在90℃下进行搅拌12小时。向其中添加10mL蒸馏水和10mL乙酸乙酯，并且进行萃取以获得有机层。将获得的有机层用20mL饱和氯化铵水溶液洗涤两次，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过mPLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)离心分离，以获得200mg 2-(苄氧基)-5-溴-N-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺作为产物。

步骤1-2)制备6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

将从步骤1-1)获得的2-(苄氧基)-5-溴-N-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(2.20g，4.46mmol)和对甲醛(404mg，13.38mmol)溶解在44mL三氟乙酸中并在100℃下搅拌24小时。将所得产物冷却至室温，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过mPLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)离心分离，以获得620mg 6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮作为标题化合物。

步骤1-3)制备6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

将3mL二噁烷和1mL蒸馏水添加至从步骤1-2)获得的6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮(100mg，0.241mmol)中。然后，向其中添加(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)硼酸(60mg，0.362mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(27.8mg，0.0241mmol)和碳酸钾(66.7mg，0.482mmol)，并在90℃下进行搅拌12小时。在将所得产物冷却至室温后，向其中添加10mL蒸馏水和10mL乙酸乙酯，并且进行萃取以获得有机层。将获得的有机层用20mL饱和氯化铵水溶液洗涤两次，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过mPLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1)离心分离，以获得70mg6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮作为标题化合物。

MS(ESI+)m/z 456(M+H)

制备实施例2：制备6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

步骤2-1)制备6-溴甲基吡啶酰肼

将6-溴吡啶甲酸甲酯(20g，92.60mmol)溶解在20mL乙醇中，向其中添加8.99mL一水合肼，并在90℃下进行回流12小时。将所得产物冷却至室温，并且然后在减压下浓缩。以乙醇与残余物的体积比为10向残余物提供乙醇，搅拌、过滤并干燥，以获得19.33g 6-溴甲基吡啶酰肼作为产物。

步骤2-2)制备(E)-N'-(6-溴甲基吡啶酰)-N,N-二甲基甲腙酰胺

将从步骤2-1)获得的6-溴甲基吡啶酰肼(19.33g，5.24mmol)溶解在57mL N,N-二甲基甲酰胺中，向其中添加78mL二甲基甲酰胺二甲基缩醛，并在100℃下进行搅拌12小时。将所得产物冷却至室温，并且然后在减压下浓缩。以甲基叔丁基醚与残余物的体积比为10向残余物提供甲基叔丁基醚，并且以乙酸乙酯与残余物的体积比为5向残余物提供乙酸乙酯，搅拌并且然后过滤。洗涤所得产物并通过甲基(叔丁基醚):(乙酸乙酯)＝2:1的混合溶液干燥，以获得13.45g(E)-N'-(6-溴甲基吡啶酰)-N,N-二甲基甲腙酰胺作为产物。

步骤2-3)制备2-溴-6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶

将从步骤2-2)获得的(E)-N'-(6-溴甲基吡啶酰)-N,N-二甲基甲腙酰胺(13.45g，49.61mmol)溶解在17mL乙酸和68mL乙腈中，向其中添加异丙胺，并在80℃下进行回流12小时。将所得产物冷却至室温，并且然后过滤，同时使用1N氢氧化钠水溶液将pH调节至8。洗涤所得产物并通过蒸馏水干燥，以获得8g 2-溴-6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶作为产物。

步骤2-4)制备6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

将从步骤2-3)获得的2-溴-6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶(1g，3.8mmol)溶解在10mL甲苯中，然后向其中添加6-溴-2,3-二氢-1,3-苯并噻嗪-4-酮(1.4g，5.7mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.4g，0.4mmol)、碳酸铯(2.2g，6.7mmol)和4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基黄嘌呤(0.4g，0.6mmol)，并在90℃下进行回流12小时。在将所得产物冷却至室温后，向其中添加蒸馏水和二氯甲烷，并且进行萃取以获得有机层。将获得的有机层在减压下浓缩。以乙腈与残余物的体积比为5向残余物提供乙腈，搅拌、过滤并且然后干燥，以获得800mg6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮作为标题化合物。

步骤2-5)制备6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

将2mL N,N-二甲基甲酰胺:(蒸馏水)＝4:1的混合溶液添加至从步骤2-4)获得的6-溴-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮中。然后，向其中添加(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)硼酸(58mg，0.349mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(27mg，0.0232mmol)和碳酸钾(48mg，0.349mmol)，并在90℃下进行搅拌12小时。在将所得产物冷却至室温后，向其中添加5mL蒸馏水和10mL二氯甲烷，并且进行萃取以获得有机层。将获得的有机层用10mL饱和氯化铵水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过mPLC(二氯甲烷:甲醇＝15:1)离心分离，以获得40mg 6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮作为标题化合物。

MS(ESI+)m/z 472(M+H)

实施例1：制备6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 456(M+H)

实施例2：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(4-(甲磺酰基)苯基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 490(M+H)

实施例3：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(吡啶-4-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 413(M+H)

实施例4：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(4-甲基嘧啶-2-基氨基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 443(M+H)

实施例5：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 472(M+H)

实施例6：制备6-(1-(1-乙氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 474(M+H)

实施例7：制备6-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 452(M+H)

实施例8：制备6-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 442(M+H)

实施例9：制备6-(1-异丁基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 458(M+H)

实施例10：制备6-(4-(二氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 479(M+H)

实施例11：制备6-(1-异戊基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 472(M+H)

实施例12：制备1-(4-(3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-4-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[e][1,3]噁嗪-6-基)苯基)环丙腈

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 477(M+H)

实施例13：制备6-(4-((1H-吡唑-1-基)甲基)苯基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 492(M+H)

实施例14：制备6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 470(M+H)

实施例15：制备6-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 458(M+H)

实施例16：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-6-(嘧啶-5-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 428(M+H)

实施例17：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-6-(2-(甲硫基)嘧啶-5-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 474(M+H)

实施例18：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-6-(1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 486(M+H)

实施例19：制备6-(4-环丙基-1H-咪唑-1-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 442(M+H)

实施例20：制备6-(1-(1-乙氧基乙基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-7-甲基-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噁嗪-4-酮

以与制备实施例1相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 488(M+H)

实施例21：制备6-(1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

以与制备实施例2相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 472(M+H)

实施例22：制备6-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

以与制备实施例2相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 472(M+H)

实施例23：制备6-(2-环丙基嘧啶-5-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

以与制备实施例2相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 470(M+H)

实施例24：制备6-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

以与制备实施例2相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 458(M+H)

实施例25：制备3-(6-(4-异丙基-4H-1,2,4-三唑-3-基)吡啶-2-基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)-2,3-二氢-4H-苯并[e][1,3]噻嗪-4-酮

以与制备实施例2相同的方式获得上述化合物。

MS(ESI+)m/z 444(M+H)

实验例1：针对ASK-1酶活性的抑制能力的测定(ADP-Glo

为了评估实施例1至25的化合物对ASK-1酶活性的抑制能力，使用ADP-Glo

通过分析来自所测量RLU值的数据来验证实施例1至25的化合物对ASK-1酶活性的抑制能力。具体地，通过导出用待测试浓度的化合物处理的样品中ASK-1酶的剩余活性百分比来评估对ASK-1酶活性的抑制能力，同时使用未用该化合物处理的样品的RLU值作为100％对照。ASK-1抑制剂的IC

【表1】