RFLP

摘要： 目的 分析细菌感染诊断中应用PCR与RFLP方法快速诊断的价值.方法 将已知菌7株与2013年1月—2017年12月临沂市第三人民医院接诊的临床确诊为生殖道炎症病变35例患者的标本作为研究对象,均进行PCR与RFLP方法快速诊断,将快速诊断结果与临床诊断进行比较.结果 PCR诊断已知菌阳性率为85.71％(6/7),而PFLP诊断均为100.00％;已知菌的PCR扩增产物酶切片片段长度实验结果与RFLP电子克隆结果基本一致,差异无统计学意义(Χ2=1.0048、2.0051、3.0116、3.0452,P>0.05).结论 相比传统细菌培养法诊断细菌感染,PCR与RFLP方法快速诊断有着快速、灵敏、准确等优势,可以明显缩短诊断时间,可直接鉴定临床标本,值得借鉴.

摘要： Cotton is an economically important natural fiber in the world, whose seeds are used as food and fiber used in the manufacturing of textiles. Cotton is naturally a renewable synthetic fiber which is derived from petroleum. Restriction in conventional breeding program to hereditary change may be because of those of information something like yield revenue and fiber quality of traits. Vitally, the genome representation of the cotton for various traits is the basic need for breeding purposes. The present review discusses the issues of conventional breeding and genomics resources & efforts are utilized to enhance the yield of cotton.

摘要： 本研究采用16S rDNA PCR-RFLP、IGS PCR-RFLP和16S rDNA基因测序和系统发育分析等分子鉴定方法,对分离的汝州白三叶草共生根瘤菌进行了多样性研究.结果表明,21株供试菌株仅产生了一种16S rDNA酶切图谱组合类型,通过IGS PCR-RFLP又把所有的供试菌株分为了6种酶切图谱类型.经过对代表菌株的16S rDNA基因测序及系统发育分析,6个代表菌株之间具有99.9％～100％的相似性,且供试菌株与根瘤菌属的已知种群Rhizobium anhuiense和Rhizobium leguminosarum等也具有99.9％～100％的相似性,因此,分离自汝州的白三叶草根瘤菌属于根瘤菌属(Rhizobium).%A series of molecular identification methods including 16S rDNA PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism),IGS PCR-RFLP,16S rDNA gene sequencing and phylogenetic analysis were used to study the genetic diversity of clover rhizobia from Ruzhou.The results showed that a total of 21 clover rhizobia were obtained and they were of the same kind of 16S rDNA PCR-RFLP pattern and were divided into six IGS PCR-RFLP patterns.Through the 16S rDNA gene sequencing and phylogenetic alalysis of the representative strains,the representatives were with inner group similarities of 99.9-100％ and were with 99.9％ ～ 100％ similarities of the known Rhizobium spp.,such as R.anhuiense and R.leguminosarum.So the clover rhizobia isolated from Ruzhou can be identified as Rhi zobium strains.

摘要： 真菌分类研究从1729年米凯利首次用显微镜观察研究真菌,提出真菌分类检索表而开启.现在真菌分类方法比较多,近年来真菌分类学中引入了多种新兴的科学和技术,分子生物学技术的蓬勃发展为真菌分类学发展奠定了良好的技术基础.真菌分类技术的发展将促进符合客观实际的自然分类系统的建立[1].用核酸和蛋白质等分子生物学性状来探索真菌的门、纲、目、科、属、种等各级分类阶元的亲缘关系和进化的应用越来越多,弥补了传统分类学研究的不足,从而促使人们对真菌的分类及系统发育的认识更接近客观实际,为真菌分子生物学分类研究开辟了崭新的道路.下面将简要介绍目前应用于真菌分类学研究的一些主要方法.%The taxonomic study of fungi was first used by Mikkeli in 1729 to observe and study fungi and to open the taxonomy of fungi.Nowadays,there are many fungi classification methods.In recent years,many new sciences and technologies have been introduced into fungal taxonomy.The vigorous development of molecular biology technology has laid a good technical foundation for the development of fungal taxonomy.The development of fungal taxonomy will promote the establishment of a natural classification system that is in line with the objective reality.Application to characters of nucleic acid and protein molecular biology in order to explore fungi door,class,order,family,genus and species levels of taxonomic relationships and the evolution of more and more widely,that was a large extent for making up the lack of traditional classification,so that people for the classification and system of fungi development was closer to understanding the objective reality,opened a new way for the study of molecular biology of fungi classification. Some of the main methods currently applied to the study of fungal taxonomy will be described below.

摘要： For a long time,mites mainly rely on the morphological characteristics in the systematic study.DNA markers are DNA fragments which can reflect the characteristcs of the genome between individual species or species.Recently,the application of DNA markers has become more and more important in the systematic study of mites.The present situation and prospect of DNA markers,RAPD (Random Amplified Polymorphic),RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism),SSR (Simple Sequence Repeat),DNA Sequence Analysis,AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) and DALP (Direct Amplification of Length Polymorphism),used in the systematic study of mites are described here,which will be helpful for research on acarology.%长期以来,螨类主要依靠其形态特征进行系统学研究.DNA标记是指能反映生物个体或物种间基因组中某种差异特征的DNA片段.近年来,DNA标记技术在螨类系统学研究中得到越来越广泛的应用.本文综述了随机扩增多态性RAPD、限制性内切酶片段长度多态性RFLP、微卫星SSR、核酸序列扩增、扩增片段长度多态性AFLP和直接扩增片段长度多态性DALP等6种DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用现状及前景.

摘要： The quality and microorganisms changes of large yellow croaker (Pseudosciaena crocea) during iced storage were studied using tea polyphenols as bio-preservatives in this study. The sensory evaluation values, total bacteria, pH value, total volatile base nitrogen (TVB-N value) and thiobarbituric acid (TBA value) were measured to evaluate the quality change of Pseudosciaena crocea. The 16 S rDNA clone library and restriction fragment length polymorphism (RFLP) were used to analyze the spoilage bacteria under iced storage condition. The results indicated that the total bacteria, pH value, TVB-N value and TBA value of the dipping group were significantly lower than those of the control group, and the sensory evaluation values of large yellow croaker were better than that of the control group. The shelf-life of dipping group extended from 12-16 days to 20-24 days at iced storage. So the dipping group had better preservation effect. The bacterial species of fresh pseudosciaen a crocea were abundant, reaching 15 types. And the species of bacteria in the spoilage fish decreased obviously. At the end of spoilage period, there were 8 species of bacteria in the control group (20 d), among which Pseudomonas and Shewanella were the dominant species, occupying 43.7% and 39.6% of the total microorganisms. And bacterial species in tea polyphenol dipping sample (24 d) were less than the control group. The dominant spoilage bacteria of dipping samples was Pseudomonas, taking a percentage of 76.8%.%采用生物保鲜剂茶多酚对大黄鱼进行浸泡处理,研究了大黄鱼在冰藏保鲜过程中品质及微生物的变化.通过测定感官评分值、菌落总数、pH值、挥发性盐基氮(TVB-N值)及硫代巴比妥酸值(TBA值),评价大黄鱼在冰藏过程中品质变化,同时采用16 S rDNA克隆文库及限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术对大黄鱼在冰藏条件下的腐败菌进行分析.结果表明,在冰藏过程中,茶多酚处理组的菌落总数、pH值、TVB-N值、TBA值均低于对照组,感官评分值优于对照组,大黄鱼在冰藏条件下货架期由12~16 d延长至20~24 d,茶多酚处理组保鲜效果较好.新鲜大黄鱼细菌种类比较丰富,达15种类型,而腐败后细菌种类明显减少,在腐败末期,对照组(20 d)的细菌种类有8种,其中假单胞菌属(Pseudomonas)和希瓦氏菌(Shewanella)为主要腐败菌,所占比例分别为43.7%和39.6%.而茶多酚处理组(24 d)细菌种类较对照组更少,其腐败菌主要为假单胞菌属(Pseudomonas),占细菌总量的76.8%.

摘要： 本文系统阐述了现代分子标记技术的发展及其在林木育种方面的应用情况.在分析了3代分子标记技术发展成果的基础上,阐述了现代分子标记技术在分子遗传图谱构建、遗传多样性分析、数量性状基因定位和种质资源鉴定等诸多方面的应用研究,最后提出要加强林木基因组测序工作,坚持多学科交叉研究,建立国家级林木分子育种平台的建议.

摘要： 目的：ESR基因是影响猪产仔数的主效基因，而且与猪的生长发育性状及胴体性状之间不存在负的基因多效性影响。因此，研究广西巴马小型猪ESR基因多态性对今后应用分子遗传标记方法来提高巴马小型猪的繁殖性能有着重要的指导意义。rn 方法：本实验应用PCR-RFLP和PCR-SSCP两种方法来检测广西巴马小型猪和杜洛克猪的ESR基因第七外显子的多态性。rn 结论：两个品种猪ESR基因第七外显子都表现为杂合子，基因型为AB型；都不存在AciⅠ酶酶切位点。该结果表明广西巴马小型猪和杜洛克猪的第七外显子基因AciⅠ酶酶切位点无多态性。

摘要： 目的：ESR基因是影响猪产仔数的主效基因，而且与猪的生长发育性状及胴体性状之间不存在负的基因多效性影响。因此，研究广西巴马小型猪ESR基因多态性对今后应用分子遗传标记方法来提高巴马小型猪的繁殖性能有着重要的指导意义。rn 方法：本实验应用PCR-RFLP和PCR-SSCP两种方法来检测广西巴马小型猪和杜洛克猪的ESR基因第七外显子的多态性。rn 结论：两个品种猪ESR基因第七外显子都表现为杂合子，基因型为AB型；都不存在AciⅠ酶酶切位点。该结果表明广西巴马小型猪和杜洛克猪的第七外显子基因AciⅠ酶酶切位点无多态性。

摘要： 目的：ESR基因是影响猪产仔数的主效基因，而且与猪的生长发育性状及胴体性状之间不存在负的基因多效性影响。因此，研究广西巴马小型猪ESR基因多态性对今后应用分子遗传标记方法来提高巴马小型猪的繁殖性能有着重要的指导意义。rn 方法：本实验应用PCR-RFLP和PCR-SSCP两种方法来检测广西巴马小型猪和杜洛克猪的ESR基因第七外显子的多态性。rn 结论：两个品种猪ESR基因第七外显子都表现为杂合子，基因型为AB型；都不存在AciⅠ酶酶切位点。该结果表明广西巴马小型猪和杜洛克猪的第七外显子基因AciⅠ酶酶切位点无多态性。

摘要： 目的：ESR基因是影响猪产仔数的主效基因，而且与猪的生长发育性状及胴体性状之间不存在负的基因多效性影响。因此，研究广西巴马小型猪ESR基因多态性对今后应用分子遗传标记方法来提高巴马小型猪的繁殖性能有着重要的指导意义。rn 方法：本实验应用PCR-RFLP和PCR-SSCP两种方法来检测广西巴马小型猪和杜洛克猪的ESR基因第七外显子的多态性。rn 结论：两个品种猪ESR基因第七外显子都表现为杂合子，基因型为AB型；都不存在AciⅠ酶酶切位点。该结果表明广西巴马小型猪和杜洛克猪的第七外显子基因AciⅠ酶酶切位点无多态性。

摘要： 从育性调查、恢保关系分析、细胞学观察以及分子水平鉴定等方面对芥菜型油菜细胞质雄性不育hauCMs进行综合遗传分类；在遗传分类的基础上，通过线粒体DNA和RNA表达水平的差异分析，初步进行了huaCMS不育分子机理研究。

摘要： 从育性调查、恢保关系分析、细胞学观察以及分子水平鉴定等方面对芥菜型油菜细胞质雄性不育hauCMs进行综合遗传分类；在遗传分类的基础上，通过线粒体DNA和RNA表达水平的差异分析，初步进行了huaCMS不育分子机理研究。

摘要： 从育性调查、恢保关系分析、细胞学观察以及分子水平鉴定等方面对芥菜型油菜细胞质雄性不育hauCMs进行综合遗传分类；在遗传分类的基础上，通过线粒体DNA和RNA表达水平的差异分析，初步进行了huaCMS不育分子机理研究。

摘要： 从育性调查、恢保关系分析、细胞学观察以及分子水平鉴定等方面对芥菜型油菜细胞质雄性不育hauCMs进行综合遗传分类；在遗传分类的基础上，通过线粒体DNA和RNA表达水平的差异分析，初步进行了huaCMS不育分子机理研究。

摘要： 从育性调查、恢保关系分析、细胞学观察以及分子水平鉴定等方面对芥菜型油菜细胞质雄性不育hauCMs进行综合遗传分类；在遗传分类的基础上，通过线粒体DNA和RNA表达水平的差异分析，初步进行了huaCMS不育分子机理研究。

摘要： 从育性调查、恢保关系分析、细胞学观察以及分子水平鉴定等方面对芥菜型油菜细胞质雄性不育hauCMs进行综合遗传分类；在遗传分类的基础上，通过线粒体DNA和RNA表达水平的差异分析，初步进行了huaCMS不育分子机理研究。

摘要： 本发明公开了高卢蜜环菌的PCR‑RFLP鉴别方法。本发明提供了用于鉴定或辅助鉴定待测蜜环菌为A型蜜环菌还是B型蜜环菌的引物对，是通过包括如下步骤的方法设计得到的：将SEQ ID No.5与SEQ ID No.6进行序列比对，得到DNA比对序列矩阵；然后根据所述DNA比对序列矩阵中第550位核苷酸之前的保守区域设计上游引物，根据所述DNA比对序列矩阵中第555位核苷酸之后的保守区域设计下游引物；所述上游引物和所述下游引物组成所述引物对。本发明方法可以有效鉴别A型蜜环菌和B型蜜环菌。本发明为市售菌株鉴别提供一种快速、客观的检测方法，为栽培生产中高卢蜜环菌的高效利用奠定基础。

摘要： 本发明涉及一种区别禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的PCR‑RFLP引物及其方法，所述引物的序列为：上游引物HF：5’‑GAAAYTGGGGSCTGAAATAC‑3’；下游引物HR：5’‑TTGTAGTTYGTGGCCATCTG‑3’，本发明所设计的引物特异性强，能够对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型进行有效的扩增，而对其他家禽常见病原并不能扩增；本发明仅需上游引物HF与下游引物HR这一组引物，并结合常规的XhoI限制性内切酶酶切，就能达到对禽腺病毒C型和鸭腺病毒3型的快速鉴别，填补国内外相关领域研究空白。

摘要： 本发明提供鉴别丝状支原体山羊亚种和丝状支原体簇其它成员PCR‑RFLP引物及方法，所述引物上游P1：5'‑ACAAAAAATATTAGCATTCAAACTT‑3'，下游引物P2：5'‑GGTGTTATTTTTGATTTAG ATGGAG‑3'，该方法是利用丝状支原体山羊亚种与丝状支原体簇其它成员pgmb蛋白基因编码区所含的酶切位点差异来进行区别的，包括DNA的提取，PCR扩增得到相应的目的片段后Hind Ⅲ酶切后进行RFLP分析。本发明鉴定方法操作简单，准确率高。

摘要： 本发明提供一种区别禽坦布苏病毒弱毒疫苗株和野毒株的PCR‑RFLP方法，本发明的方法仅需上游引物F和下游引物R（SEQ ID NO.1‑2所示），并仅需常规限制性内切酶Hind III进行RFLP酶切后进行鉴别，无需复杂繁琐的条件优化过程，本发明在禽坦布苏病毒野毒株和鸭坦布苏病毒弱毒疫苗株快速鉴别诊断检测上快捷准确，解决目前尚未能解决的区别商品化弱毒疫苗毒与野毒株的难题，可以对我国广泛使用疫苗株WF100的养殖场进行禽坦布苏病毒检测与疾病的诊断以及实验研究中这些病毒株的相互鉴别。

摘要： 本发明涉及分子生物技术领域，公开了一种岩牡蛎与长牡蛎PCR‑RFLP鉴定方法以及一对用于鉴定的COI引物。分别利用16S rRNA通用引物与此COI引物扩增两种牡蛎的16S rRNA与COI基因片段，并对扩增出的目的基因片段进行测序，通过对测序结果进行限制性内切酶特异性位点分析，最终选取同一种限制性核酸内切酶AluⅠ对PCR产物进行酶切，并用2.0%的琼脂糖凝胶检测PCR产物的酶切结果。结果表明，岩牡蛎与长牡蛎PCR产物经AluⅠ酶切后产生了大小不同的酶切片段，根据酶切图谱即可将岩牡蛎与长牡蛎鉴别出来。这种简单、可靠、经济的鉴定方法，能够为岩牡蛎与长牡蛎的种质鉴定提供技术手段。

摘要： 本发明公开了一种基于RT‑PCR和RFLP技术鉴别鸡传染性法氏囊病病毒强弱毒株的试剂盒及其应用。所述的试剂盒含有用于扩增鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的引物对以及SpeI、SacI和StuI限制性内切酶。本发明所建立的基于RT‑PCR和RFLP技术的鉴别诊断方法能够区分IBDV的超强毒株和弱毒株，且步骤简单便于操作，本发明的提出为IBDV强弱毒株的快速鉴别诊断提供了一种新的有效技术手段。

摘要： 本发明涉及一种区分禽流感病毒NA基因不同遗传进化分支的PCR‑RFLP引物及其检测方法和应用，所述引物的序列为：上游引物N6F：5’‑ACAGATGGTCCGGCAAACAAC‑3’；下游引物N6R：5’‑CATTCCTTGTTTGCCCAGTAGT‑3’，利用该引物建立PCR‑RFLP检测方法，该引物对亚分支1神经氨酸酶N6基因以及亚分支2神经氨酸酶N6基因均可扩增，对扩增的PCR产物进行限制性内切酶EcoRⅠ酶切并根据琼脂糖凝胶电泳观察酶切产物有1条带还是2条带，特异性地对两个亚分支神经氨酸酶N6基因进行鉴别诊断；本发明鉴定方法简单、准确率较高，可应用于两种亚分支神经氨酸酶N6基因的鉴别。

摘要： 本发明公开了一种用于检测II型糖尿病易感基因CREB1单核苷酸多态性的PCR‑RFLP方法及应用，首先，根据DNA池测序结果，检测到的基因多态性包括：CREB1基因启动子区距转录起始点‑1354位T或G的单核苷酸多态性和‑1343位T或A的单核苷酸多态性。以待测样本基因组DNA为模板，以引物对P为引物，在Taq DNA聚合酶、Buffer（缓冲环境）、Mg＋＋、dNTPs存在的情况下，PCR扩增包含多态位点的CREB1基因序列，然后将PCR产物一分为二，分别用Hha I和Xsp I限制性内切酶进行消化，酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳分型。此外，将这两个多态位点与II型糖尿病的临床指标关联分析，结果显示不同基因型与空腹血糖和糖化血红蛋白水平显著相关。

摘要： 本发明公开了一种簇毛麦2VL染色体特异性RFLP‑STS分子标记及其引物和用途，属于分子生物学和遗传育种科学技术领域。本申请通过对簇毛麦2VL染色体长臂RFLP探针BCD512的核苷酸序列进行分析，获得BCD512序列探针的SSR位点并在该位点两侧设计引物对，利用引物对从小麦及簇毛麦DNA中扩增出呈现簇毛麦特异性带型，并且与2VL长臂紧密连锁的核苷酸序列。该分子标记同时具有RFLP标记的染色体位点唯一性和确定性，以及SSR标记的高多态性和操作简便性，有利于加快簇毛麦2V染色体，尤其是小麦‑簇毛麦易位染色体材料所携带的优良性状向受体品种的转移与利用，提高新品种选育的效率，降低育种成本。

摘要： 本发明提供了一种鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR‑RFLP方法及引物，利用Bci T130I限制性内切酶的特异性识别位点进行基因分型，以样本基因组DNA为模板，扩增呼伦贝尔短尾羊Brachyury/T基因，所扩增基因长度为203bp。上游引物所在Brachyury/T基因的95879504位点至95879486位点，下游引物位置为95879302位点至95879323位点；将PCR产物进行纯化后使用Bci T130I进行酶切；对酶切产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳观察结果，有着明显两条条带为纯合呼伦贝尔短尾羊，明显三条条带的为杂合呼伦贝尔短尾羊。本发明操作简便、反应不需要额外的分析步骤，并通过条带数量准确分型出纯、杂合基因型，酶切体系和时间不会引起Bci T130I酶的星活性。