复合扩增

摘要： [目的]建立一套五色荧光复合扩增体系,并调查中国北方汉族遗传多态性和父子家系突变情况.[方法]根据文献筛查出在中国某一群体中突变率为高变异和快速变异的Y-STR基因座,建立一套五色荧光Y-STR复合扩增体系,计算在500个北方汉族无关男性个体中的基因多样性,观察每个样本的Y-STR单倍型,并对中国北方汉族500个父子对进行检测,统计父子间的突变情况.[结果]成功构建了包含21个Y-STR基因座复合扩增检验体系,在北方汉族群体中基因多态性在0.4023～0.9904之间,500个无关个体中未发现有相同的单倍型.在500个父子对中观察到21个Y-STR基因座共发生134次突变,其中突变率最高的基因座是DYF399S1,为7.40×10-2;在DYS612、DYS547、DYS627、DYS526b、DYS576、DYS630、DYS449、DYF404S1、DYS390、DYS570和DYS518基因座上突变率≥1.00×10-2.此外,DYS626、DYS458和DYS439基因座突变率≥4.00×10-3.有97个父子家系出现1个基因座突变,16个家系同时出现2个基因座突变,仅有1个家系同时出现3个基因座突变,家系突变的概率为0.268.其中127次为一步突变,7次为两步突变,符合逐步突变模式.[结论]高变异Y-STR基因座能够有效区分具有父系亲缘关系的男性个体,可作为联合DNA索引系统(combined DNA index system,CODIS)常染色体和常规低突变Y-STR系统基因座的补充.

摘要： 目的 建立八色荧光38个基因座的复合扩增体系.方法 采用八色荧光标记技术,对38个基因座Amelogenin、D5S818、D21S11、D7S820、CSF1PO、D2S1338、D3S1358、vWA、D8S1179、D16S539、D1S1677、PentaD、TPOX、TH01、D22S1045、D18S51、FGA、D6S1043、D13S317、D12S391、PentaE、D2S441、D1S1656、D19S433、D10S1248、D11S4463、D1S1627、D3S4529、D1GATA113、D17S974、D6S1017、D4S2408、D9S2157、D6S474、D2S1776、D18S853、D20S482及D14S1434进行复合扩增,应用GA118-24B遗传分析仪进行电泳检测,应用Gene Typer V1.0软件进行数据分析.结果 本文成功建立了38个基因座的八色荧光复合扩增体系,基因座间均衡性良好,阳性对照分型结果准确.结论 包含38个基因座的八色荧光复合扩增体系构建成功,为后续更多八色试剂盒的开发奠定了基础.在提高我国DNA检验试剂水平、遗传分析仪检测能力和数据分析软件研究方面具有重要意义.

摘要： 目的 构建一套猪的STR复合扩增体系,并进行体系验证.方法 筛选出猪的12个STR基因座:SW240、S0386、S0655、PigSTR4C、PigSTR5C、PigSTR7B、PigSTR11B、387A12F、PigSTR13E、PigSTR14A、PigSTR15A、PigSTR17A,并结合性别位点Amelogenin基因座设计荧光标记引物,优化反应条件,构建出复合扩增体系.结果 成功构建了一套包含猪的12个STR基因座和1个性别位点的复合扩增体系.体系的最佳条件为10μL体积,60°C退火温度,28次循环.体系的准确性、一致性、均衡性、稳定性、种属特异性、多态性均良好,灵敏度达0.125ng.12个基因座的累积个体识别率为0.999999999999961,累积随机匹配概率为3.9208×10-14,累积非父排除率为0.9952.结论 本文构建的猪复合扩增体系可以用于涉及猪的个体识别和亲子鉴定的案件鉴定.

摘要： 随着我国司法工作日趋完善,对司法鉴定工作的要求不断提高。为了跟上司法鉴定工作的发展需求,2011年,贵州省六盘水市公安局在局党委的带领下,发扬苦干实干精神,发挥主观能动性,在有限的硬件基础上艰苦创业,建成了六盘水市唯一的DNA实验室。如何利用手中有限资源将功效发挥到最佳,是从实验室建成之日起就一直在摸索研究的课题。

摘要： 目的:建立针对五大洲际人群(东亚、欧洲、非洲、大洋洲和美洲)的常染色体SNP复合检测体系,验证评价其人群区分效能.方法:从The Global AIMs Nano set中筛选出28个SNP位点进行复合检测体系的构建,用该体系检测来自16个人群的712份样本,检测结果和千人基因组中的20个人群和CEPH库中的2个人群合并共计2 804份个体的分型数据,采用聚类分析方法和主成分分析方法进行体系效能评价.选取祖先成分大于90％的样本构建参考人群分型库,对140份个体样本进行群体匹配概率、个体主成分分析等人群来源推断,评估该体系在实际样本的人群来源区分能力.结果:该体系不仅能对五大洲际人群进行区分,而且对混合人群也有一定区分能力,对已知来源样本的祖先成分和人群匹配分析结果显示与其来源信息一致.结论:该体系能够实现对欧洲、东亚、非洲、美洲、大洋洲以及混合人群的区分,并能够推断个体祖先来源成分组成,在实际检案中可以进行推广应用.

摘要： 目的 通过19个X-STR的遗传多态性统计分析,对其法医学可应用性进行评估.方法 应用自行建立的19个X-STR荧光复合扩增体系,对浙江788份无关个体(男性样本399份,女性样本389份)进行扩增、检测,并对等位基因、PD值、连锁不平衡等与亲缘关系鉴定相关的数据进行计算.结果 共得到268个等位基因,有12个基因座呈现高多态性.经分析,在调查的浙江汉族所有基因座间均不存在明显的连锁不平衡现象.19个X-STR荧光复合扩增体系在浙江汉族女性群体中累积个体识别率CPD为1.0000000000000,男性群体达到0.9999999999998.结论 19个X-STR的整体效能符合法医学DNA检验要求,可成为复杂亲权案件鉴定和个体识别有效的辅助工具.

摘要： 本文在调查了15个STR基因座等位基因分布范围的基础上,选择FHC2132来代替FHCL2132,其它基因座不变,对PEZ6, PEZ15, FHC2054三基因座重新设计引物,组成五个复合扩增体系即复合扩增体系Ⅰ (PEZ2, FHC2079, PEZ8),复合扩增体系Ⅱ (PEZ1, PEZ20, PEZ5),复合扩增体系Ⅲ (FHC2054, FHC2611, FHC2132),复合扩增体系Ⅳ (PEZ6, FHC2010, PEZ15),复合扩增体系Ⅴ (PEZ3, PEZ12, FHC2087Ub)。通过单基因座PCR扩增和三因素三水平的复合扩增正交实验摸索出各复合扩增体系中的最佳引物浓度比例,成功构建了五个复合扩增体系。将五个复合扩增体系用于犬的STR基因型检测,结果表明五个复合扩增体系对犬的STR基因型检测是有效的。这五个复合扩增体系的构建成功为进一步开发犬的荧光复合扩增试剂盒奠定了坚实的基础。

摘要： 目的：评价Identifiler系统在造血干细胞移植术后白血病监测中的应用价值,探讨建立标准化的造血干细胞移植物监测方法。方法 采集移植术后受供者血液及受者颊粘膜拭子作为样本,采用Identifiler系统荧光标记复合扩增15个STR基因座,对14例接受造血干细胞移植的患者进行移植监测,观察受者在移植术前后STR基因型的变化。结果：13例患者中,7例移植后的血细胞STR分型与供体完全一致,表现为完全嵌合状态(CC);2例患者为供者与受者基因型的混合嵌合型(MC);2例表现为患者基因型;2例不能区分造血干细胞移植物是否成功增殖;1例虽缺乏供体对照数据,亦提示为完全嵌合状态(CC)。结论 Identifiler系统能完全满足造血干细胞移植后白血病监测中区分供受者基因型的需要,适用于作为建立造血干细胞移植监测的标准化方法。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种基于环介导等温扩增检测结核分枝杆菌复合群及非结核分枝杆菌复合群的引物、试剂盒；本发明中所提供的针对结核分枝杆菌特异性靶序列IS6110及分枝杆菌复合群16S rRNA所设计的引物及鉴定体系，实现了对结核分枝杆菌及NTM的区分，解决现有技术中的方法所需周期长，成本高，现场应用困难的缺陷。使用SYTO9荧光染料进行判读的方式实现了闭管情况下对结果进行判读，避免因开盖造成的气溶胶污染等问题。本方法通过搭配相应试剂可在1h左右实现从样本到结果的判读，操作简便快速，检测成本相对较低。本发明的试剂盒及方法特别适用于中小型单位及现场检测。

摘要： 本发明公开了一种同时扩增人常染色体和Y染色体STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用。所述试剂盒可同时检测18个A‑STR、20个Y‑STR及性别(Amel)位点，实现A‑STR和Y‑STR两库同建，可用于个体识别、亲权鉴定、家系排查及家谱构建等，可同时用于案件的快速排查，达到缩短检测时间同时提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率，20个Y‑STR基因座对于案件的排查具有很大的地域、姓氏指向性，可最大限度的排除无关家系。本发明可以检测出大量女性DNA样本背景下的微量男性DNA，是检测如强奸犯罪等混合斑检材的有力武器。且在检测父‑子亲权鉴定时，由于Y‑STR数据已包含而无需单独再做Y‑STR实验分析。

摘要： 本发明公开了一种同时扩增人常染色体SNP和STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，可在单管反应中复合扩增15个SNP位点，15个STR位点及性别鉴定基因座Amelogenin。所述试剂盒包括PCR扩增反应试剂、复合扩增引物、阳性对照、等位基因Ladder、荧光内标。利用检测第三代遗传标记多态性位点(单核苷酸多态性，single nucleotide polymorphism)ARMS‑PCR方法(Amplification Regractory Mutation System，ARMS)和荧光检测技术的结合，开发了一管同时检测31个DNA位点荧光试剂盒，该试剂盒对于解决法医领域的不均衡性混合样本，同一样本相同STR分型的区分，临床领域产前亲子鉴定，器官移植检测，产前疾病诊断等具有广泛的应用前景。可以作为继常染色体STR、Y染色体STR后的一种新型遗传标记试剂盒。

摘要： 本发明公开了一种同时扩增人常染色体和Y染色体STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，该试剂盒可在单管反应中最多同时复合扩增34个基因座，其中常染色体STR基因座15个，Y染色体STR基因座18个及Amelogenin。本发明采用了六色荧光技术，并配合独特的基因座排布方式，将34个基因座分为5组，每组STR基因座分别标记不同的荧光标记，此外，本试剂盒具有很强的检材适应性。本试剂盒同时检测了常染色体和Y染色体STR基因座，可以节省扩增模板用量，缩短检测时间同时提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率。

摘要： 本发明公开了同时扩增马20个STR基因座的复合扩增试剂盒及应用，所述试剂盒包括扩增以下20个STR基因座的特异性扩增引物；其中，20个STR基因座为：HTG6、HTG7、COR22、CA425、HTG4、COR82、LEX54、COR69、AHT5、HMS3、HMS1、HMS6、HMS7、COR58、HTG10、ASB17、VHL20、HMS2、ASB2、LEX34。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)所述试剂盒能够在单管中同时扩增、检测20个马STR位点，为同类型产品中检测位点多的试剂盒；(2)选用的基因座尽量分布在不同染色体上，相互之间不存在遗传连锁，从而提高了试剂盒的整体识别能力；(3)所述特异性扩增引物之间相互无干扰，无非特异峰产生，且具有特异性强、分辨率高、分型准确、灵敏度高等特点，可完全满足马亲权鉴定、个体识别、性别辨别等多方面需求。

摘要： 本发明公开了一种同时扩增人常染色体和Y染色体STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用。所述试剂盒可同时检测18个A‑STR、20个Y‑STR及性别(Amel)位点，实现A‑STR和Y‑STR两库同建，可用于个体识别、亲权鉴定、家系排查及家谱构建等，可同时用于案件的快速排查，达到缩短检测时间同时提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率，20个Y‑STR基因座对于案件的排查具有很大的地域、姓氏指向性，可最大限度的排除无关家系。本发明可以检测出大量女性DNA样本背景下的微量男性DNA，是检测如强奸犯罪等混合斑检材的有力武器。且在检测父‑子亲权鉴定时，由于Y‑STR数据已包含而无需单独再做Y‑STR实验分析。

摘要： 本发明公开了一种扩增人Y染色体STR基因座的多色荧光复合扩增试剂盒及其应用，在单个扩增体系中可以检测30个STR基因座。与现有技术相比：(1)本发明所述试剂盒中包含的基因座具有多态性高、突变率低的优点，且频率分布合理、个体识别力高，从而保证相同家系分型的同一性以及不同家系间分型的差异性；(2)本发明所述试剂盒具有很强的检材适应性，能够检测多种样本。

摘要： 本发明公开了一种同时扩增人常染色体SNP和STR位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，可在单管反应中复合扩增15个SNP位点，15个STR位点及性别鉴定基因座Amelogenin。所述试剂盒包括PCR扩增反应试剂、复合扩增引物、阳性对照、等位基因Ladder、荧光内标。利用检测第三代遗传标记多态性位点(单核苷酸多态性，single nucleotide polymorphism)ARMS‑PCR方法(Amplification Regractory Mutation System，ARMS)和荧光检测技术的结合，开发了一管同时检测31个DNA位点荧光试剂盒，该试剂盒对于解决法医领域的不均衡性混合样本，同一样本相同STR分型的区分，临床领域产前亲子鉴定，器官移植检测，产前疾病诊断等具有广泛的应用前景。可以作为继常染色体STR、Y染色体STR后的一种新型遗传标记试剂盒。

摘要： 本发明公开了一种同时扩增人常染色体和Y染色体STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用，该试剂盒可在单管反应中最多同时复合扩增34个基因座，其中常染色体STR基因座15个，Y染色体STR基因座18个及Amelogenin。本发明采用了六色荧光技术，并配合独特的基因座排布方式，将34个基因座分为5组，每组STR基因座分别标记不同的荧光标记，此外，本试剂盒具有很强的检材适应性。本试剂盒同时检测了常染色体和Y染色体STR基因座，可以节省扩增模板用量，缩短检测时间同时提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率。

摘要： 本发明提供一种X、Y性染色体短串联重复序列四位点复合扩增试剂盒,这种试剂盒可同时对X或Y性染色体的四个位点的STR等位基因分型。试剂盒主成份为引物对HPRT、DXS6799、DXS6804和DXS7132,和/或,引物对DYS389、DYS390、DYS19和DYS388;辅助成份为KCl 50A mol/L,Tris－HCl(pH8.4)10A mmol/L,MgCl2 1.5A mmol/L,明胶0.05A g/L,dNTP:0.15A mmol/L。优点在于一次可以同时检测X或Y染色体的4个STR位点,使一次实验能达到很高的个体识别力。