cDNA表达文库

摘要： 利用新孢子虫感染小鼠血清对新孢子虫cDNA表达文库进行SEREX筛选,获得的阳性克隆经测序后进行Blast分析,并利用生物学软件对其编码的蛋白结构进行预测.结果显示,经筛选共获得了4个阳性克隆序列,分别为新孢子虫表面抗原SAG1,两个假定蛋白(XM_003882171.1)和(XM_003882600.1),以及一个未命名蛋白(XM.003885351.1).研究共获得了4个新孢子虫免疫相关蛋白,为新孢子虫诊断及其疫苗研究等研究奠定了基础.

摘要： 目的 构建法国梧桐花粉变应原cDNA表达文库并初步鉴定. 方法 利用Trizol法抽提法国梧桐花粉总RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后分离mRNA,反转录合成ds cDNA,连接EcoR Ⅰ接头,末端磷酸化,Xho Ⅰ消化,电泳分离并凝胶回收大于500 bp以上的cDNA片段,与Uni-ZAP XR Vector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建cDNA文库,检测文库容量和重组率,并采用PCR方法对插入的cDNA片段大小进行分析. 结果 成功构建了一个文库容量为3.5×106 pfu/ml,重组率为94％,平均插入片段长度约为0.7 kb的法国梧桐花粉变应原cDNA表达文库. 结论 所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的cDNA,为进一步研究法国梧桐花粉主要变应原基因并制备重组标准化法国梧桐花粉主要变应原疫苗奠定基础.

摘要： [目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库,然后将cDNA从初级文库重组到p VAX1.0上,构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,最后用7个已知巨型艾美耳球虫基因的引物鉴定文库。[结果]构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库总容量为0.92×107CFU,插入片段平均大小为1.63 kb;表达文库总容量为2.32×107CFU,插入片段平均大小为1.64 kb。两种文库的阳性重组率均为100%。能用特异性引物从该表达文库扩增出7个已知的巨型艾美耳球虫基因。[结论]该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础。

摘要： 通过对暗黑鳃金龟幼虫中肠cDNA文库的免疫筛选,得到一个编码羧酸酯酶的全长基因hc19.经NCBI Blast分析,该基因编码的氨基酸序列包含有Esterase/lipase superfamily的保守结构域,含羧酸酯酶B型丝氨酸活性位点FGGdpnkVtLaGySAG.序列比对表明,其与华北大黑鳃金龟有较高同源性.hc19在大肠杆菌中表达大约59 kDa的目的蛋白条带.以α-醋酸萘酯溶液为底物与粗酶液混合,测其活性,平均酶活力为0.091 mmol/100μL酶液.实时定量PCR表明羧酸酯酶基因hc19在中肠中表达量最高.

摘要： 本研究通过免疫筛选暗黑鳃金龟幼虫中肠cDNA表达文库,获得其几丁质酶基因Hpchi.序列分析表明Hpchi开放阅读框长1 443 bp,编码480个氨基酸,预测分子量为51.4 kDa.Hpchi蛋白N-端带有18个氨基酸的信号肽,C-端存在有一个几丁质结合结构域,催化区位置显示有特异活性位点,判定Hpchi蛋白属于Ⅰ型的几丁质酶.分别构建原核和真核表达载体,转化到大肠杆菌BL21和昆虫细胞系sf9,BTI-Tn-5BI-4(Highfive)中进行表达.SDS-PAGE和Western Bolt杂交试验显示,Hpchi重组蛋白在大肠杆菌及昆虫细胞系中都获得了成功表达.酶活分析表明真核表达的Hpchi重组蛋白具有几丁质酶活性.

摘要： 为了筛选化学杂交剂苯哒嗪的靶标蛋白基因,以SQ-1(15%苯哒嗪乳油)处理的小麦品种西农1376为材料,以噬菌体λTripl Ex2为载体,利用SMART技术构建小麦单核期花药c DNA表达文库;以生物素为报告基团,合成苯哒嗪小分子探针,并利用该探针在c DNA表达文库中进行苯哒嗪靶标蛋白基因筛选。结果成功构建了一种新型有效的药物印迹筛选方法,获得了一条能够与苯哒嗪结合的蛋白基因c DNA序列,其编码蛋白属于DUF3456家族。研究结果为进一步明确SQ-1(有效成分苯哒嗪)的作用机理提供了依据。

摘要： TaSC (Triticum asetivum L. salt-tolerance related gene, GenBank 登录号为 AY956330)是从小麦耐盐突变体RH8706-49中克隆的高盐诱导表达的耐盐相关基因.以该基因编码的蛋白质TaSC为诱饵,运用分裂泛素酵母双杂交技术从小麦 cDNA 表达文库中钓取互作蛋白质,筛选到一个编码小麦未知功能蛋白质的基因(GenBank 登录号为AK336035),命名为TaSCIP1(TaSC interaction protein 1).双分子荧光互补(BiFC)实验证实TaSCIP1与TaSC存在互作.该互作蛋白的分离有利于进一步研究TaSC基因的耐盐机制.%The TaSC (Triticum asetivum L. salt-tolerance related gene, GenBank accession number AY956330) has been cloned from wheat salt tolerant mutant RH 8706-49, which is induced by high salinity. To fish interacting proteins of this gene, we used TaSC protein as bait to hybrid with the wheat cDNA expression library using the split ubiquitin yeast two hybrid system in this experiment. A novel wheat gene (GenBank accession number AK336035) encoding a protein with unknown function was isolated, which was designated TaSCIP1 (TaSC interaction protein 1). Bimolecular fluorescence complementation (BiFC) experiment con-firmed the interaction between proteins TaSCIP1 and TaSC. The separation of TaSC-interacting protein is beneficial to disclose the mechanism of salt tolerance gene TaSC.

摘要： Serine proteases are one group of important digestive enzymes in insects. To clarify the characteristics and functions of serine proteases, we used the polyclonal antiserum of peritrophic membrane protein from Trichoplusia ni to screen cDNA expression library of the midgut of Holotrichia oblita, and obtained a full-length cDN A clone encoding serine proteases named as HoSPl ( GenBank accession no. FJ573146). The sequence analysis indicated that HoSPl is 902 bp in length with an opening reading frame of 783 bp encoding 260 amino acid residues with the predicted molecular weight 26.7 kDa and pI 4.19. Without N-linked glycosylation site, HoSPl has an O-hnked glycosylation site at Thr157 and six conservative cysteines forming three pairs of disulfide bonds, which play an important role in sustaining the protein tertiary structure. Amino acid sequence alignment with several kinds of serine proteases showed that HoSPl has the catalytic active centers of histidine, aspartic acid and serine, and shares significant similarity to 14 kinds of serine proteases from Costelytra zealandica, with the highest identity (52.47% ) to CzSP3. After the gene was recombined into pET21b and expressed in vitro, the activity of HoSPl was determined with BTEE as the substrate, which was 0. 0378 (junol/mg · min. The molecular cloning and expression in vitro of HoSPl lay a foundation for further research of its expression and function in H. Oblita.%丝氨酸蛋白酶是昆虫体内一类重要的消化酶,为了了解该类酶的分子特性及功能,本研究利用粉纹夜蛾Trichoplusia ni围食q蛋白多克隆抗体筛选华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库,首次得到编码华北大黑鳃金龟丝氨酸蛋白酶cDNA序列,命名为HoSP1(GenBank登录号为FJ573146).序列分析表明,该基因长902 bp,开放阅读框(ORF)长783 bp,编码260个氨基酸,推测分子量和pI值分别为26.7 kDa和4.19,不含有N-糖基化位点,但在Thr157处有一个O-糖基化位点,含有6个保守的半胱氨酸残基,组成3对二硫键,对于维持蛋白质的三级结构起着重要的作用.通过与几种丝氨酸蛋白酶的比对发现,该酶具有组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)催化中心,与褐新西兰肋翅鳃金龟Costelytra zealandica的14种丝氨酸蛋白酶有明显的相似性,其中与CzSP3的序列一致性最高,为52.47％.把该基因与pET21b载体重组后,进行体外表达,以BTEE为底物,测得该酶的活力为0.0378 μmol/mg·min.HoSP1基因的克隆及体外表达为进一步研究该酶在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能提供了依据.

摘要： 为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA.在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和Hind Ⅲ定向接头后连接到λ SCREEN载体上.通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库.用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cDNA文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增.结果表明构建的cDNA表达文库其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆.测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段,RACE扩增获得了其中8个基因的全长.本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础.%The objective of this study was to obtain functional genes of Babesia motasi, a cDNA expression library of the merozoites was constructed and immunoscreened with positive sera from sheep infected with B. motasi. The merozoites of B. motasi were purified from red blood cell with differential centrifugation. The mRNA was purified from extracted total RNA. Synthetized double-strand cDNA was added directional EcoR I /Hind H linkers and ligated to the EcoR I / Hind III arms of X screen vector. To produce a primary cDNA library of B. motasi, the phages DNA was packaged in vitro and transfected into ER1647. The positive clones were obtained by immunoscreening with the positive sera against B. motasi and amplified with rapid amplificationof cDNA ends (RACE). The titers of the primary and amplified cDNA expression library were 1. 0X106 PFU and 3. 5X1O9PFU ·mL-1, respectively. The results showed that 10 genes of B. motasi were identified and the full-length of 8 genes were amplified by RACE. The cDNA expression library and genes screened provide an important material for screening and identifying candidate antigens of vaccination and diagnosis, drug targets as well studying biological characteristics of Babesia.

摘要： 利用粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)围食膜蛋白多克隆抗体,从已构建的华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠cDNA表达文库中筛选得到1个编码羧酸酯酶的cDNA克隆HoCL1,其开放阅读框(ORF)长1 599 bp,编码532个氨基酸,推导的蛋白质分子质量为59.5 kDa,等电点(pI)为4.5。HoCL1蛋白具有羧酸酯酶的保守结构域:1个二硫键形成的位点和1个丝氨酸活性中心,三联体催化活性中心位于Ser207、Asp333和His422上,不含有氮联糖基化位点和氧联糖基化位点,只含有3个半胱氨酸残基。依据氨基酸序列同源性分析和保守结构域分析,HoCL1属于B类酯酶,与赤拟谷盗Tribolium castaneum羧酸酯酶相似性最高,为35.2%。通过与其他昆虫羧酸酯酶序列比对及构建系统发育树,发现HoCL1羧基端的氨基酸序列保守性低,但靠近N端的活性中心处的氨基酸序列则高度保守,可与赤拟谷盗、异色瓢虫Harmonia axyridis羧酸酯酶聚类在一起。羧酸酯酶HoCL1基因的克隆鉴定为进一步研究该基因在华北大黑鳃金龟体内的表达及功能奠定了基础。

摘要： 目的:寻找人源性大肠癌特异性抗原基因。rn 方法:采用SMART技术构建人大肠癌组织来源的cDNA噬菌体表达文库，以自体或异体大肠癌患者血清按SEREX方法进行免疫筛选，对平板法扩增获得的阳性克隆片段导入克隆载体pUC T后进行测序、鉴定和BLAST同源性比较，并根据cDNA序列进行生物信息分析。rn 结果:构建了3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库，其滴度分别为2.39×106 pfu/mL，2.07×106 pfu/mL和1.86×106pfu/mL，插入片段长度为0.5~4 kb，平均分别为1.4、1.61和1.3 kb，重组率最高达到97.5％。选择高滴度文库扩增后滴度达到4.1×1010 pfu/mL。SEREX筛选共获得16个阳性克隆，代表12个不同抗原基因，其中10个基因片段为已知抗原基因，如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等，2个为未知EST片段。根据序列分析，筛选出的抗原基因有结构基因、调节基因、代谢相关基因等。rn 结论:利用SEREX方法筛选出大肠肿瘤相关抗原基因并获得2个肿瘤抗原候选基因。

摘要： 目的:寻找人源性大肠癌特异性抗原基因。rn 方法:采用SMART技术构建人大肠癌组织来源的cDNA噬菌体表达文库，以自体或异体大肠癌患者血清按SEREX方法进行免疫筛选，对平板法扩增获得的阳性克隆片段导入克隆载体pUC T后进行测序、鉴定和BLAST同源性比较，并根据cDNA序列进行生物信息分析。rn 结果:构建了3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库，其滴度分别为2.39×106 pfu/mL，2.07×106 pfu/mL和1.86×106pfu/mL，插入片段长度为0.5~4 kb，平均分别为1.4、1.61和1.3 kb，重组率最高达到97.5％。选择高滴度文库扩增后滴度达到4.1×1010 pfu/mL。SEREX筛选共获得16个阳性克隆，代表12个不同抗原基因，其中10个基因片段为已知抗原基因，如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等，2个为未知EST片段。根据序列分析，筛选出的抗原基因有结构基因、调节基因、代谢相关基因等。rn 结论:利用SEREX方法筛选出大肠肿瘤相关抗原基因并获得2个肿瘤抗原候选基因。

摘要： 目的:寻找人源性大肠癌特异性抗原基因。rn 方法:采用SMART技术构建人大肠癌组织来源的cDNA噬菌体表达文库，以自体或异体大肠癌患者血清按SEREX方法进行免疫筛选，对平板法扩增获得的阳性克隆片段导入克隆载体pUC T后进行测序、鉴定和BLAST同源性比较，并根据cDNA序列进行生物信息分析。rn 结果:构建了3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库，其滴度分别为2.39×106 pfu/mL，2.07×106 pfu/mL和1.86×106pfu/mL，插入片段长度为0.5~4 kb，平均分别为1.4、1.61和1.3 kb，重组率最高达到97.5％。选择高滴度文库扩增后滴度达到4.1×1010 pfu/mL。SEREX筛选共获得16个阳性克隆，代表12个不同抗原基因，其中10个基因片段为已知抗原基因，如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等，2个为未知EST片段。根据序列分析，筛选出的抗原基因有结构基因、调节基因、代谢相关基因等。rn 结论:利用SEREX方法筛选出大肠肿瘤相关抗原基因并获得2个肿瘤抗原候选基因。

摘要： 目的:寻找人源性大肠癌特异性抗原基因。rn 方法:采用SMART技术构建人大肠癌组织来源的cDNA噬菌体表达文库，以自体或异体大肠癌患者血清按SEREX方法进行免疫筛选，对平板法扩增获得的阳性克隆片段导入克隆载体pUC T后进行测序、鉴定和BLAST同源性比较，并根据cDNA序列进行生物信息分析。rn 结果:构建了3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库，其滴度分别为2.39×106 pfu/mL，2.07×106 pfu/mL和1.86×106pfu/mL，插入片段长度为0.5~4 kb，平均分别为1.4、1.61和1.3 kb，重组率最高达到97.5％。选择高滴度文库扩增后滴度达到4.1×1010 pfu/mL。SEREX筛选共获得16个阳性克隆，代表12个不同抗原基因，其中10个基因片段为已知抗原基因，如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等，2个为未知EST片段。根据序列分析，筛选出的抗原基因有结构基因、调节基因、代谢相关基因等。rn 结论:利用SEREX方法筛选出大肠肿瘤相关抗原基因并获得2个肿瘤抗原候选基因。

摘要： 研究背景:草花粉致敏引起的Ⅰ型变态反应病如过敏性哮喘等是影响全球健康的主要问题之一.应用基因重组技术制备重组变应原疫苗应用于变态反应疾病的诊断和治疗,不仅可能提高诊断的特异性和敏感性,而且还可能显著降低粗制变应原疫苗用于特异性免疫治疗(SIT)的副作用,成为国内外变态反应领域研究的重要方向.国外目前很多花粉的cDNA文库已经构建,主要变应原成分及致敏蛋白组分已经被克隆、分析,如桦树花粉、豚草花粉、杉树花粉、樱桃花粉等,既往研究发现葎草花粉是西北地区最主要的气传致敏原之一.本课题主要目的是构建葎草花粉cDNA表达文库,为筛选葎草花粉主要变应原阳性克隆及基因重组变应原疫苗的研制奠定基础。

摘要： 研究背景:草花粉致敏引起的Ⅰ型变态反应病如过敏性哮喘等是影响全球健康的主要问题之一.应用基因重组技术制备重组变应原疫苗应用于变态反应疾病的诊断和治疗,不仅可能提高诊断的特异性和敏感性,而且还可能显著降低粗制变应原疫苗用于特异性免疫治疗(SIT)的副作用,成为国内外变态反应领域研究的重要方向.国外目前很多花粉的cDNA文库已经构建,主要变应原成分及致敏蛋白组分已经被克隆、分析,如桦树花粉、豚草花粉、杉树花粉、樱桃花粉等,既往研究发现葎草花粉是西北地区最主要的气传致敏原之一.本课题主要目的是构建葎草花粉cDNA表达文库,为筛选葎草花粉主要变应原阳性克隆及基因重组变应原疫苗的研制奠定基础。

摘要： 研究背景:草花粉致敏引起的Ⅰ型变态反应病如过敏性哮喘等是影响全球健康的主要问题之一.应用基因重组技术制备重组变应原疫苗应用于变态反应疾病的诊断和治疗,不仅可能提高诊断的特异性和敏感性,而且还可能显著降低粗制变应原疫苗用于特异性免疫治疗(SIT)的副作用,成为国内外变态反应领域研究的重要方向.国外目前很多花粉的cDNA文库已经构建,主要变应原成分及致敏蛋白组分已经被克隆、分析,如桦树花粉、豚草花粉、杉树花粉、樱桃花粉等,既往研究发现葎草花粉是西北地区最主要的气传致敏原之一.本课题主要目的是构建葎草花粉cDNA表达文库,为筛选葎草花粉主要变应原阳性克隆及基因重组变应原疫苗的研制奠定基础。

摘要： 研究背景:草花粉致敏引起的Ⅰ型变态反应病如过敏性哮喘等是影响全球健康的主要问题之一.应用基因重组技术制备重组变应原疫苗应用于变态反应疾病的诊断和治疗,不仅可能提高诊断的特异性和敏感性,而且还可能显著降低粗制变应原疫苗用于特异性免疫治疗(SIT)的副作用,成为国内外变态反应领域研究的重要方向.国外目前很多花粉的cDNA文库已经构建,主要变应原成分及致敏蛋白组分已经被克隆、分析,如桦树花粉、豚草花粉、杉树花粉、樱桃花粉等,既往研究发现葎草花粉是西北地区最主要的气传致敏原之一.本课题主要目的是构建葎草花粉cDNA表达文库,为筛选葎草花粉主要变应原阳性克隆及基因重组变应原疫苗的研制奠定基础。

摘要： 研究背景:草花粉致敏引起的Ⅰ型变态反应病如过敏性哮喘等是影响全球健康的主要问题之一.应用基因重组技术制备重组变应原疫苗应用于变态反应疾病的诊断和治疗,不仅可能提高诊断的特异性和敏感性,而且还可能显著降低粗制变应原疫苗用于特异性免疫治疗(SIT)的副作用,成为国内外变态反应领域研究的重要方向.国外目前很多花粉的cDNA文库已经构建,主要变应原成分及致敏蛋白组分已经被克隆、分析,如桦树花粉、豚草花粉、杉树花粉、樱桃花粉等,既往研究发现葎草花粉是西北地区最主要的气传致敏原之一.本课题主要目的是构建葎草花粉cDNA表达文库,为筛选葎草花粉主要变应原阳性克隆及基因重组变应原疫苗的研制奠定基础。

摘要： 研究背景:草花粉致敏引起的Ⅰ型变态反应病如过敏性哮喘等是影响全球健康的主要问题之一.应用基因重组技术制备重组变应原疫苗应用于变态反应疾病的诊断和治疗,不仅可能提高诊断的特异性和敏感性,而且还可能显著降低粗制变应原疫苗用于特异性免疫治疗(SIT)的副作用,成为国内外变态反应领域研究的重要方向.国外目前很多花粉的cDNA文库已经构建,主要变应原成分及致敏蛋白组分已经被克隆、分析,如桦树花粉、豚草花粉、杉树花粉、樱桃花粉等,既往研究发现葎草花粉是西北地区最主要的气传致敏原之一.本课题主要目的是构建葎草花粉cDNA表达文库,为筛选葎草花粉主要变应原阳性克隆及基因重组变应原疫苗的研制奠定基础。

摘要： 本发明涉及快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库的方法及其应用，可有效解决快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库，实现定向选择所需性质优化酶的问题，方法是，将目的基因构建到毕赤酵母载体pGAPZα系列载体中，构建质粒；进行聚合酶链式反应，得PCR产物，PCR产物加入饱和醋酸钠和乙醇，离心，沉淀室温晾干，再加入无菌去离子水溶解，按照酵母转化法将PCR产物电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中，涂布在含博来霉素的YPDS培养基平板上筛选阳性克隆，提取酵母基因组DNA，再对PCR产物进行测序，计算碱基突变率、基因突变率，实现快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库，本发明方法易操作，省时省力，工作效率高，应用面广，经济和社会效益巨大。

摘要： 本发明公开了一种降低文库冗余度的膜系统表达文库及其构建方法和应用，所述构建方法通过增加用于反转录的起始总RNA量，无需使用PCR扩增步骤，从而可以减少冗余序列的产生；使用新的终载体质粒pSPR3na，后续可一步生成次级文库并可以多次生成；本发明所述构建方法可以实现降低酵母文库序列冗余度并可以反复生成次级文库的目的。本发明还公开了所述膜系统表达文库在进行膜蛋白‑膜蛋白、膜蛋白‑可溶性蛋白间的互作研究，用于表达文库的筛选，用于两个已知蛋白(其中一个属于膜蛋白)间互作关系的研究中的应用。本发明还公开了一种新的酵母文库终载体质粒。

摘要： 本发明公开一种基于随机表达元件倍增方式构建随机蛋白表达文库的方法，涉及基因工程领域。本发明要求制备的随机序列5＇末端依次携带内切酶1识别序列和内切酶2识别序列，3＇末端携带内切酶3识别序列，且内切酶2和内切酶3是同尾酶，文库载体携带抗生素抗性基因，且抗性基因的5＇端上游有内切酶1和内切酶3的识别序列。通过内切酶1和内切酶3将随机序列克隆到文库载体上，PCR扩增该文库的随机表达元件并经内切酶1和内切酶3处理，然后与内切酶1和内切酶2处理过的初级随机表达元件文库的载体DNA酶连、转化以及相应抗生素筛选获得二级随机表达元件文库。按照获得二级随机表达元件文库的方法逐级倍增随机表达元件的数量获得随机表达大分子量的蛋白文库。

摘要： 本发明为一种基于随机表达元件倍增方式构建随机蛋白表达文库的方法，涉及基因工程领域，准备随机表达序列5＇末端依次携带内切酶1识别序列和内切酶2识别序列，3＇末端携带内切酶3识别序列，且内切酶2和内切酶3是同尾酶，由内切酶2酶切产生的末端与内切酶3酶切产生的末端连接后的序列与表达元件的阅读框融合后不含有终止密码子；内切酶1不是内切酶2或3的同裂酶且内切酶1不能识别并切割由内切酶2酶切产生的末端与内切酶3酶切产生的末端连接后的序列。文库载体携带抗生素抗性基因，且所述抗生素抗性基因的5＇端上游有内切酶1和内切酶3的识别序列，运用酶切酶连及抗生素筛选，逐级倍增随机表达元件获得表达大分子量蛋白表达文库。

摘要： 本发明涉及快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库的方法及其应用，可有效解决快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库，实现定向选择所需性质优化酶的问题，方法是，将目的基因构建到毕赤酵母载体pGAPZα系列载体中，构建质粒；进行聚合酶链式反应，得PCR产物，PCR产物加入饱和醋酸钠和乙醇，离心，沉淀室温晾干，再加入无菌去离子水溶解，按照酵母转化法将PCR产物电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中，涂布在含博来霉素的YPDS培养基平板上筛选阳性克隆，提取酵母基因组DNA，再对PCR产物进行测序，计算碱基突变率、基因突变率，实现快速构建蛋白质突变体毕赤酵母表达文库，本发明方法易操作，省时省力，工作效率高，应用面广，经济和社会效益巨大。

摘要： 本发明公开一种快速构建RNA 3’端基因表达文库的方法，包括：使用带有第一接头的Oligo(dT)反转录引物对mRNA样本进行反转录，得到带有第一接头的第一链cDNA；以第一链cDNA为模板合成第二链cDNA，获得带有第一接头的双链cDNA；使用带有第二接头的转座酶复合物处理双链cDNA，在片段化的同时插入第二接头，得到带有第一接头和/或第二接头的双链cDNA片段；其中，所述第一接头与第二接头的序列不完全相同。本发明提供的该方法可有效实现针对真核生物mRNA 3’端的转录组文库构建。

摘要： 一种能够提高表达文库阳性率的文库构建方案。它通过在mRNA反转录5’引物序列中添加不同数量的A实现一个mRNA具有三种读码框，保证其中一种可进行正确翻译的反转录方案。此方案获得的cDNA无论后续进行酵母文库构建还是连接到蛋白表达载体上，均可提高mRNA正确表达蛋白的阳性率，更真实的反应样本的实际状态。

摘要： 本发明涉及降低膜体系表达文库假阴性率的一种建库方案，包括增加用于反转录的起始总RNA量并分离mRNA进行反转录；增加文库接头的种类。本发明改变了建库过程中的反转录使用的RNA种类及接头种类，降低了膜体系表达文库的假阴性率。

摘要： 一种铁皮石斛互补脱氧核糖核酸表达文库的构建方法，以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛中提取总RNA，分离纯化mRNA，LDPCR法反转录合成双链cDNA，以λTripIEX2为载体，构建铁皮石斛cDNA文库，文库滴度以每mL含噬菌斑形成单位(pfu)的数目来表示，PCR扩增鉴定插入片段。成功地构建了铁皮石斛cDNA表达文库，原始文库的噬菌斑滴度为43×105pfu/mL，总克隆数为31×105，扩增后文库总滴度为68×109pfu/mL，对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定，结果插入片段多分布在05～20kb之间，绝大部分在12～17kb左右。所构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。

摘要： 一种利用噬菌体展示技术构建细胞穿透肽表达文库的方法，采用噬菌体展示技术，结合全细胞筛选模式，筛选具有细胞膜穿透活性的多肽；再利用所筛选的胞穿透肽构建细胞穿透肽原核表达文库。选用Ph.D.‑C7C噬菌体展示肽库，将随机七肽的基因序列插入到噬菌体衣壳蛋白编码基因pIII中，使随机七肽对应的表达产物与噬菌体的衣壳蛋白末端形成融合蛋白，从而构建成一个组合文库。本发明方法所构建的文库阳性克隆率远高于随机多肽文库，筛选和验证所需时间周期大大缩短，具有高通量的优势。