碱性脂肪酶

摘要： 研究碱性脂肪酶与常见洗涤剂中主要有效作用成分(表面活性剂、助剂和碱性蛋白酶)复配后,新酶系的酶活力与去污白度的影响。结果表明碱性脂肪酶与其均有较好的相容性,为碱性脂肪酶在洗涤剂中的具体应用提供了一定理论基础。

摘要： 该研究以俄罗斯鲟鱼为原料,对脂肪酶法脱脂条件进行筛选和优化,通过比较脱脂前后鲟鱼肌肉脱脂率、蛋白质损失率,确定其最佳脱脂条件为:酶浓度20 U/mL、pH值为9、浸泡时间50 min.对脱脂前后的鱼肉进行脂肪酸组成、组织形态、脂肪分布、腥味物质的分析发现:酶法脱脂虽对鲟鱼肌肉组织结构有一定的破坏,但在减少腥味物质、保持营养成分的同时能明显达到脱脂效果.

摘要： 碱性脂肪酶与硫酸亚铁(Ⅱ)添加剂对靛蓝染料的还原与增溶效果显著,尽管其在靛蓝质量浓度为7.5 g/L的体系中获得的染色强度与3.0 g/L靛蓝染料在连二亚硫酸盐体系中获得的染色强度相当。在无靛蓝和有靛蓝的情况下,还原液在碱性脂肪酶体系中的稳定性总体上优于在二亚硫酸盐体系中的稳定性。连二亚硫酸盐体系对染色棉织物的表面损伤较明显,而碱性脂肪酶体系对染色棉织物的表面损伤较小。在两种还原体系中,染色棉织物的色牢度相当。因此,用碱性脂肪酶和硫酸亚铁(Ⅱ)完全替代连二亚硫酸钠是可能的。

摘要： 酶的加入可以显著降低洗涤剂中合成化学物添加量和洗涤温度,从而降低洗涤剂产品的环境负担和经济负荷.本研究利用两相分离法从纤维素链霉菌AU-10菌株中提取获得了一种碱性脂肪酶,酶活回收率为68％,纯化倍数为7.08.这种纤维素链霉菌AU-10源脂肪酶在pH=9.0,40°C下表现出最高的酶活力.在pH 9.0～11.0之间时,100％的酶活力可以维持1 h左右.该酶在30～50°C范围均可以保持较高的稳定性.它的最大反应速率是0.83 mmol·L-1·min-1,米氏指数为0.34 mmol·L-1.对橄榄油和葵花籽油有非常高的催化水解活性.从EDTA对酶活力的影响可以判定纤维素链霉菌AU-10源脂肪酶是一种金属酶,亚铁离子、铜离子和含硼化合物可以显著提高它的催化活性.无论是表面活性剂还是氧化剂,都不会对其稳定性产生明显影响.在市售的奥妙、碧浪、Tursil,Pril和Fairy中,该脂肪酶的活性依然可以达到108.8％、115.6％、98.35％、140.4％和107.6％.简言之,纤维素链霉菌AU-10源脂肪酶是一种可应用于洗涤剂配方的酶.

摘要： 利用碱性脂肪酶催化三乙酸甘油酯分解导致pH降低,以酸碱指示剂显示颜色变化,研究并确定低温环境的TTI(时间温度指示剂)的反应体系及基本特性.该时间温度指示剂(25 mL)的反应体系为:5 mL三乙酸甘油酯:20 g/L 聚乙烯醇乳化液(v∶v=1∶19,均质10000 r/min,每次3 min,间隔5 min,共两次)、19.50 mL 0.05 mol/L pH10.60Gly-NaOH缓冲液、0.05 mL 1 g/L碱性脂肪酶液、0.25 mL 0.10 mol/L CaCl2溶液、0.20 mL百里香酚蓝-酚酞-百里酚酞混合指示剂.通过测定反应体系在不同温度下的pH下降速率,最终确定该反应体系的Ea为60.14 kJ/mol.该反应体系可应用于监测低温环境下食品中酶反应或脂肪分解的程度,间接判断对应食品的品质状况.

摘要： Objective]In order to obtain the lipase that can be applied to the hydrolysis and syn-thesis of esters,the alkaline lipase-producing strains that hydrolyze long chain fatty acid ester were screened and isolated.The related genes were cloned and expressed,and enzyme charac-terization was studied.[Methods]A strain,which degraded glycerol tristearate,was isolated from the environment,and identified based on 16S rDNA sequence analyses.Then the lipase gene and the lipase chaperone gene were amplified by PCR.The target genes lipPA-9A and lipPA-9B were introduced into expression vector pET-22b(+)and induced for expression inEscherichiacoli BL21(DE3).Finally,the char-acteristics of the recombinant enzyme were stud-ied in detail.[Results]The strain was identified as the genus of Pseudomonas alcaligenes by ana-lyzing of 16S rDNA sequence.And the lipase gene (lipPA-9A ) and lipase chaperone gene (lipPA-9B)were cloned.The co-expression re-combinant plasmid of pET22b-lipPA-9A-9B was successfully constructed and expressed in E. coli BL21(DE3).The maximum activity of LIP-9A was obtained at 35°C,pH 10.5,and pNPO was the most suitable substrate.Meanwhile,the active LIP-9A could catalyze fatty alcohols and fatty acids to generate esters.[Conclusion]LIP-9A is a lipase with relatively high activity in al-kaline conditions and can catalyze esterification reaction.Its characteristics are of high value in the detergent industry and biocatalytic applications.%【目的】为获得可应用于酯类水解及合成的脂肪酶资源,本研究通过筛选分离得到能够水解长链脂肪酸酯的脂肪酶产生菌,克隆表达其脂肪酶基因并研究脂肪酶的酶学性质。【方法】从环境中筛选分离出可水解三硬脂酸甘油酯的菌株,利用16S rDNA对其进行分子鉴定,并扩增其脂肪酶基因和脂肪酶分子伴侣基因。以 pET-22 b(+)为表达载体,构建共表达重组质粒,转化Escherichia coli BL21(DE3)进行异源表达,并对重组酶进行酶学性质研究。【结果】经16 S rDNA鉴定该菌株为产碱假单胞菌Pseudomonas alcaligenes。通过 PCR 成功克隆到该菌的脂肪酶基因(lipPA-9A)和脂肪酶分子伴侣基因(lipPA-9B),并构建共表达重组质粒 pET22b-lipPA-9A-9B ,实现脂肪酶 LIP-9 A的活性表达。酶学性质研究表明 LIP-9 A的最适反应温度为35°C,最适反应 pH值为10.5,最适反应底物为对硝基苯酚辛酸酯(pNPO)；同时,LIP-9A 还可以催化醇和羧酸发生酯化反应产生酯类物质。【结论】LIP-9 A在碱性条件下具有较高活力,且可以催化酯化反应,在洗涤行业和酯合成领域具有一定的应用价值。

摘要： An alkaline lipase producing strain A6 was isolated from the oil-rich soil sample, and it was initially identified as Yersinia.The study of enzymatic properties showed that the optimum reaction temperature of the enzyme was 40°Cand the optimum pH value was 9.0.In the range of pH 7.0 ~9.2, when the enzymatic activity remained above 80%, it was alkaline lipase.%从富油土壤样本中分离出一株耐碱性脂肪酶产生菌A6，初步确定为耶尔森氏菌属。酶学性质研究表明，该酶反应的最适反应温度为40°C，最适pH值为9．0。在pH值7．0～9．2的范围内，酶活性仍维持在80％以上，为碱性脂肪酶。

摘要： 食品保质期是食品质量安全的一个重要方面,而温度对于食品质量变化的影响较大却难以控制,使得食品保质期的可信度有所下降.时间温度指示器(T T I)的研发可以很好地解决这一难题,可以对食品流通环境中的关键影响因素进行监控、记录,通过时间温度累积效应来指示食品的安全程度.TTI在国外已被广泛用在大型超市及物流监控系统中,而我国对TTI的研究尚显薄弱.本文利用碱性脂肪酶-底物反应体系开发了一种时间温度指示器,建立了时间-温度-响应值模型,并对其应用形式、动力学参数进行了初步的研究,得出响应的活化能在52~56kJ/mol,该体系有望用作检测环境温度的指示卡.

摘要： 食品保质期是食品质量安全的一个重要方面,而温度对于食品质量变化的影响较大却难以控制,使得食品保质期的可信度有所下降。时间温度指示器(TTI)的研发可以很好地解决这一难题,可以对食品流通环境中的关键影响因素进行监控、记录,通过时间温度累积效应来指示食品的安全程度。TTI在国外已被广泛用在大型超市及物流监控系统中,而我国对TTI的研究尚显薄弱。本文利用碱性脂肪酶-底物反应体系开发了一种时间温度指示器,建立了时间-温度-响应值模型,并对其应用形式、动力学参数进行了初步的研究,得出响应的活化能在52~56k J/mol,该体系有望用作检测环境温度的指示卡。

摘要： 对菌株L-9发酵产的低温碱性脂肪酶进行了分离纯化,菌体发酵液经过硫酸铵沉淀、DEAE-52离子交换和Sephadex G-75凝胶过滤等步骤处理,经电泳检测达到电泳纯。对菌株L-9所产脂肪酶进行酶学性质研究,该酶的最适温度和p H为30°C,p H 9.0,该酶在10°C、15°C、20°C和25°C时分别保持63%、66%、74%和95%的活性。洗涤剂、柠檬酸钠、牛黄胆酸钠、甘氨酸和Na Cl等溶剂对该脂肪酶的激活作用较强;Triton X-100,Tween-20,Tween-80,SDS及皂角苷等溶剂对该脂肪酶有微弱的抑制作用;该脂肪酶对氧化剂(过氧化氢、Na Cl O3、过硼酸钠)有较好的稳定性;碱性蛋白酶、硼砂、洗衣粉等溶剂的浓度对脂肪酶的活性影响较大,其高浓度抑制脂肪酶活性,低浓度促进脂肪酶活性。结果显示,菌株L-9所产脂肪酶为低温碱性脂肪酶,具有较好的洗涤剂添加剂方面的应用潜力。

摘要： 从天津市开发区盐碱地分离筛选到一株性质稳定的碱性脂肪酶产生菌,经鉴定为短杆菌,革兰氏阴性。该菌株所产酶的最适作用温度为35°C,最适作用pH为9.0。该酶性质稳定,在pH 7.0~10.6范围内表现出良好的稳定性;室温下放置48h保持94％的脂肪酶活力。60°C处理30min仍保持87％的活力;对表面活性剂稳定,且表面活性剂的存在能促进其脂肪酶活性。

摘要： 微生物碱性脂肪酶研究及其应用均非常广泛,而关于水稻种子碱性脂肪酶却知之甚少。本文介绍一种新的水稻种子碱性脂肪酶活性平板检测方法,并利用该方法筛选碱性脂肪酶活性高低不同的材料以研究碱性脂肪酶在稻谷加速老化过程中的作

摘要： 本研究采用深圳市绿微康生物工程有限公司提供的碱性脂肪酶，探讨酶法脱墨的新的工艺条件，为进一步的生物法脱墨的应用提供依据。

摘要： 从海洋菌中分离筛选到一株碱性脂肪酶产生菌H-19,对该菌产脂肪酶的液态发酵条件进行了优化,优化后的培养基组成(％):葡萄糖0.5,小麦粉0.5,豆饼粉1.0,橄榄油1.0,NaCl 2.75,MgCl2 0.5,KCl 0.1,MgSO4·7H2O 0.2,CaCl2 0.05,(NH4)2SO4 0.5;发酵培养基起始pH8.0,发酵温度28°C,摇床转速180r/min,发酵周期48小时,脂肪酶的活力可达17.43IU/mL.酶的最适反应pH为9.0,最适温度36°C。

摘要： 脂肪酶(LipaseEC3.1.1.3)是一类作用底物广泛的界面酶,它不仅可以催化脂类的分解,也可催化酯类的合成.我们研究小组最早(1982)报道了Penicilliumexansum产生的碱性脂肪酶,并于1984年在江苏南通生化厂实现了产业化.经过二十多年的不断研究,在高产菌种筛选、酶合成的代谢控制、酶分离纯化、酶结构、酶反应动力学、酶固定化、酶基因的克隆、酶分子的改造、结晶和酶的应用等方面进行了系统的研究.本文对此进行了介绍.

摘要： 本文研究了面粉改良用碱性脂肪酶的酶学特性:催化水解作用温度、pH适宜范围、酶的酸碱稳定性、酶催化水解作用酯键位置特异及逆向的催化作用等,提出该酶的催化反应机制的模型.同时研究了该酶不同添加量对馒头粉的改良作用.通过流变学试验、面包烘焙试验,探讨了该酶对面包粉品质的影响,为该酶在我国面粉工业中的应用及推广奠定基础.

摘要： 碱性脂肪酶是在碱性条件下将脂肪催化水解为甘油、脂肪酸,同时也能催化酯合成和酯交换反应,具有反应高效、条件温和、无毒副作用等优点,可应用于纺织工业、造纸工业、制药工业、环保业、食品工业等多个领域.抗辐射不动杆菌CMC-1脂肪酶(Acinetobacter radioresistens CMC-1 lipase,ARL)在强碱环境、中温(40～50°C)能较好的分解中长链酸的酯,在造纸、洗涤等方面具有应用潜力.本实验室已成功将优化后的抗辐射不动杆菌CMC-1脂肪酶基因在毕赤酵母分泌表达,摇瓶发酵上清酶活可达到56U/ml,但工业生产的成本仍然很高,工业应用仍然存在障碍.本研究通过多拷贝克隆技术实现抗辐射不动杆菌CMC-1脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达.

摘要： 本文简述作为工业用的微生物脂肪酶—碱性脂肪酶作为药用空间能有多大?通过急性毒性,致突变性、骨髓微核试验、骨髓细胞染色体畸变试验及降脂实验,探索了碱性脂肪酶作为药用的可能性。

摘要： 从阿勒泰地区、伊犁地区的屠宰场、乳品场、油脂厂、皮革厂等富含油脂的地方采集土样约200份,用含橄榄油底物的富集培养基培养3～5次后,用橄榄油为底物,罗丹明B做显色剂进行平板初筛,筛选出产脂肪酶的菌株31株.经反复发酵培养测定酶的活性,选出其中一株传代性质稳定,产酶量高的菌.经形态观察和生理生化实验,初步鉴定为枯草芽孢杆菌,命名为L-198.对菌株L198进行产酶条件优化研究,发现碳源和氮源的种类,细菌发酵的温度及pH值对酶产量影响最大.种龄48h最佳.该菌株的最适产酶发酵培养基为(％):豆饼粉1,玉米浆1,葡萄糖1,K2HPO4 0.5,NaNO3 0.5,初始pH9.500mL三角瓶装液50mL,20°C,180r/min摇床培养48h.最高酶活力可达11.55 u/mL.通过发酵液粗提,进行了酶学性质的研究,结果表明,该酶最适反应温度为40°C,最适pH9.0;在pH8.0～10.0之间稳定。其热稳定性较好,在20～40°C放置30分钟后仍可以保持较好酶活力。金属离子Na+、K+对酶活有显著激活作用,而Cu2+对酶活有显著抑制作用,而K+、Mg2+、Fe+对酶活有抑制作用。

摘要： 本文主要是通过对大黄鱼鱼片分别用碱性脂肪酶A、碱性脂肪酶B、复合碱性脂肪酶A+B进行酶水解脱脂的工艺和效果进行比较研究。结果表明：复合碱性脂肪酶脱脂效果明显优于单一碱性脂肪酶的脱脂效果，当复合碱性脂肪酶酶液浓度A+B=30+20u/ml，酶解PH值8.9，脱脂时间50min，脱脂温度为21±1°C时，其脱脂率可以达到最高70.28％，残脂率为7.50％。

摘要： 一种属于假单胞菌属(Pseudomonas)的细菌、该细菌所产生的具有如下性质的脂肪酶、该脂肪酶的制造方法及含该脂肪酶的洗涤剂组合物。;以三油酸甘油酯乳液为基质，其作用pH为3.5-12，最佳pH为10-12；其作用温度为30-80°C，最佳温度为55-65°C；以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法所测得的分子量为31000±2000；由等电点聚丙烯酰胺凝胶电泳法所测得的等电点为5.2±0.5。本发明的脂肪酶在各种市售的洗涤剂溶液中，又在与表面活性剂、蛋白酶等的洗涤剂成分共存时，具有较高的稳定性和活性，可以在洗涤条件下有效地去除油脂污垢，可增加洗涤剂的洗净力。

摘要： 本发明涉及蛋白纯化技术领域，且公开了一种同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的方法，该方法采用硫酸铵盐析以及Q Beads 6FF阴离子层析来进行三种蛋白的纯化，该蛋白纯化技术通过下述步骤进行：通过硫酸铵盐析的方法确定三种蛋白析出时所对应的硫酸铵饱和度；将50％硫酸铵盐析出的蛋白与50％硫酸铵除杂后补至80％硫酸铵盐析出的蛋白分别上柱于QBeads 6FF阴离子交换柱，再用50‑400mM的NaCl溶液洗脱，收集各组分的洗脱液，进行蛋白浓度和酶活的测定；本发明所述的同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的方法，最终使得脂肪酶纯化倍数提高63.24倍，酸性蛋白酶10.33倍，碱性蛋白酶31.69倍。

摘要： 本发明涉及从渤海海泥中筛选到的一株能够分泌低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌株(Bohai Sea-9145)中，利用简并引物聚合酶链式反应(PCR)与cDNA末端快速扩增(RACE)相结合的方法克隆得到了一条编码低温碱性脂肪酶(LipY)的基因。该基因含有一个1206bp的开放阅读框(ORF)，编码401个氨基酸，在氨基端含有一个28个氨基酸的信号肽。编码的氨基酸含有脂肪酶的保守序列(G-X-S-X-G)和1个潜在的N-糖基化位点。将此脂肪酶基因克隆到真核表达载体(pIC9K)上，在巴斯德毕赤酵母(GS115)中进行异源表达。以甲醇作为诱导剂，发酵96小时后在上清液中获得了高活力的重组脂肪酶。利用镍离子亲和柱对重组脂肪酶进行纯化，得到了电泳纯的脂肪酶样品。该重组脂肪酶具有低温催化活力高、碱性条件下性能稳定等一系列优点，在日化、纺织及食品加工等低温催化领域有着广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种表面活性剂在稳定废纸脱墨用碱性脂肪酶的酶活中的应用，即在废纸脱墨用碱性脂肪酶中加入表面活性剂，室温下以50转/分钟搅拌30分钟，将废纸脱墨用碱性脂肪酶与所述表面活性剂混合均匀；表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚或烷基酚聚氧乙烯醚中的一种或两种。表面活性剂在稳定废纸脱墨用碱性脂肪酶的酶活的同时，还具有降低表面张力的能力，促进碱性脂肪酶分子快速到达油墨粒子表面，提高油墨分解效率，进一步提升脱墨效果。

摘要： 本发明涉及一种新的适冷性海洋酵母菌株BohaiSea-9145，保藏在中国武汉CCTCC，保藏号为M203095。由该菌株产生新型低温碱性脂肪酶，该脂肪酶一单一蛋白条带，分子量为38Kda，最适反应温度35°C，最适pH为8.5，是一种重要的工业性商业用酶，被广泛应用于食品、化工、洗涤剂、医药制品等领域中。

摘要： 本发明涉及从渤海海泥中筛选到的一株能够分泌低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌株(Bohai Sea-9145)中，利用简并引物聚合酶链式反应(PCR)与cDNA末端快速扩增(RACE)相结合的方法克隆得到了一条编码低温碱性脂肪酶(LipY)的基因。该基因含有一个1206bp的开放阅读框(ORF)，编码401个氨基酸，在氨基端含有一个28个氨基酸的信号肽。编码的氨基酸含有脂肪酶的保守序列(G-X-S-X-G)和1个潜在的N-糖基化位点。将此脂肪酶基因克隆到真核表达载体(pIC9K)上，在巴斯德毕赤酵母(GS115)中进行异源表达。以甲醇作为诱导剂，发酵96小时后在上清液中获得了高活力的重组脂肪酶。利用镍离子亲和柱对重组脂肪酶进行纯化，得到了电泳纯的脂肪酶样品。该重组脂肪酶具有低温催化活力高、碱性条件下性能稳定等一系列优点，在日化、纺织及食品加工等低温催化领域有着广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种固定化碱性脂肪酶的制作方法，1）提取液酶；2）固化；3）甘氨酸处理；4）将步骤3）得到的固化酶用2倍体积的1mol/L磷酸盐溶液搅拌洗涤并压干，重复5次，再用2倍体积的1mol/L磷酸盐溶液浸泡固化酶，搅拌30min，离心分离得到固化酶；5）将步骤4）得到的固化酶投入到1倍体积的95%的乙醇中，搅拌处理10min，然后离心分离得到碱性脂肪酶；6）将步骤5）得到的碱性脂肪酶固化酶在40°C、真空度-0.09MPa的环境下烘干10h得到固定化碱性脂肪酶成品。本发明在脂肪酶提取过程中不使用大量有机溶剂和其他有害原料，提高了固化酶活，提高产品的使用批次达200或以上。

摘要： 本发明公开了一种经过改造可以在强碱性条件下具有降解油脂能力脂肪酶的核苷酸序列和氨基酸序列，本发明的技术方案要点为首先合成变形斑沙雷菌脂肪酶基因，将其与质粒相连，然后设计引物进行易错PCR扩增，纯化易错PCR产物与载体相连后转化感受态细胞，筛选出含耐碱性脂肪酶的转化子，测序确定新构建脂肪酶的基因序列。该耐碱性脂肪酶可以克服现有工业应用时，在碱性条件下使用的脂肪酶，酶活力下降快、实用性差的缺陷，以实现脂肪酶在使用过程中耐碱性能高、稳定性好、降低成本、减少工艺与实用性好的优点。

摘要： 本发明公开了一种表面活性剂在稳定废纸脱墨用碱性脂肪酶的酶活中的应用，即在废纸脱墨用碱性脂肪酶中加入表面活性剂，室温下以50转/分钟搅拌30分钟，将废纸脱墨用碱性脂肪酶与所述表面活性剂混合均匀；表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚或烷基酚聚氧乙烯醚中的一种或两种。表面活性剂在稳定废纸脱墨用碱性脂肪酶的酶活的同时，还具有降低表面张力的能力，促进碱性脂肪酶分子快速到达油墨粒子表面，提高油墨分解效率，进一步提升脱墨效果。

摘要： 本发明涉及一种新的适冷性海洋酵母菌株BohaiSea－9145，保藏在中国武汉CCTCC，保藏号为M203095。由该菌株产生新型低温碱性脂肪酶，该脂肪酶一单一蛋白条带，分子量为38Kda，最适反应温度35°C，最适pH为8.5，是一种重要的工业性商业用酶，被广泛应用于食品、化工、洗涤剂、医药制品等领域中。