福氏志贺菌

摘要： 抗生素的大量使用和滥用造成细菌耐药性问题愈发严峻,噬菌体疗法作为一种精准治疗多重耐药病原菌的有效方法开始被人们日益重视。采用双层琼脂平板法从活性污泥中分离出多重耐药福氏志贺菌(Shigella flexneri)噬菌体P003,鉴定为肌尾噬菌体科(Myoviridae)。通过生物学特性测定表明P003的最佳感染复数为10,潜伏期约10 min;在4-70°C、pH 3.0-10.0的条件下保持活性。全基因组测序表明,噬菌体基因组长约68 721 bp,GC含量46.14%,预测编码99个开放阅读框(open reading frame,ORF),未发现已知耐药基因和毒力基因。全基因组多序列线性与进化树分析结果表明,P003与大肠杆菌噬菌体有较近的亲缘关系,但不能侵染大肠杆菌。从活性污泥原位分离到一株新的多重耐药福氏志贺菌噬菌体P003,为利用噬菌体疗法防治多重耐药病原菌S.flexneri感染提供了新的菌种资源。

摘要： 凉拌菜制作方便,是各家餐桌上必不可少的菜品。凉拌菜不仅味道清新可口、可以解腻,还具有较高的营养价值。蔬菜中含有丰富的膳食纤维、维生素和矿物质,《中国居民膳食指南(2016)》推荐成年人每天应摄入300〜500克蔬菜。但吃凉拌菜应注意食品安全问题,当心志贺菌食物中毒。什么是志贺菌志贺菌属通称痢疾杆菌,根据O抗原的性质分为4个血清组:A群,即痢疾志贺菌;B群,也称福氏志贺菌群;C群,称为鲍氏志贺菌群;D群,又称宋内志贺菌群。

摘要： D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的稀有糖,目前其生产主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)将D-果糖转化为D-阿洛酮糖,但该反应转化率低,仅能达到30％左右.基于L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)的"磷酸化-脱磷酸"级联反应可提高反应转化率,然而目前有关RhaB的研究较少.该文研究了一种新型来源福氏志贺菌(Shigella flexneri 2a str.301)来源的RhaB,从福氏志贺菌(S.flexneri 2a str.301)的基因组DNA中克隆得到RhaB基因,将其与质粒载体pET28a连接,在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达.构建突变菌株RhaBE437Q,将酶活性提高了10倍,且大部分包涵体蛋白变为可溶性蛋白.利用载体上组氨酸标签对重组酶分离纯化,对其酶学性质进行了一系列研究.结果表明,重组蛋白RhaBE437Q为单体蛋白,分子质量为54 kDa;最适反应条件为40°C,pH 8.5,Mn2+;其只对C-3构型为R构型的糖有催化活性;将其与底物D-阿洛酮糖进行分子对接,对其催化机制进行了初步研究.

摘要： 凉拌菜制作方便,是各家餐桌上必不可少的菜品。但吃凉拌菜应注意食品安全问题,当心志贺菌食物中毒。什么是志贺菌志贺菌通称为痢疾杆菌,根据O抗原的性质分为4个血清组:A群,即痢疾志贺菌群;B群,也称福氏志贺菌群;C群,称为鲍氏志贺菌群;D群,又称宋内志贺菌群。

摘要： 为寻求安全、有效的福氏志贺菌控制方法,探究原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用。测定原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度以及其对菌体细胞形态、胞内ATP浓度、膜电位、菌体蛋白质合成和破坏及生长曲线的影响,结果表明:原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度为0.5 mg/mL,最小杀菌浓度为4.0 mg/mL。场发射扫描电镜观测到原儿茶醛使福氏志贺菌形态受损,菌体皱缩干瘪;原儿茶醛影响福氏志贺菌细胞膜的通透性,表现为质量浓度为2×MIC和4×MIC的原儿茶醛使细菌胞内ATP浓度显著降低,引起细菌膜电位超极化,破坏菌体蛋白质并抑制细胞蛋白质合成;原儿茶醛延长了福氏志贺菌的生长迟滞期,减小其最大生长速率。结论:原儿茶醛对福氏志贺菌具有良好的抑制作用,其有作为天然、安全的抑菌物质应用于食品工业中的潜力。

摘要： 为探究核酸适配体技术在食源性致病菌检测和鉴定方面的应用,以福氏志贺菌为研究对象,采用全细胞SELEX技术筛选与其特异性结合的适配体。经多轮正筛和反筛,共克隆得到17条序列,4条高频适配体(F-1、F-3、F-9和F-16)对福氏志贺菌有较高的亲和力,其中F-1和F-9与福氏志贺菌的亲和力较高,相应的亲和常数Kd值分别为(51.3±3.25) nmol/L和(42.6±7.11) nmol/L。软件模拟F1和F9的二级结构,其最小自由能分别为-7.39 kcal/mol和-6.98 kcal/mol。本文首次筛选出对福氏志贺菌具有较高亲和特异性的适配体,为后续利用适配体进行食源性致病菌快速检测奠定了基础。

摘要： 目的:建立快速检测福氏志贺菌致病性、耐药性的多重PCR方法.方法:根据福氏志贺菌耐药性基因gyrA,parC及毒力致病性基因ipaH,分别设计了3对引物,其PCR扩增产物分别为648,248和423 bp,并进行单基因PCR和单管多重PCR扩增特异性和Tm值的优化.结果:该方法可同时检测福氏志贺菌gyrA,parC及ipaH三种标志性靶基因,其最优退火温度为57.5°C.结论:本方法操作简单,检测周期短,能够实现对福氏志贺菌样本的喹诺酮耐药决定区基因、毒力基因的并行快速检测.

摘要： 目的 比较和评价脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和多位点可变数目串联重复序列分析技术(MLVA)在福建地区福氏志贺菌研究中的应用.方法 运用PFGE和MLVA技术对43株分离自福建地区的福氏志贺菌进行分子分型,结合流行病学资料分析比较分型效果.结果 43株福氏志贺菌经PFGE分型后相似度在61.70％～100％之间,按照100％的相似水平可分为36个PFGE型,没有优势PFGE型别,分辨系数为0.992 2,存在4个优势簇(G1～G4);福氏志贺菌经MLVA分型后,按照100％的相似水平可分为41个MLVA型别,遗传关联度介于6.207％～100％之间,没有优势MLVA型别,分辨系数为0.997 8,得到5个优势基因群(Cluster1～5).在最小生成树上,部分F4c与Fx亲缘关系较近,并都由F2a和F1a分支而来,表现出一定的遗传关系.结论 两种分型方法的分辨率基本一致,PFGE分型结果与流行病学背景资料及血清型别基本吻合,MLVA在分析菌株种群进化关系上更具优势.

摘要： 为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析.结果 显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99％;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S.本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考.

摘要： 目的：研究萘啶酸耐药的福氏志贺菌喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6')-Ib-cr的分布状况.方法：收集本院2002～2007年腹泻患者大便标本分离出的727株福氏志贺菌,用纸片扩散法筛选出78株萘啶酸耐药的野生株,然后测定13种抗菌药物的敏感性.采用PCR方法检测菌株的qnrA、qnrB、qrnrS、qepA、aac(6')-Ib-cr的耐药基因.结果：727株福氏志贺菌中,对萘啶酸耐药的福氏志贺菌阳性78株,占10.73％.男性52例,女性26例,男女比为2∶1,年龄分布老年组偏低.萘啶酸耐药的福氏志贺菌呈上升趋势,以F2a最为常见占47.43％,其次为F4、F2b.PCR扩增后检测出携带qnrB3株均为qnrB6型.qnrS6株为qnrS1型.aac(6')—Ib-cr.共检测出4株,qnrA、qepA未检出.其中3株同时携带qnrB、aac(6')-Ib-cr.结论：质粒介导喹诺酮类耐药性在福氏志贺菌临床分离株中存在,应加强对萘啶酸耐药的福氏志贺菌耐药性,耐药基因携带情况的监测.

摘要： 目的：以SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌分别与福氏志贺菌的多抗血清结合，制备福氏志贺菌特异的多抗磁珠和抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂，利用免疫比浊分析探索其在福氏志贺菌自动快速定量检测中的初步应用。rn 方法：福氏志贺菌Fla免疫日本大耳白兔制备多抗血清，磁珠包被SPA后再与多抗偶联，制成多抗免疫磁珠。以该磁珠捕获模拟标本的福氏志贺菌，接种MH平板37°C培养18～24h，菌落计数后计算免疫磁珠的特异富集作用。富含SPA的金黄色葡萄球菌(No 1800株)经甲醛灭活后，与福氏志贺菌的多抗血清结合，制备特异抗体致敏的金黄色葡萄球菌，作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫浊试剂，在日立7060全自动生化分析仪编制程序进行自动检测并进行初步的方法学评价。rn 结果：福氏志贺菌Fla免疫日本大耳白兔获得了高质量的多抗血清，特异性好，凝集效价达1：320；制备多抗免疫磁珠对福氏志贺菌具有一定的富集作用，菌落计数显示磁珠处理的细菌捕获效率约为30%；抗体致敏的金黄色葡萄球菌，作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂，在玻片上能与待测福氏志贺菌产生明显的凝集现象，在日立7060全自动生化分析仪上定量检测灵敏、特异、线性良好。rn 结论：以福氏志贺菌的多抗血清分别致敏SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌，制备特异的多抗磁珠对福氏志贺菌有一定的特异捕获与富集作用，抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂对福氏志贺菌的自动、快速、定量检测具有较好的效果，为病原菌的快速诊断和自动定量分析提供了新的思路。

摘要： 目的:明确一株对氟喹诺酮耐药的福氏志贺菌的分子耐药机制，了解质粒介导喹诺酮耐药基因的遗传结构特征。rn 方法:通过接合试验了解耐药性是否由质粒介导；用PCR分别扩增染色体和质粒介导的喹诺酮耐药基因并进行序列分析，检测染色体介导耐药的突变位点和质粒介导耐药的基因型；对耐药质粒进行“鸟枪法”随机克隆实验并对插入到克隆载体pACYC184的EcoRI酶切片断进行测序，检测和分析qnrS基因的上下游结构。rn 结果:福氏志贺菌RJ506染色体DNA旋转酶GyrA亚基的83位发现Ser→Leu突变，该菌株携带质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrS；qnrS及其上下游序列的基因结构为“blaLAP-qnrS保守区域-CS12-fgc-like的形式。rn 结论:本实验首次在国内的志贺菌中检出质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrS，其与染色体GyrA亚基83位Ser→Leu突变的联合作用可导致细菌对环丙沙星的耐药；qnrS的起源和扩散可能与插入序列IS有关，其上下游的基因结构主要有两种形式，而我国检出的菌株上述基因结构完全相同。

摘要： 对福氏志贺菌2a多药耐药相关基因marA进行克隆和原核表达。参考福氏志贺菌2a marA基因序列。设计一对特异引物，在引物的51和31端分别加入含有BamH I和Sal I限制性酶切位点序列，以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板，PCR扩增marA基因并与pMDl8-T载体连接，转化DH5a。提取重组质粒pMD18-marA，经BamHI/SMlI双酶切并与载体pET30a连接，转化宿主菌BL21(DE3)PLys，.IPTG诱导表达目的蛋白。经SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定，结果表明重组载体pET,-30a-marA可成功地在大肠杆菌中表达MarA蛋白。该研究为了解MarA蛋白的特性、功能以及对福氏志贺菌多药耐药机理的深入研究奠定了基础。

摘要： 本发明涉及一种用于福氏志贺氏菌检测的悬浮芯片及其检测方法，该悬浮芯片包括微球载体和固定在载体上的寡聚核苷酸探针，其中该寡聚核苷酸探针是从志贺氏菌O-抗原基因簇筛选的福氏志贺氏菌特异性基因rfc中的一段DNA序列。利用设计的引物将待检样品基因组DNA扩增并标记后，利用上述悬浮芯片进行杂交，根据杂交荧光强度，可判断待检样品中是否含有福氏志贺氏菌。悬浮芯片检测灵敏度高，可达到fg级基因组DNA水平，可满足临床样本和环境样本检测需要，并具特异性高、操作简单、成本低等特点，易于推广。并采用UNG-Taq酶PCR反应体系，大大降低了PCR假阳性结果。

摘要： 一株高效降解氟磺胺草醚的福氏志贺氏菌菌株，它涉及一株福氏志贺氏菌菌株。本发明提供了一株福氏志贺氏菌菌株，可高效降解氟磺胺草醚，为二苯醚类除草剂的环境修复和降解机制研究提供理论和微生物资源基础。本发明高效降解氟磺胺草醚的福氏志贺氏菌菌株为福氏志贺氏菌FB5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年12月06日，保藏号为CGMCC No.4410。本发明福氏志贺氏菌FB5能够高效降解氟磺胺草醚，对含有氟磺胺草醚残留的土壤具有修复作用。

摘要： 本发明涉及一种噬菌体菌株及其应用，噬菌体菌株的保藏号为：CCTCC NO：M209029，该菌株对福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)有强的裂解作用。将噬菌体菌株纯化和扩增培养后，可以用于抑制福氏志贺氏菌。其优点是：由于采用噬菌体特异性裂解福氏志贺氏菌可以杀死具有耐药性的福氏志贺氏菌，同时能够防止福氏志贺氏菌进化和耐药毒株的产生；由于本发明涉及的噬菌体菌株具有亲水相，通过传统的方法很容易配制成喷洒液或淋洗液，对环境或器具进行消杀；由于本发明涉及的噬菌体菌株能特异性裂解福氏志贺氏菌，且没有毒副作用，可以作为食品添加剂，防止福氏志贺氏菌对食品的污染，作为药物治疗由福氏志贺氏菌引起的疾病。

摘要： 本发明公开了一种基于IMB‑RPA‑CRISPR/Cas12a快速可视化检测福氏志贺氏菌的方法和试剂盒，通过免疫捕获磁珠(IMB)预富集样本，RPA扩增，与CRISPR/Cas12的检测方法结合成为IMB‑RPA‑CRISPR/Cas12a的分子检测试剂盒和检测方法。该分子检测方法具有良好的特异性、极高的灵敏度，操作简便快捷，成本低廉，不需要大型仪器设备，具有可视化的优势，更有利于对福式志贺氏菌的分子检测技术在基层中的推广和应用。

摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a‑LAMP快速可视化检测福氏志贺氏菌的方法和试剂盒，本发明通过对LAMP的扩增方法与CRISPR/Cas12的检测方法结合成为CRISPR/Cas12a‑LAMP的分子检测试剂盒和检测方法。该分子检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性，操作简便快捷，成本低廉，不需要大型仪器设备，具有可视化的优势，更有利于对福氏志贺氏菌的分子检测技术在基层中的推广和应用。

摘要： 本发明公开了一种植物乳杆菌Y12所产胞外多糖在制备缓解由福氏志贺氏菌引起痢疾病症的药物中的应用，属于微生物应用技术领域。本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Y12于2018年8月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC NO：M 2018556。本发明提供的植物乳杆菌Y12胞外多糖抑制福氏志贺氏菌的生物膜形成；抑制福氏志贺氏菌对肠上皮细胞的黏附与侵袭；缓解由福氏志贺氏菌引起的肠上皮细胞的炎症反应；降低抗生素缓解福氏志贺氏菌引起的痢疾病症的剂量。

摘要： 本发明提供用于检测福氏志贺氏菌的特异性引物和探针，所述探针序列为：5’‑AGACGCCATCTCTTCTCG‑3’；所述特异性引物为下述序列或为下述序列的互补链序列：上游引物序列为5’‑TATAGTTTAGCTTGCCTTT‑3’；下游引物序列为5’‑CTATTTCTGATAAATTCAAGTTAT‑3’。本发明提供用于福氏志贺氏菌进行定性、定量检测的引物和探针，通过提取福氏志贺氏菌的基因组DNA，结合实时荧光定量PCR检测技术，可达到准确定量待测标本中福氏志贺氏菌含量的目的，具有高灵敏度和高特异性。本发明所提供的引物和探针对判断福氏志贺氏菌活性菌的含量以至于后续研究泌尿道感染具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种针对rfc基因鉴定福氏志贺氏菌的实时荧光PCR方法和试剂盒。该实时荧光PCR检测引物的核苷酸序列为SEQ？ID？No.1和SEQ？ID？No.2所示，探针的核苷酸序列为SEQ？ID？No.3所示。本发明还公开了一种针对rfc基因鉴定福氏志贺氏菌的实时荧光PCR方法，包括：(1)提取待测DNA；(2)以提取的细菌DNA为模板，利用所述的引物和探针进行实时荧光PCR检测；(3)如果扩增结果中出现S型扩增曲线，则判定待检测样品中含有福氏志贺氏菌。本发明福氏志贺氏菌实时荧光PCR方法敏感性高，省时、方便、快捷，可以用于样品中福氏志贺氏菌的检测。

摘要： 一株高效降解氟磺胺草醚的福氏志贺氏菌菌株，它涉及一株福氏志贺氏菌菌株。本发明提供了一株福氏志贺氏菌菌株，可高效降解氟磺胺草醚，为二苯醚类除草剂的环境修复和降解机制研究提供理论和微生物资源基础。本发明高效降解氟磺胺草醚的福氏志贺氏菌菌株为福氏志贺氏菌FB5，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年12月06日，保藏号为CGMCC No.4410。本发明福氏志贺氏菌FB5能够高效降解氟磺胺草醚，对含有氟磺胺草醚残留的土壤具有修复作用。

摘要： 本发明公开了一株脂多糖合成缺陷的无毒福氏志贺氏菌及其构建方法。本发明提供重组菌A，为去除福氏2a志贺氏菌中的毒力大质粒和所述福氏2a志贺氏菌基因组中的O-抗原连接酶编码基因得到的重组菌。本发明的实验证明，本发明首先依据质粒不相容原理将野生福氏志贺菌2a 301株的毒力大质粒驱除，构建得到了毒力大质粒无痕缺失突变株301ΔpCP，即一株无毒福氏志贺氏菌，然后利用基于λ噬菌体Red重组酶作用的同源重组技术，靶基因被抗性基因置换下来；随后抗性基因通过转座酶的作用从宿主菌种脱落，从而得到无毒志贺氏菌的waaI缺失株。