肝干细胞

摘要： 基于肝癌微环境防治肝癌是新的策略,其中肝再生微环境与肝癌的相关机制研究提高了人们对肝癌发生发展、复发转移机制的认识和防治水平.正常的肝再生微环境可延缓、阻止、甚或逆转肝癌的发生发展或复发转移,而异常的或恶化的肝再生微环境则会启动、促进、甚或加速肝癌的发生发展或复发转移.肝癌的肿瘤异质性主要表现为治疗后出现的第二原发肿瘤、不同克隆性的同步多灶性肿瘤以及表型和遗传水平的瘤内异质性,为肝癌分子靶向药物的开发增加了极大的复杂度.根据肝癌肝再生微环境与肝癌肿瘤异质性的研究进展,提出肝癌肝再生微环境具有影响肝干细胞恶性转化肝癌及其异质性的作用及其机制的科学假说,拟解决的关键科学问题之一是肝癌肝再生微环境影响肝癌肿瘤异质性(肝癌肝再生微环境影响肝干细胞恶性转化肝癌及其异质性)的相关机制.

摘要： 肝脏是人体重要的多功能器官,具有独特的再生能力,肝脏受损后的再生过程是一个高度协调的过程,涉及多种细胞间的相互协调和复杂的信号通路.本文综述了肝实质细胞、肝窦状内皮细胞、Kupffer细胞、肝星状细胞以及肝干细胞在肝再生过程中的作用机制研究进展,以期对临床肝切除术的治疗和药物研发提供基础依据,提高患者生存质量.

摘要： 背景:目前骨髓源性内皮祖细胞(bone marrow-derived endothelial progenitor cells,BM-EPCs)或骨髓源性肝干细胞(bone marrow-derived hepatocyte stem cells,BDHSCs)移植治疗肝纤维化的研究较多见,但二者联合移植治疗肝纤维化的报道却罕见.因此设想将具有血管形成作用的 BM-EPCs 和具有肝细胞再生作用的BDHSCs联合移植,可发挥双重抗纤维化作用.目的:探讨BM-EPCs和BDHSCs联合移植对大鼠肝纤维化的逆转作用.方法:利用四氯化碳皮下注射6周建立大鼠肝纤维化模型.通过体外诱导培养获得肝纤维化大鼠来源的BM-EPCs,通过磁珠分选获得肝纤维化大鼠来源的BDHSCs.将两种细胞经尾静脉、门静脉分支输注移植到肝纤维化大鼠体内,观察其对肝纤维化程度和肝脏功能的改善作用.结果与结论:①Masson染色结果显示,单纯BDHSCs或BM-EPCs移植,以及两者联合移植均能抑制胶原纤维的形成.但肝纤维化分期评分结果显示,仅BM-EPCs/BDHSCs联合移植能明显改善肝纤维化程度,与模型组相比差异有显著性意义(P < 0.05);②肝功能和凝血功能检测结果显示,与模型组相比, BM-EPCs/BDHSCs 联合移植组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间和部分活化凝血活酶时间5项指标水平显著改善(P < 0.05),与正常组水平相当;③结果表明,来源于肝纤维化大鼠的BM-EPCs/BDHSCs联合移植治疗肝纤维化有显著疗效,优于单一类型细胞移植.%BACKGROUND: At present, the transplantation of bone marrow-derived endothelial progenitor cells (BM-EPCs) or bone marrow-derived hepatocyte stem cells (BDHSCs) is common in the treatment of liver fibrosis, but the combined treatment for liver fibrosis is rarely reported. Combined transplantation of BM-EPCs possessing the function of angiogenesis and BDHSCs possessing the function of hepatocyte regeneration might play a dual anti-fibrosis role. OBJECTIVE: To evaluate the reversal effect on liver fibrosis by the combined transplantation of BM-EPCs and BDHSCs in rats. METHODS: The liver fibrosis rat models were induced with CCl4 subcutaneous injections for 6 weeks. BM-EPCs of rats with liver fibrosis were obtained by culture induction in vitro.BDHSCs of rats with liver fibrosis were obtained by magnetic bead cell sorting.BM-EPCs and/or BDHSCs were transplanted into liver fibrosis rats via the tail vein and branch of the portal vein,and then the effects of BDHSCs transplantatiron on liver fibrosis and liver function were observed. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Masson staining results showed transplantations of BDHSCs and BM-EPCs, alone or both, could suppress the formation of collagen fibers. However, the staging scores of liver fibrosis showed that only the combined transplantation of BM-EPCs and BDHSCs could significantly improve liver fibrosis,which was significantly different from the model group(1.75±0.25 vs. 3.00±0.19, P < 0.05). (2) The liver biochemical assay in the blood showed that the levels of all five parameters of alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total bilirubin, prothrombin time, and activated partial thromboplastin time in the BM-EPCs/BDHSCs group were significantly improved to be equivalent to normal levels, compared with those in the model group (P < 0.05). To conclude, it is an effective treatment for liver fibrosis by the co-transplantation of BM-EPCs and BDHSCs.

摘要： 背景：目前骨髓源性内皮祖细胞(bone marrow-derived endothelial progenitor cells，BM-EPCs)或骨髓源性肝干细胞(bone marrow-derived hepatocyte stem cells，BDHSCs)移植治疗肝纤维化的研究较多见，但二者联合移植治疗肝纤维化的报道却罕见。因此设想将具有血管形成作用的BM-EPCs和具有肝细胞再生作用的BDHSCs联合移植，可发挥双重抗纤维化作用。目的：探讨BM-EPCs和BDHSCs联合移植对大鼠肝纤维化的逆转作用。方法：利用四氯化碳皮下注射6周建立大鼠肝纤维化模型。通过体外诱导培养获得肝纤维化大鼠来源的BM-EPCs，通过磁珠分选获得肝纤维化大鼠来源的BDHSCs。将两种细胞经尾静脉、门静脉分支输注移植到肝纤维化大鼠体内，观察其对肝纤维化程度和肝脏功能的改善作用。结果与结论：①Masson染色结果显示，单纯BDHSCs或BM-EPCs移植，以及两者联合移植均能抑制胶原纤维的形成。但肝纤维化分期评分结果显示，仅BM-EPCs/BDHSCs联合移植能明显改善肝纤维化程度，与模型组相比差异有显著性意义(P<0.05)；②肝功能和凝血功能检测结果显示，与模型组相比，BM-EPCs/BDHSCs联合移植组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间和部分活化凝血活酶时间5项指标水平显著改善(P<0.05)，与正常组水平相当；③结果表明，来源于肝纤维化大鼠的BM-EPCs/BDHSCs联合移植治疗肝纤维化有显著疗效，优于单一类型细胞移植。

摘要： Objective To investigate the role of PI3K/Akt pathway in mitomycin(MMC) induced apoptosis of liver stem cells.Methods Rat liver stem ceils were stimulated with MMC,and the effect of MMC on the apoptosis rate of WB-F334 cells at different time points(6,12,24 h),as well as the effects of different concentrations of (0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mg/mL) MMC on the cytotoxicity of WB-F334 cells were evaluated;moreover,cells were treated with p38 MAPK inhibitor and PI3K/Akt inhibitor,and the roles of MAPK and PI3K/Akt signaling pathway in MMC mediated apoptosis of WB-F334 cells were explored.Results The apoptosis rate of the MMC-treated WB-F334 increased with time(P＜0.05).Compared with the un-treated control group,different concentrations of MMC had obvious cytotoxicity on liver stem cells,and the cytotoxicity increased with concentration.Western blotting results showed that Akt and MAPK in WB-F334 cells were significantly phosphorylated 15 min after MMC stimulation;the degree of phosphorylation decreased with time,and phosphorylation disappeared after 60 min,suggesting that the p38 MAPK,PI3K/Akt pathway can be activated by MMC;furthermore,when p38 MAPK inhibitor was added to MMC treated cells,the apoptosis rate of p38 MAPK inhibitor treated cells showed no significant difference compared to the un-treated cells(P＞0.05),indicating that the MAPK pathway had no significant effect on MMC induced WP,-F334 cell death;however,when the PI3K/Akt inhibitor(API-2)was added,the apoptosis rate of API-2 treated cells was significantlv decreased compared to the un-treated cells(P＜0.05),indicating that the PI3K/Akt pathway had a significant effect on MMC induced apoptosis of WB-F334 cells(P＜0.05).Conclusion Stimulation of MMC can induce apoptosis of hepatic stem cells WB-F334 through the activation of the PI3K/Akt signaling pathway.%目的 探讨PI3K/Akt途径在丝裂霉素(mitomycin,MMC)诱导的肝干细胞凋亡中的作用.方法 用MMC刺激大鼠肝干细胞,观察MMC刺激不同时间(6、12、24 h)对WB-F334细胞凋亡率的影响,以及不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL)的MMC对WD-F334细胞的细胞毒作用,加入磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂曲西立滨(triciribine,API-2)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB203580后观察MMC对WB-F334细胞凋亡率的影响,探讨MMC调节WB-F334细胞凋亡的信号途径.结果 MMC对WB-F334细胞凋亡率的影响随作用时间延长而上升(P＜0.05);与对照组比较,不同浓度的MMC对肝干细胞有明显细胞毒作用,且随着MMC浓度的升高而上升;Western blot检测结果显示:MMC刺激WB-F334细胞15 min后MAPK、Akt均发生磷酸化,且随着时间延长而减弱,60 min后磷酸化消失,说明p38 MAPK及PI3K/Akt途径能够被MMC激活;当MMC处理的细胞加入了p38MAPK抑制剂后,抑制剂处理组中细胞的凋亡率与MMC处理组并无显著差异(P＞0.05),说明MAPK途径对MMC诱导WB-F334细胞凋亡并没有明显的作用;而当MMC处理的细胞加入了Akt抑制剂后,Akt抑制剂处理组中细胞的凋亡率与MMC处理组相比显著降低(P＜0.05),表明PI3K/Akt途径对MMC诱导WB-F334细胞凋亡有明显的作用.结论 MMC能够刺激肝干细胞WB-F334发生凋亡,而其诱导凋亡的作用是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的.

摘要： 肝干细胞移植治疗终末期肝病有着广阔前景,要积极探索肝干细胞移植治疗应用,为临床肝病诊疗工作的开展提供支持,进一步提升肝病治疗水准。

摘要： 目前新兴的一种治疗肝衰竭的方法就是肝干细胞的移植,移植入病体肝脏中的干细胞能够代替肝细胞进行增殖和分化,进而完成肝脏的修复。本文对当前已经被证实了的,能够在体内或者体外被诱导分化为肝细胞的肝源性的或非肝源性的肝干细胞进行了总结。通过对肝脏再生以及肝干细胞分化的研究的深入,必将为肝病的治疗带来曙光。

摘要： 在一项新的研究中,来自美国斯坦福大学医学院的研究人员发现在正常细胞更新或组织损伤期间,表达高水平端粒酶的肝干细胞在小鼠中起着再生肝脏器官的作用。端粒酶是一种通常与抗衰老相关的蛋白。这些肝干细胞分布在整个肝叶中,使得不论这种损伤的位置发生在哪里,它们都能够快速地自我修复。了解肝脏的这种修复和再生的卓越能力是理解这种器官停止发挥功能(如在肝硬化或肝癌病例中观察到的那样)的关键步骤。

摘要： 目的:通过HBV感染肝干细胞和成肝细胞的体外试验,明确HBV能否感染肝干细胞和成肝细胞,肝干细胞和成肝细胞对HBV的易感性是否存在差异。方法:从胎肝中分离培养人肝干细胞及成肝细胞,进行细胞鉴定，利用间接免疫荧光,ELISA,PCR等手段,检测细胞内HBsAg,HBcAg,HBV-DNA和cccDNA的表达情况;透射电镜下观察细胞中有无HBV病毒颗粒产生.结果：肝干细胞感染后第2天至第24天，均未检测到HBsAg及HBcAg，但感染后第4天开始HBV-DNA检测阳性，透射电镜下发现肝干细胞内质网中有病毒核壳体存在，但未发现完整病毒颗粒。结论：肝干细胞的感染可能是HBV难以彻底清除的重要原因，也可能是HBV慢性感染及隐匿性感染的原因之一。

摘要： 肝癌是各种实体肿瘤中预后最差的恶性肿瘤之一，5年生存率仅14％-30％。肝癌患者迫切需要更有效的、分子水平的联合治疗方法。随着肝干细胞的发现，以及肝干细胞在脑内可以特异性靶向聚集在肝癌细胞团周围，甚至能胞可稳定表达转移的外源基因产物，以肝干细胞为载体的肝癌靶向治疗逐渐成为研究热点。本研究通过共培养大鼠肝癌CBRH-7919细胞系和WB-F344细胞(neural precursor cells, NPCs)，发现了肝干细胞在肝癌微环境中通过TGF-13/Smad途径促进肝癌细胞凋亡进而抑制了肝癌的生长，此结果为临床诊治肝癌患者提供了新的理论依据。

摘要： 目的：研究苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞系WB F-344细胞的增殖及AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.rn 方法：用MTT法检测苦参碱含药血清对WB F-344细胞增殖的影响,免疫细胞化学及RT-PCR方法检测苦参碱含药血清对WB F-344细胞AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响。rn 结果：5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清作用于WB-F344细胞24h、48h、72h均有不同程度的抑制增殖作用,且存在时间、剂量依赖性。正常培养WB-F344细胞有少量AFP、Notch1蛋白和mRNA表达,肝癌前病变模型组血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达上调,苦参碱含药血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达较模型组血清AFP、Notch1蛋白和mRNA表达下调。rn 结论：肝癌前病变模型组血清可能具有诱导WB-F344细胞向肝癌细胞方向分化的作用,苦参碱含药血清可逆转此作用,以上作用与调节Notch1表达关系密切。

摘要： 目前,肝干细胞的存在及作用已得到肯定,肝干细胞与肝坏死后的再生及增生有关,是肝细胞发育生长、增生、再生、纤维化及癌变等生理和病理生理过程中不可缺少的关键角色,在多种肝病及肝脏相关疾病中发挥重要作用.肝干细胞有不同的分类方法,广义的肝干细胞根据其起源分为非肝源性肝干细胞和肝源性肝干细胞.非肝源性肝干细胞主要有胚胎干细胞、胰腺上皮祖细胞、骨髓干细胞等.狭义的肝干细胞仅指肝源性肝干细胞.日本立野等[1]将其分为卵圆细胞、肝小上皮细胞和小肝细胞.肝干细胞已成为当前的研究热点,特别是对于肝源性肝干细胞的研究目前取得了一定进展,本文仅就肝源性肝干细胞(以下简称肝干细胞)的研究进展作一简要综述.

摘要： 近十年来,肝干细胞的存在一直受到人们的怀疑,直到最近几年,通过对啮齿类动物和人类肝脏疾病的发病机制和细胞生物学研究,它的存在才逐渐得到证实.本文就干细胞的基础及临床应用的进展情况作一综述.

摘要： 目的:证实人胎肝中肝干细胞的存在并对其生物学特性进行鉴定.方法:原代分离培养人胎肝细胞集落,免疫组化鉴定细胞集落分子标志物的表达.结果:从人胎肝组织中成功分离表达AFP,Albumin,Cytokeratin等标志物的胎肝干细胞集落.结论:人胎肝中同样存在具有干细胞特性的原始细胞,其发现对于肝干细胞的生物学特性的深入研究奠定了良好的基础.

摘要： 以培养肝细胞为材料、生物反应器为核心的生物人工肝,不仅能为肝衰竭患者等待肝移植争取时间,而且可为肝再生恢复创造条件。然而,由于人肝细胞来源的困难、哺乳动物肝细胞传播动物源性传染病的可能性、永生化肝细胞株的功能差异以及远期致瘤危险等,使细胞源成为生物人工肝进一步临床研究与应用的瓶颈。自1998年Thomson等报道胚胎干细胞建株以来,干细胞的研究引起了人们的极大兴趣。干细胞的可塑性使其有可能成为解决生物人工肝细胞源匮乏的途径，本文介绍了胚胎干细胞、间充质干细胞、肝干细胞及成体细胞诱导的多能干细胞等方面内容。

摘要： 近年来许多研究表明,胚胎干细胞和某些组织中的成体干细胞可通过诱导分化形成胰岛β细胞,具有分泌胰岛素的功能.这方面的研究为解决目前糖尿病治疗中存在的问题开辟了新的研究领域.然而如何选择一种安全、可靠、又便于诱导的细胞进行实验研究是目前面临的重要问题.肝脏细胞增殖能力强,取材方便,且肝、胰在胚胎发生上有很好的同源性,可望诱导出具有具有胰岛素分泌功能的β细胞.材料和方法:妊娠10-15日的SD大鼠,腹腔注射10﹪水合氯醛,麻醉后手术取出大鼠肝脏,无菌条件下将胎肝组织充分剪碎,行组织块培养,24小时后取出未贴壁的细胞进行克隆筛选培养,48小时后半量涣液并去掉悬浮细胞.对贴壁和克隆性生长的细胞进行免疫组织化学和原位杂交组织化学鉴定;采用高浓度的葡萄糖和nicotimide对克隆生长的细胞进行诱导实验.

摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及脂肪间充质干细胞向肝星状细胞和肝内皮细胞同时分化的培养基及方法。本发明提供的培养基能够将脂肪间充质干细胞诱导同时分化成为星状细胞和肝内皮细胞，实验操作简单，干细胞来源广泛。以本发明提供培养基对脂肪干细胞诱导分化的效果要显著优于对照试验，且分化而来的两种细胞都具备其典型功能和表达关键基因。结果表明，本发明提供的培养基诱导分化23天后，有9.6％的细胞分化为肝星状细胞类似的细胞，有14.3％的细胞成为人类肝内皮细胞类似的细胞。

摘要： 本发明提供了内胚层干细胞规模化制备功能性肝母细胞与肝实质细胞的方法及其应用，具体地，本发明提供了一种诱导人类内胚层干细胞分化为肝母细胞和/或肝实质细胞的方法，包括步骤：在第一培养基、第二培养基、第三培养基的存在下，在培养体系中培养内胚层干细胞，从而获得功能性的肝母细胞和/或肝实质细胞。本发明的功能性的肝母细胞和/或肝实质细胞具有非常高的分化率和纯度，并且，本发明的肝实质细胞还具有有效的治疗肝脏相关疾病的作用。

摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及脂肪间充质干细胞向肝星状细胞和肝内皮细胞同时分化的培养基及方法。本发明提供的培养基能够将脂肪间充质干细胞诱导同时分化成为星状细胞和肝内皮细胞，实验操作简单，干细胞来源广泛。以本发明提供培养基对脂肪干细胞诱导分化的效果要显著优于对照试验，且分化而来的两种细胞都具备其典型功能和表达关键基因。结果表明，本发明提供的培养基诱导分化23天后，有9.6％的细胞分化为肝星状细胞类似的细胞，有14.3％的细胞成为人类肝内皮细胞类似的细胞。

摘要： 肝祖细胞包括两个类群的人类肝干细胞，即原肝干细胞和近肝干细胞，以及两个类群的定向祖细胞，一群是胆管细胞，一群是肝细胞。人类原肝干细胞是肝脏细胞群中非常小的部分，产生近肝干细胞，后者构成大部分的肝。人类原肝干细胞生成胆管细胞及肝细胞定向祖细胞。原干细胞和近干细胞是人类肝中主要的干细胞。人类原肝干细胞可通过免疫选择从人类肝中分离，或者通过在选择人类原肝干细胞的条件下培养人类肝脏细胞分离。近肝干细胞可通过免疫选择或通过在包括发育因子的条件下培养人类肝脏细胞分离。近肝干细胞也可以通过培养在包括发育因子的条件下培养包含原肝干细胞的集落分离。所得的组合物可用于治疗肝紊乱和用于生产生物人工器官。

摘要： 本发明提供了一种肝干细胞的选择培养基，所述选择培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有1-20体积％的胎牛血清、5-100ng/mL的人表皮生长因子和5-100ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子；还提供了使用前述选择培养基的从离体组织中选择性分离并扩增肝干细胞的方法；还提供了包括前述的方法获得的肝干细胞的用于治疗糖尿病的药物组合物。使用本发明的选择培养基的本发明的方法能够高效分离和大量扩增肝干细胞，并且经10代传代扩增的肝干细胞仍然保持与原代肝干细胞相同的性状。本发明用于治疗糖尿病的药物组合物能在体内修复糖尿病中损伤的胰岛β细胞，并消除胰岛素抵抗。

摘要： 本发明属于肝干细胞恶性转化技术领域，公开了一种正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法，所述诱导方法包括在正常肝干细胞中同时失调四种转录因子联合诱导出肝癌干细胞的步骤；所述四种转录因子分别为TG737、miR10b、miR200a和CD44。本发明通过沉默TG737、过表达MiR‑10b、沉默miR‑200a和过表达CD44，实现了将正常肝干细胞向肝癌干细胞的恶性转化，从而利用本发明的诱导方法可以为肝癌的研究提供实验模型，利于肝癌疾病的研究。

摘要： 肝祖细胞包括两个类群的人类肝干细胞，即原肝干细胞和近肝干细胞，以及两个类群的定向祖细胞，一群是胆管细胞，一群是肝细胞。人类原肝干细胞是肝脏细胞群中非常小的部分，产生近肝干细胞，后者构成大部分的肝。人类原肝干细胞生成胆管细胞及肝细胞定向祖细胞。原干细胞和近干细胞是人类肝中主要的干细胞。人类原肝干细胞可通过免疫选择从人类肝中分离，或者通过在选择人类原肝干细胞的条件下培养人类肝脏细胞分离。近肝干细胞可通过免疫选择或通过在包括发育因子的条件下培养人类肝脏细胞分离。近肝干细胞也可以通过培养在包括发育因子的条件下培养包含原肝干细胞的集落分离。所得的组合物可用于治疗肝紊乱和用于生产生物人工器官。

摘要： 本发明提供了一种肝干细胞的选择培养基，所述选择培养基包括液体基础培养基，其中，以所述液体基础培养基的体积为基准，所述选择培养基还含有1-20体积％的胎牛血清、5-100ng/mL的人表皮生长因子和5-100ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子；还提供了使用前述选择培养基的从离体组织中选择性分离并扩增肝干细胞的方法；还提供了包括前述的方法获得的肝干细胞的用于治疗糖尿病的药物组合物。使用本发明的选择培养基的本发明的方法能够高效分离和大量扩增肝干细胞，并且经10代传代扩增的肝干细胞仍然保持与原代肝干细胞相同的性状。本发明用于治疗糖尿病的药物组合物能在体内修复糖尿病中损伤的胰岛β细胞，并消除胰岛素抵抗。

摘要： 肝祖细胞包括两个类群的人类肝干细胞，即原肝干细胞和近肝干细胞，以及两个类群的定向祖细胞，一群是胆管细胞，一群是肝细胞。人类原肝干细胞是肝脏细胞群中非常小的部分，产生近肝干细胞，后者构成大部分的肝。人类原肝干细胞生成胆管细胞及肝细胞定向祖细胞。原干细胞和近干细胞是人类肝中主要的干细胞。人类原肝干细胞可通过免疫选择从人类肝中分离，或者通过在选择人类原肝干细胞的条件下培养人类肝脏细胞分离。近肝干细胞可通过免疫选择或通过在包括发育因子的条件下培养人类肝脏细胞分离。近肝干细胞也可以通过培养在包括发育因子的条件下培养包含原肝干细胞的集落分离。所得的组合物可用于治疗肝紊乱和用于生产生物人工器官。

摘要： 本发明提供了利用多能干细胞建立具备双向分化潜能的肝干细胞系HepSC的方法及其应用，具体地，本发明提供了一种诱导人类多能干细胞分化为HepSC的方法，包括步骤：在培养体系中培养多能干细胞，从而获得功能性的HepSC，继续培养HepSC，可获得功能性的肝实质细胞或肝实质细胞群；和/或胆管上皮细胞或胆管上皮细胞群。本发明的功能性的HepSC、肝实质细胞或肝实质细胞群；和/或胆管上皮细胞或胆管上皮细胞群具有非常高的分化率和纯度，并且，本发明的HepSC、肝实质细胞或肝实质细胞群；和/或胆管上皮细胞或胆管上皮细胞群可作为药物筛选的体外模型。