谷氨酰胺酶

摘要： 目的:研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839对巨噬细胞极化分型的影响。方法:准备小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)和RAW264.7细胞,分为对照组和CB-839处理组。以CCK8检测巨噬细胞的增殖,用ELISA法检测M1型巨噬细胞相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)以及M2型巨噬细胞相关因子肿瘤生长因子β(TGF-β)和IL-10,用流式细胞术检测M1型表面标志物CD86和M2型表面标志物CD206,用Western blot检测iNOS和Arg1蛋白表达水平。结果:CCK8结果显示CB-839并不影响BMDM和RAW264.7细胞的增殖,CB-839处理组的TNF-α和IL-1β的水平与CD86、iNOS的表达水平较对照组显著上升,TGF-β和IL-10的水平与CD206、Arg1的表达较对照组显著下降。结论:CB-839在不影响细胞增殖的前提下可以促进巨噬细胞向M1型极化。

摘要： 为探究旋毛虫肌幼虫中是否存在谷氨酰胺依赖性抗酸机制(AR4),本研究根据GenBank中旋毛虫肌幼虫谷氨酰胺酶(TsGLS)基因序列设计3条特异性siRNA分子,并通过浸泡法分别导入旋毛虫肌幼虫体内,利用荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及间接免疫荧光试验(IFA),筛选沉默效果最佳的siRNA分子,并确定其最佳转染条件,结果显示,siRNA-881为基因沉默最佳的siRNA分子,且转染12 h、2μmol/L浓度、培养3 d为最佳基因沉默条件。在不同的酸性条件下培养并检测转染siRNA后旋毛虫肌幼虫的存活率,进一步将转染siRNA-881的旋毛虫肌幼虫接种小鼠,分析TsGLS基因沉默对减虫率、保姆细胞壁厚度及子代肌幼虫基因转录水平的影响。转染siRNA-881后旋毛虫肌幼虫的存活率结果显示,在pH 2.5培养2 h时的存活率明显低于其他酸性环境下;转染siRNA-881的旋毛虫肌幼虫接种小鼠后7 d旋毛虫成虫减虫率和35 d旋毛虫肌幼虫减虫率分别为61.64%和66.71%;将保姆细胞壁厚度与PBS对照组比较,siRNA-881组(15.90±1.301)保姆细胞壁厚度降低了39.78%;siRNA-881转染旋毛虫肌幼虫后,子一代肌幼虫TsGLS基因的转录水平较亲代相比降低30.30%。以上结果表明,旋毛虫具有类似于大肠杆菌中存在的谷氨酰胺依赖性抗酸系统(AR4),抑制旋毛虫TsGLS基因表达可明显降低旋毛虫肌幼虫抗酸能力。本研究首次证实通过RNA干扰技术可有效抑制旋毛虫肌幼虫TsGLS基因的表达,使该虫的抗酸能力减弱,且在宿主肠道的定植能力下降,该结果为研究旋毛虫的致病机制及其感染的防治提供新思路。

摘要： 目的 明确马尾连碱乙对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其参与胃癌细胞能量代谢的方式。方法 两种不同人胃癌SGC-7901、BGC-823细胞系中检测马尾连碱乙对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,同时检测其对不同胃癌细胞能量代谢水平,糖酵解水平及谷氨酰胺代谢水平的影响,最后采用谷氨酰胺代谢酶抑制剂,明确马尾连碱乙参与胃癌能量代谢的作用机制。结果 马尾连碱乙可以显著抑制胃癌细胞的增殖活力,同时降低胃癌细胞的迁移及侵袭能力,给予马尾连碱乙可以明显降低胃癌细胞三磷酸腺苷(ATP)合成能力,不影响细胞乳酸及葡萄糖消耗水平,但可显著抑制胃癌细胞谷氨酰胺代谢能力;马尾连碱乙可以显著抑制谷氨酰胺酶的表达,与谷氨酰胺酶抑制剂联合使用后其对肿瘤细胞增殖及能量代谢的调节能力消失。结论 马尾连碱乙可以抑制谷氨酰胺酶的表达,影响胃癌细胞谷氨酰胺代谢,抑制其能量代谢水平,从而发挥抑制胃癌细胞增殖活力及减少迁移及侵袭的作用。

摘要： 该研究将米曲霉RIB40(Aspergillus oryzae RIB40)来源的谷氨酰胺酶(GahB)在黑曲霉(Aspergillus niger)宿主中分泌表达。基于该研究所建立表型鉴定板与孔板培养的通量鉴定筛选方法成功得到重组表达谷氨酰胺酶的转化子H-GahB,最高酶活力达到1.35 U/mL。为了增加目的基因在宿主中的拷贝数,采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术重新构建高拷贝的谷氨酰胺酶表达菌株C-GahB,其酶活力提高到3.56 U/mL,约为H-GahB的2.64倍。进一步采用ARTP诱变技术对C-GahB进行传统诱变育种,获得了谷氨酰胺酶工程菌株A-GahB,其酶活力提升到4.16 U/mL,比出发菌株C-GahB的酶活力提高了0.17倍。纯化后的重组GahB的比酶活达到40.63 U/mg,最适温度为37°C,最适pH值为7.0,其在20~40°C及pH值5.5~8.0之间稳定性较好。K+对GahB的酶活力具有激活作用,Zn2+和Mn2+则对GahB的酶活力有较为强烈的抑制作用。当盐质量分数为18%时,GahB表现出35.38%的相对酶活力。该研究第一次在黑曲霉中实现了来源于米曲霉RIB40的谷氨酰胺酶GahB的重组分泌表达,为此后对米曲霉谷氨酰胺酶的研究提供了基础。

摘要： 本文采用ARTP诱变方法对米曲霉As3.951进行诱变获得突变菌落,交叉使用酪素平板培养基和豆汁平板培养基对突变菌落进行筛选,得到米曲霉菌株M01。采用米曲霉M01酿造酱油,产中性蛋白酶和酸性蛋白酶能力有所提高,谷氨酰胺酶活力显著高于对照菌株,谷氨酰胺酶活力相对提升约60%。采用该菌株酿造天然油,原料利用率提高约14%,氨基酸态氮提高约22%,谷氨酸含量提高约80%,发酵得到的原油鲜味、甜味突出,无需后期添加鲜味剂来增加酱油鲜味。

摘要： 以酱油曲中的谷氨酰胺酶为研究对象,通过蒸氨法测定谷氨酰胺酶酶活力,探究不同温度、pH、NaCl浓度对谷氨酰胺酶酶活力和稳定性的影响,同时分析了谷氨酰胺酶底物专一性和底物浓度对其的抑制作用.研究结果表明,酱油曲中谷氨酰胺酶最适温度为55°C,在此温度下维持8h,酶活力损失70％以上,酶热稳定性较差;最适pH为7.0,在pH6.0～9.0范围内均能维持较高的酶活力,pH稳定性优于温度;NaCl对谷氨酰胺酶酶活力具有较强抑制作用,6％NaGl浓度条件下维持4h,酶活力完全被抑制.同时,谷氨酰胺酶也能够水解天冬酰胺,并且高浓度谷氨酸对酶活力没有明显的抑制作用.该研究结果可为酱油中谷氨酸研究提供理论指导.

摘要： 目的 分析合并阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)的结直肠癌患者肠道菌群状况和病理特征.方法 选择100例患者或体检者作为研究对象,其中健康者(对照组)、结直肠癌合并OSAHS患者(结直肠癌+OSAHS组)、单纯结直肠癌患者(结直肠癌组)、单纯OSAHS患者(OSAHS组)各25例.采集所有研究对象的粪便标本,检测并对比各组肠道菌群集落数.检测结直肠癌患者癌组织以及非结肠癌者肠黏膜组织的缺氧诱导因子1(HIF-1)、谷氨酰胺酶2(GLS2)的表达情况.比较4组HIF-1和GLS2的阳性率,以及结肠癌患者癌组织、癌旁组织HIF-1、GLS2表达阳性率的差异.分析结直肠癌+OSAHS患者临床病理特征与HIF-1、GLS2表达水平的关系.结果 结直肠癌+OSAHS组、结直肠癌组、OSAHS组、对照组的乳酸杆菌集落数依次升高,大肠埃希菌集落数依次降低;结直肠癌+OSAHS组、结直肠癌组的脆弱拟杆菌、粪肠球菌集落数均高于OSAHS组、对照组,双歧杆菌集落数均低于OSAHS组、对照组(均P<0.05).与对照组比较,结直肠癌+OSAHS组、结直肠癌组、OSAHS组的HIF-1、GLS2表达阳性率均升高(均P<0.05).结直肠癌患者癌组织HIF-1、GLS2表达阳性率高于癌旁组织(均P<0.05).结直肠癌+OSAHS患者中,浸润深度大、Dukes分期高、合并淋巴结转移的患者的GLS2阳性率升高,合并淋巴结转移的患者的HIF-1阳性率升高(均P<0.05).结论 合并OSAHS的结直肠癌患者存在明显的肠道菌群紊乱,OSAHS可能通过影响肠道菌群引起结直肠癌,并与其病理特征密切相关.

摘要： 据澳新食品标准局(FSANZ)消息,2021年2月25日,澳新食品标准局发布151-21号通知,其中A1223号申请,申请将来自黑曲霉的谷氨酰胺酶(Glutaminase)作为加工助剂。据通知,该谷氨酰胺酶用于某些调味料的生产加工中。[信息来源]食品伙伴网.澳新拟批准一种谷氨酰胺酶作为加工助剂[EB/OL].(2021-2-25).http://news.foodmate.net/2021/02/585886.html。

摘要： 肺纤维化是一种进展迅速的肺部疾病,以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质沉积、肺组织结构破坏为特征的间质性肺疾病.其中位生存期为3-4年.目前治疗方法有限,预后较差.最近在器官纤维化中发现了多种代谢异常,其中包括谷氨酰胺代谢异常.文章主要就谷氨酰胺代谢过程在促进肺纤维化发病过程中的作用研究进展进行综述.

摘要： 2021年5月14日,浙江大学吕志民教授在《分子细胞》(Molecular Cell)在线发表了题为"SUCLA2-coupled regulation of GLS succinylation and activity counteracts oxidative stress in tumor cells"的论文(https://doi.org/10.1016/j.molcel.2021.04.002),揭示了谷氨酰胺酶(GLS)上的一种新型翻译后修饰——琥珀酰化对于GLS活性的重要调节作用.

摘要： 本文探讨了DCCA、蛋白酶、MTG酶处理对羊毛纤维强力、碱溶解度和摩擦系数的影响.结果表明:DCCA和蛋白酶处理使得羊毛纤维强力明显下降、碱溶解度增加,表明羊毛纤维受到一定程度的损伤.经DCCA和蛋白酶处理后再用MTG酶处理,纤维强力提升至原样的98.9％,碱溶解度降低了20.59％,揭示了MTG酶通过催化纤维大分子交联而起到一定"补强"作用.总体而言,MTG酶处理使得纤维D.F.E值增加。

摘要： 本文探讨了DCCA、蛋白酶、MTG酶处理对羊毛纤维强力、碱溶解度和摩擦系数的影响.结果表明:DCCA和蛋白酶处理使得羊毛纤维强力明显下降、碱溶解度增加,表明羊毛纤维受到一定程度的损伤.经DCCA和蛋白酶处理后再用MTG酶处理,纤维强力提升至原样的98.9％,碱溶解度降低了20.59％,揭示了MTG酶通过催化纤维大分子交联而起到一定"补强"作用.总体而言,MTG酶处理使得纤维D.F.E值增加。

摘要： 本文探讨了DCCA、蛋白酶、MTG酶处理对羊毛纤维强力、碱溶解度和摩擦系数的影响.结果表明:DCCA和蛋白酶处理使得羊毛纤维强力明显下降、碱溶解度增加,表明羊毛纤维受到一定程度的损伤.经DCCA和蛋白酶处理后再用MTG酶处理,纤维强力提升至原样的98.9％,碱溶解度降低了20.59％,揭示了MTG酶通过催化纤维大分子交联而起到一定"补强"作用.总体而言,MTG酶处理使得纤维D.F.E值增加。

摘要： 本文探讨了DCCA、蛋白酶、MTG酶处理对羊毛纤维强力、碱溶解度和摩擦系数的影响.结果表明:DCCA和蛋白酶处理使得羊毛纤维强力明显下降、碱溶解度增加,表明羊毛纤维受到一定程度的损伤.经DCCA和蛋白酶处理后再用MTG酶处理,纤维强力提升至原样的98.9％,碱溶解度降低了20.59％,揭示了MTG酶通过催化纤维大分子交联而起到一定"补强"作用.总体而言,MTG酶处理使得纤维D.F.E值增加。

摘要： 本文探讨了DCCA、蛋白酶、MTG酶处理对羊毛纤维强力、碱溶解度和摩擦系数的影响.结果表明:DCCA和蛋白酶处理使得羊毛纤维强力明显下降、碱溶解度增加,表明羊毛纤维受到一定程度的损伤.经DCCA和蛋白酶处理后再用MTG酶处理,纤维强力提升至原样的98.9％,碱溶解度降低了20.59％,揭示了MTG酶通过催化纤维大分子交联而起到一定"补强"作用.总体而言,MTG酶处理使得纤维D.F.E值增加。

摘要： 谷氨酰胺酶，该酶包括(a)一种含有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的蛋白，或(b)一种含有相对于氨基酸序列(a)进行缺失、取代或增加一个或多个氨基酸并具有谷氨酰胺酶活性的蛋白。一种谷氨酰胺酶基因，该基因编码(a)一种含有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的蛋白；或(b)一种含有相对于氨基酸序列(a)进行缺失、取代或增加一个或多个氨基酸并具有谷氨酰胺酶活性的蛋白。本发明使得能够高效地生产谷氨酰胺酶，从而有助于相关产业。

摘要： 本发明提供了编码拉达卡链轮丝菌(Streptoverticilliumladakanum)的转谷氨酰胺酶的DNA分子，所编码的转谷氨酰胺酶以及所述转谷氨酰胺酶在工业工程中的应用。

摘要： 本发明描述了具有降低的L‑谷氨酰胺酶活性和增强的体内循环的菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)L‑天冬酰胺酶变体以及含有L‑天冬酰胺酶和三个串联的可溶性TRAIL结构域的融合蛋白，其用于治疗癌症例如急性成淋巴细胞性白血病和急性髓性白血病。

摘要： 本发明涉及一种利用集成膜技术从谷氨酰胺酶或谷氨酰转肽酶的转化液中分离、浓缩L-茶氨酸的方法，包括如下步骤：（a）将酶转化液利用孔径为0.001-0.01μｍ的超滤膜进行过滤，将酶转化液中的菌体、细胞碎片、大分子杂蛋白截留去掉，过滤后得到超滤膜透过液；（b）将超滤膜透过液用聚酰胺纳滤膜进行过滤，对超滤膜透过液进行脱盐、脱色和截留小分子杂蛋白，截留分子量为200-1000的物质，过滤后得到纳滤膜透过液；（c）将纳滤膜透过液通过反渗透膜进行浓缩提取，得到浓缩液；（d）将浓缩液真空浓缩，结晶得到L-茶氨酸晶体。提取工艺全部采用膜技术分离工艺，操作简单且易实现自动化，收率高，产品纯度高，耗能少，污染物少。

摘要： 谷氨酰胺酶，该酶包括(a)一种含有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的蛋白，或(b)一种含有相对于氨基酸序列(a)进行缺失、取代或增加一个或多个氨基酸并具有谷氨酰胺酶活性的蛋白。一种谷氨酰胺酶基因，该基因编码(a)一种含有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的蛋白；或(b)一种含有相对于氨基酸序列(a)进行缺失、取代或增加一个或多个氨基酸并具有谷氨酰胺酶活性的蛋白。本发明使得能够高效地生产谷氨酰胺酶，从而有助于相关产业。

摘要： 本发明公开了利用转谷氨酰胺酶酶原生产微生物转谷氨酰胺酶的方法，包括如下步骤：（1）茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因扩增，在酶原与成熟肽之间引入牛肠激酶的识别序列DDDDK；（2）基因克隆构建表达载体，转化大肠杆菌E.coliBL21（DE3）为工程菌E.coliBL21/proMTG，菌株保藏号为CCTCCM208240；（3）可溶性诱导表达转谷氨酰胺酶酶原；（4）亲和层析纯化蛋白，获得转谷氨酰胺酶酶原；（5）采用牛肠激酶激活酶原为成熟的转谷氨酰胺酶。本发明获得的转谷氨酰胺酶生物活性高；简化了发酵生产工艺，可以特异性完整切除转谷氨酰胺酶酶原序列，不会因非特异性切割或长时间切割导致酶的降解。

摘要： 本发明提供一种测定含转谷氨酰胺酶制品的蛋白酶活性的方法，所述方法包括：将含转谷氨酰胺酶制品的水溶液(样品溶液)和二甲基酪蛋白的水溶液按规定的[转谷氨酰胺酶活性]/[二甲基酪蛋白量]的比例进行混合，让混合物在规定的条件下静置，以使混合物在蛋白酶的作用下降解，向混合物中加入酸，过滤该混合物，测定滤液中的蛋白质的量。本方法特别适用于制备食物粘结用转谷氨酰胺酶制剂和鱼糜制品用转谷氨酰胺酶制剂。

摘要： 本发明提供了编码拉达卡链轮丝菌(Streptoverticilliumladakanum)的转谷氨酰胺酶的DNA分子，所编码的转谷氨酰胺酶以及所述转谷氨酰胺酶在工业工程中的应用。

摘要： 本发明描述了具有降低的L‑谷氨酰胺酶活性和增强的体内循环的菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)L‑天冬酰胺酶变体以及含有L‑天冬酰胺酶和三个串联的可溶性TRAIL结构域的融合蛋白，其用于治疗癌症例如急性成淋巴细胞性白血病和急性髓性白血病。

摘要： 本发明涉及一种利用集成膜技术从谷氨酰胺酶或谷氨酰转肽酶的转化液中分离、浓缩L-茶氨酸的方法，包括如下步骤：（a）将酶转化液利用孔径为0.001-0.01μｍ的超滤膜进行过滤，将酶转化液中的菌体、细胞碎片、大分子杂蛋白截留去掉，过滤后得到超滤膜透过液；（b）将超滤膜透过液用聚酰胺纳滤膜进行过滤，对超滤膜透过液进行脱盐、脱色和截留小分子杂蛋白，截留分子量为200-1000的物质，过滤后得到纳滤膜透过液；c）将纳滤膜透过液通过反渗透膜进行浓缩提取，得到浓缩液；（d）将浓缩液真空浓缩，结晶得到L-茶氨酸晶体。提取工艺全部采用膜技术分离工艺，操作简单且易实现自动化，收率高，产品纯度高，耗能少，污染物少。