互作蛋白

摘要： 【目的】为了给组蛋白去乙酰化酶703(OsHDA703)在水稻抗病生物学功能及作用机制研究提供基础资料。【方法】应用接合型酵母双杂交的方法,构建了pGBKT7-OsHDA703酵母双杂诱饵载体,并在RSV侵染的水稻酵母文库中筛选了与OsHDA703互作的蛋白。【结果】在发现OsHDA703诱饵载体没有自激活性的条件下,从水稻酵母文库中筛选到14个非重复的候选基因序列,表明这14个蛋白可能与OsHDA703互作。经在水稻基因组注释平台分析,这些基因编码的蛋白包括4个细胞核蛋白、2个线粒体蛋白、7个质体蛋白和2个未知功能蛋白,其中编码锌指蛋白和转座子蛋白的2个基因表达在RSV的侵染后正调控,而其他12个基因负调控。【结论】此结果为进一步揭示组蛋白去乙酰化酶应答病毒侵染的分子机制提供了理论依据。

摘要： 为探讨HSP27基因在藏羊卵巢卵母细胞成熟及排卵过程中的作用通路,本研究构建了HSP27基因真核表达体系,利用免疫共沉淀、双向电泳及生物质谱技术鉴定藏羊卵巢全蛋白提取物中与HSP27蛋白特异性相互作用的蛋白,构建互作网络,通过生物信息学分析并预测HSP27基因在藏羊卵巢卵泡发育过程的作用通路。结果表明:藏羊卵巢全蛋白提取物中的HSP10、ERK1、Bcl-2、BMPR-1B、MTHFR、RhoD、ANXA2、Calmodulin、Transgelin、GDF5、Galectin-1、PEBP、LDH-1和SOD[Cu-Zn]等14种已识别候选蛋白与HSP27蛋白具有特异性相互作用;通过生物信息学分析表明目的蛋白在TGF-β、MAPK和m TOR信号通路中构成了复杂且紧密的交互网络,同时基于互作结果设计HSP27蛋白调节藏羊卵母细胞成熟和排卵的代谢途径,发现HSP27蛋白与BMPR-1B、GDF5、ERK1、Calmodulin、Bcl-2和SOD[Cu-Zn]具有强烈的交互作用。本研究结果为进一步探讨藏羊卵泡发育、成熟和排卵机理,以及HSP27基因作为藏羊繁殖性状目的基因用以提高藏羊产羔率提供了基础资料和理论依据。

摘要： 采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA,运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列;通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1,鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况;利用诱饵质粒p GBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白。结果显示:成功构建重组诱饵质粒p GBKT7–STMN1,并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用,且能在酵母细胞中正常表达;筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆,经测序比对分析和点对点验证,得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白,这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程。

摘要： 为进一步探索波形蛋白(vimentin)调控绒山羊绒毛生长的作用机制,以内蒙古遗传种子资源阿尔巴斯白绒山羊皮肤中的毛囊组织为材料,利用PCR技术和酵母双杂交技术对根据GenBank中山羊的vimentin蛋白序列,运用蛋白质互作在线软件预测和液相色谱质谱联用采集免疫共沉淀数据筛选出肌动蛋白(ACTB)和vimentin进行基因引物设计、克隆、酵母表达载体构建和蛋白互作鉴定。结果显示:成功克隆出绒山羊vimentin基因CDS区序列的长度为1 401 bp, ACTB基因CDS区序列的长度为1 128 bp;构建了酵母表达载体;试验组共转化pGBKT7-vimentin与pGADT7-ACTB的Y2HGold菌株在二缺板SD/-Trp/-Leu/X-α-GaL/AbA培养基和四缺板SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-GaL/AbA培养基上,均能生长出淡蓝色菌落,而在对照组共转化pGBKT7空质粒与pGADT7-ACTB重组质粒的二缺板SD/-Trp/-Leu/X-α-GaL/AbA培养基上长出白色菌落,表明共转化的pGBKT7-vimentin与pGADT-ACTB重组质粒的下游报告基因Lac被激活,共转化pGBKT7空质粒与pGADT7-ACTB重组质粒的下游报告基因Lac未被激活。提示:vimentin与ACTB两种蛋白间存在相互作用。

摘要： 枯萎病是节瓜生产中的主要病害,节瓜抗性材料中CqWRKY31受致萎毒素镰刀菌酸(FA)胁迫诱导表达,为节瓜响应FA胁迫的正调控因子。为深入挖掘CqWRKY31的功能,本试验利用酵母双杂交技术筛选CqWRKY31的互作蛋白。试验结果显示,共得到45个与节瓜CqWRKY31有潜在互作关系的蛋白。通过进一步回转验证,发现42个蛋白与CqWRKY31在酵母中存在互作关系。对所有单克隆进行测序、Blast分析,42个蛋白包括10个SRC2或SRC2同源蛋白、3个E3泛素蛋白连接酶、6个DNA损伤诱导蛋白、3个AT-hook核定位蛋白。试验结果为解析CqWRKY31调控节瓜枯萎病抗性机制奠定了重要基础。

摘要： 【目的】揭示小麦蓝矮植原体(WBD phytoplasma)的致病机理及其与寄主的互作关系,为植原体病害防治提供理论依据。【方法】以SWP16为诱饵,将SWP16构建到诱饵载体pBT3-STE和pBT3-SUC上,在小麦酵母双杂交膜系统cDNA文库中筛选与SWP16互作的蛋白,并确定最佳的筛库条件。通过α-半乳糖苷酶活性检测试验对筛选到的互作蛋白进行二次验证,并运用Uniprot对其进行Gene Ontology(GO)注释分析。【结果】以pBT3STE-SWP16作为筛库的诱饵蛋白,确定20 mmol/L 3-AT为筛选文库的最佳浓度,从小麦cDNA文库中筛选到20种互作蛋白,包括Rieske蛋白、细胞色素b5、CASP蛋白等。经过复筛和α-半乳糖苷酶活性检测试验进一步验证了互作关系,其中14种互作蛋白参与运输、pH调节、光合作用、内质网应激反应、蛋白质泛素化等生理过程;18种互作蛋白存在于线粒体、内质网、细胞膜、细胞质、叶绿体和细胞壁等6种细胞组分中;20种互作蛋白的分子功能主要包括几丁质酶活性、反转运蛋白活性、脱水酶活性、转移酶活性和转录因子活性等。【结论】筛选获得20种与小麦蓝矮植原体效应蛋白SWP16互作的蛋白,有助于推动小麦蓝矮植原体与寄主互作关系的研究。

摘要： 泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用。为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(Et Ub)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEt Ub蛋白,用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔获得多克隆抗体。用qPCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段EtUb基因的转录和蛋白质翻译水平。结果显示:EtUb基因在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的转录和翻译水平均高于未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子阶段;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要分布于子孢子和第二代裂殖子的顶端表面;抗体入侵抑制实验显示兔抗rEt Ub-IgG能明显抑制子孢子入侵BHK细胞,浓度为300μg/mL时,抑制率达到36%;免疫共沉淀实验共筛选出10个与Et Ub潜在互作的虫体蛋白,包括Myosin A、Microneme protein 3等。研究结果为深入研究EtUb基因在球虫中的功能奠定了基础。

摘要： 目的探究昼夜节律基因对红花黄酮类物质生物合成的影响及机制。方法基于红花花冠转录组及代谢组数据库筛选潜在调控红花黄酮类化合物生物合成的昼夜节律基因;用qPCR测定红花各部位以及花冠单日不同时间点昼夜节律基因的表达量,液质联用测定黄酮类化合物的积累量,并分析二者的相关性;酵母双杂交实验验证昼夜节律基因的互作蛋白。结果获得7个昼夜节律基因PRR1、PRR2、ELF3、FT、PHYB、GI、ZTL,其中PRR1基因与黄酮类化合物积累量呈正相关(r≥0.7)。PRR1全长3201 bp,编码421个氨基酸,与水稻OsPRR73基因高度同源,将其命名为CtPRR1(GenBank登录号:MW492035)。CtPRR1主要在花中表达,表达量在日间逐渐升高,晚间逐渐下降;黄酮类化合物芹菜素、槲皮素、HSYA、山奈酚、Carthamin、山奈酚-3-O-葡萄糖苷以及野黄芩素的含量为白天逐渐降低,晚间逐渐升高,二者都有昼夜节律性且呈负相关(r≥−0.7)。酵母双杂实验得到2个热休克蛋白、3个AP2转录因子。结论CtPRR1对红花黄酮类成分的昼夜节律性积累起负调节作用;CtPRR1可能受这些互作蛋白的影响调控红花黄酮类成分的昼夜节律性积累。

摘要： 碱性亮氨酸拉链bZIP是真核生物转录因子家族之一,通过调控基因的表达来参与调控生长发育及生物、非生物胁迫应答等生理过程。已有报道表明bZIP转录因子Atf1与多种病原真菌的生长发育及致病力相关。由于转录因子通常能够在其他互作蛋白的参与下与顺式作用元件特异性结合,从而调节靶基因表达,因此筛选其互作蛋白对深入了解转录因子的调控机制有重要意义。本研究克隆获得来自橡胶树炭疽病的暹罗炭疽菌(Colletotrichumsiamense)的一个bZIP转录因子CsAtf1,并对CsAtf1互作蛋白进行了筛选和鉴定。研究结果显示,暹罗炭疽菌CsAtf1的DNA大小为1758 bp,cDNA为1611 bp,编码536个氨基酸,包含2个内含子,具有3个Aft1结构域和1个BRLZ结构域;利用酵母双杂技术,以pGBKT7-CsAtf1为诱饵,从暹罗炭疽菌cDNA酵母文库中筛选获得12个候选互作蛋白,包括细胞壁蛋白PhiA、Rodlet蛋白、乙醇脱氢酶、线粒体缺氧反应区蛋白、发育调控的MAPK相互作用蛋白、自噬相关蛋白、葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶、β-葡萄糖苷酶、c-4甲基固醇氧化酶、甲基转移酶和2个假定蛋白;研究还进一步利用免疫共沉淀技术证实了转录因子CsAtf1能够与线粒体缺氧反应区蛋白CsHIG发生体内互作。

摘要： PTD-FNK蛋白是人工形成的重组蛋白质,已被证明在细胞凋亡、精子冷冻保存过程中对细胞有一定的保护作用,虽然在实践中应用普遍,但国内未见其机理分析和通过蛋白结合参与调控的报道。结合Protparam、ProtScale等相关在线软件预测和分析PTD-FNK蛋白的理化性质、亲水性、二、三级结构等;分离培养猪睾丸支持细胞,采用HISpulldown技术拉下PTD-FNK未知的互作蛋白,得到的数据用UniProt数据库对比。生物信息学结果表明,PTDFNK蛋白编码295个氨基酸,蛋白质分子量33.195ku,分子式为C_(1456)H_(2225)N_(437)O_(439)S_(10);该蛋白含有PKC、PKA特异性磷酸化的结合位点。得到的互作蛋白有葡萄糖调节蛋白78、波形蛋白-1、组蛋白等。预测PTD-FNK蛋白可能通过PKA、PKC特异性磷酸化结合位点或者与蛋白互作的方式参与细胞凋亡、精子发生等过程。

摘要： 为了阐明苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)出芽型病毒(Bv)囊膜蛋白GP64是否与寄主细胞表面蛋白存在互作,利用蛋白酶K消化Tn细胞系的细胞膜蛋白,结果表明被浓度为300μg/ml的蛋白酶K消化过的Tn细胞系不能被BV感染,免疫荧光结果显示BV病毒粒子不能吸附与细胞上,表明细胞膜蛋白中存在与BV囊膜蛋白GP64互作的蛋白分子.利用病毒覆盖蛋白印迹实验(VOPBA)及质谱初步鉴定到转录控制肿瘤蛋白(TCTP)是与BVGP64直接结合的细胞互作蛋白.

摘要： NF90是一种新型的宿主抗病毒因子,具有调节流感病毒感染细胞的PKR激酶活性的能力,但确切的调控机制尚未阐明.本研究拟通过研究NF90与流感病毒非结构蛋白(NS1)的互作关系以及NF90对NS1的功能调节方面探讨NF90的抗病毒作用机制.本研究通过兔疫亲和沉淀结合串联质谱技术筛选和鉴定了NS1的宿主互作蛋白;通过转染与病毒感染实验证明了候选互作分子之一的NF90是NS1的新型靶蛋白;通过突变分析结合免疫沉淀证明了NF90与NS1的互作依赖于NS1的RNA结合特性,并证明NS1通过N端的RNA结合区结合NF90分于的C端RNA结合区,通过兔疫沉淀证明了NS1可以分别结合NF90和PKR,但是NS1的表达可以抑制NF90结合PKR,提示NF90可能参与了NS1抑制PKR磷酸化激活的过程;功能研究表明,siRNA抑制NF90的表达可以促进NS1对PKR磷酸化的抑制作用,过表达外源NF90则可以阻遏NS1转染细胞中NS1对PKR磷酸化的抑制活性,也可以阻遏不同亚型的甲型流感病毒对A549细胞中PKR磷酸化的抑制.本研究表明,NF90通过拮抗流感病毒NS1对PKR磷酸化的抑制作用从而发挥其抗病毒活性.

摘要： 钠通道蛋白1.5亚型(Nav1.5)由SCN5A基因编码,是心脏组织中存在的主要钠通道的α亚基,形成了钠离子流流动的主要孔道.Nav1.5并非单独存在,其与多种蛋白结合,参与组成"大分子复合物"而发挥效应.这些与Nav1.5结合的蛋白即为互作蛋白,互作蛋白也被称为辅助蛋白、附属蛋白、衔接蛋白、相关蛋白、效应蛋白、调节蛋白、锚定蛋白和支架蛋白等.互作蛋白的命名尚无明确的定义,在多方面对Nav1.5通道具有调节作用,包括通道的活性,通道在细胞的准确定位.基于近年来报道的多种直接或间接与Nav1.5相互作用的蛋白，有理由推测，对于Nav1.5通道的生物合成以及功能等方面的调节远比预期复杂。目前究竟有多少种Nav1.5互作蛋白以及它们以何种方式共同形成大分子复合物仍不清楚。未来对于新的Nav1.5互作蛋白的探索以及各种互作蛋白间的复杂作用将会有助于阐明心律失常的分子机制。

摘要： 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease virus.FMDV)引发的一种主要危害牛、羊、猪等偶蹄动物的急性、热性传染病.FMDV非结构蛋白3A与病毒复制、毒力和宿主嗜性密切相关.FMDV3A蛋白由153个氨基酸组成,而其他微RNA病毒3A蛋白由大约76个氨基酸组成,该蛋白N端和中间的跨膜区非常保守,而C端的氨基酸序列保守性较差,该蛋白的序列保守性可能影响其功能的发挥.本实验首先构建了牛舌细胞和牛甲状腺细胞的cDNA文库，并采用酵母双杂技术，以3A全长、3A、3A为诱饵，与牛甲状腺和牛舌细胞的cDNA文库进行双杂交，筛选获得一个与3A杂交的阳性克隆，继而通过RACE技术克隆全长基因。结果分析表明，该基因全长360个碱基，与SSNA1具有较高同源性。与3A互作的牛源细胞蛋白的筛选与全长基因的获得，为进一步阐明FMDV3A蛋白在病毒侵染细胞周期中的生物学功能奠定了基础。

摘要： 为了研究TuMV与不结球白菜的互作，以TuMV接种的不结球白菜叶片为材料,构建cDNA文库。以TuMV响应基因LRK01为探针,与文库杂交,筛选得到28个阳性克隆,经过测序和同源性比对分析表明,一条编码真核延伸因子Tu(EF-Tu)的基因可能参与了不结球白菜与TuMV的互作。通过酵母双杂交验证了EF-Tu与LRK01互作，实时定量分析显示TuMV侵染抑制该基因的表达。

摘要： 本发明提供一种阻断多肽，该多肽能够阻断中国对虾PcRab7蛋白与WSSV囊膜蛋白VP28的相互作用，具有抗WSSV的作用。本发明所提供的阻断多肽，其氨基酸序列为TAPLAITAIIAVFI。本发明所提供的多肽可以阻断PcRab7结合VP28，进而影响病毒包膜和宿主细胞膜的融合，使病毒无法进入宿主细胞，实现抗WSSV的作用。本发明采用对虾感染实验验证了其可以有效延长对虾感染WSSV后的存活时间，可以作为有效的抗WSSV候选药物，为今后WSSV的防治提供可能的多肽药物。

摘要： 本发明公开基于双色荧光标签蛋白GFP和mCherry进行免疫共沉淀检测蛋白互作的方法，将目标基因分别构建到表达载体的N端，提质粒后转化农杆菌，制备农杆菌侵染液共注射模式植物，提取共注射烟草叶片蛋白，用GFP‑Trap A beads去富集带有GFP标签的目标蛋白，同时将带有mCherry标签的其他目标蛋白免疫下来，最后分别使用GFP和mCherry标签抗体检测目标蛋白在免疫前和免疫后的表达及互作情况。本发明在实现荧光可视化实时监控目标蛋白在活细胞内表达及共定位的同时，可实时选择表达量最高的时期直接进行免疫共沉淀高效验证蛋白互作，极大提高蛋白互作验证的成功率，大幅度降低时间和经济成本。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，特别是指一种与瓜类褪绿黄化病毒沉默抑制子蛋白互作的蛋白及其应用。所述蛋白为SKP1，其蛋白序列如SEQ ID NO：2所示。所述SKP1的基因序列如SEQ ID NO：1所示。所述的与瓜类褪绿黄化病毒沉默抑制子蛋白互作的蛋白作为沉默抑制子P22蛋白的应用，步骤为：根据Skp1基因的全长，设计引物对如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4所示；构建Skp1基因的重组表达载体；将重组表达载体通过农杆菌转化法转染瓜类植株。该蛋白与P22的互作与P22对GFP的沉默抑制作用直接相关，P22不能与SKP1互作的突变体对GFP的沉默抑制作用显著减弱。

摘要： 本发明公开了基于与醇溶蛋白的互作在植物中积累目标蛋白的方法。本发明验证了目标蛋白NZP1、NZP2和NZP3分别与醇溶蛋白22‑kDα‑zein互作，并通过在烟草中表达Zera‑22和目标蛋白NZP1、NZP2或NZP3，以及在烟草中表达Zera和目标蛋白NZP1、NZP2或NZP3的实验，结果表明Zera‑22在烟草中诱导蛋白体形成，目标蛋白定位在Zera‑22形成的蛋白体中，证明了目标蛋白NZP1、NZP2和NZP3能够通过与22‑kDα‑zein的互作积累在Zera‑22形成的蛋白体中。由此，可基于与醇溶蛋白的互作实现目标蛋白在植物中的积累，进而应用于蛋白质生产中。

摘要： 本发明是一种通过控制蛋白‑EGCG互作改善肌原纤维蛋白凝胶特性的方法，属于肉与肉制品加工领域。本发明所述方法通过将一定浓度的支链淀粉（Amp）和EGCG以一定比例混合均匀后加入到肌原纤维蛋白溶液中，然后通过热诱导制备肌原纤维蛋白凝胶。本发明中所用支链淀粉能与EGCG形成络合物，通过控制蛋白‑EGCG相互作用以抑制高剂量EGCG对肌原纤维蛋白凝胶特性的不利影响，改善肌原纤维蛋白凝胶的品质，从而提高EGCG的添加剂量，达到持续抗氧化的目的。本发明所述方法与其他一些方式（如蛋白质进行糖基化）相比简单有效，为控制蛋白‑多酚互作改善肌原纤维蛋白凝胶特性提供了新的思路。

摘要： 本发明提供一种阻断多肽，该多肽能够阻断中国对虾PcRab7蛋白与WSSV囊膜蛋白VP28的相互作用，具有抗WSSV的作用。本发明所提供的阻断多肽，其氨基酸序列为TAPLAITAIIAVFI。本发明所提供的多肽可以阻断PcRab7结合VP28，进而影响病毒包膜和宿主细胞膜的融合，使病毒无法进入宿主细胞，实现抗WSSV的作用。本发明采用对虾感染实验验证了其可以有效延长对虾感染WSSV后的存活时间，可以作为有效的抗WSSV候选药物，为今后WSSV的防治提供可能的多肽药物。

摘要： 描述了用于评估G蛋白活性的基于共振能量转移(RET)或蛋白片段互补测定的生物传感器。这些生物传感器基于Gα亚基和Gβγ互作蛋白之间竞争结合于Gβγ二聚体。这些生物传感器包括：与适当的RET或PCA标记融合的(1)βγIP和(2)Gβ或Gγ蛋白；GPCR；或质膜靶向域。还描述了使用这样的传感器用于不同的应用的方法，所述应用包括对调节G蛋白活性的试剂的鉴别或对GPCR信号传导/调节的表征的鉴别如GPCR的G蛋白偏好和激活谱。

摘要： 本发明公开SlJAZ2蛋白及其互作蛋白在提高番茄抗病性方面的应用。利用Pst DC3000病原菌对转基因番茄进行侵染，观察病斑生长情况、进行细菌计数，对转基因植株的抗病性进行评估，明确了SlJAZ2蛋白可以提高番茄抗病性。本发明还进一步筛选SlJAZ2的互作蛋白，明确JAZ1蛋白、EIN2蛋白与SlJAZ2的互作关系，首次提出了SlJAZ2蛋白及其互作蛋白在提供番茄抗病性方面的应用。

摘要： 本发明公开了一种猪囊等孢球虫CsENO2蛋白与宿主细胞未知蛋白互作的方法。该方法是利用Enos引物并以pET30(a)‑enolase为模板进行PCR反应，获得猪囊等孢球虫CsENO2基因，然后将猪囊等孢球虫CsENO2基因以分子克隆的方式接到真核表达载体pcDNA3.1上，并利用转染的方式送到细胞内，通过真核表达CsENO2蛋白后,以CsENO2抗体利用免疫共沉淀的方法将细胞内互作蛋白抓下来，最终经由SDS‑PAGE分析增加的条带，蛋白质条带经由质谱仪分析后即可确认互作蛋白的身份。本发明方法的技术门坎较低，只需基本的转染技术以及免疫共沉淀技术即可进行分析；同时，本发明不易存在假阳性的问题。

摘要： 本发明涉及农业育种技术领域，具体涉及一种水稻类钙调磷酸酶B蛋白互作蛋白激酶及其在育种中的应用，水稻类钙调磷酸酶B蛋白互作蛋白激酶为CIPK17；CIPK17的过表达植株CIPK17‑OE2和CIPK17‑OE3在正常生长条件下表现为抑制植物的幼苗生长表型，CIPK17突变体CRISPR CIPK17‑41和CRISPR CIPK17‑44均表现与亲本表型相似，即幼苗生长正常，与野生型无异。CIPK17的材料在3μM甲基紫晶MV处理下，过表达植株CIPK17‑OE3和CIPK17‑OE9的幼苗生长表型明显好于亲本，CIPK17突变体CRISPR CIPK17‑41和CRISPR CIPK17‑44则与亲本表型相似。本发明通过实验证明CIPK17过表达株系和突变体，分别具有抗除草剂，幼苗生长好于亲本表型/正常表型及正常生长条件下，抑制幼苗生长的表型/正常表型，通过对水稻CIPK17进行转基因研究分析，筛选出需要的水稻种子进行培育，选种准确，节省时间。