鸭瘟病毒

摘要： 鸭瘟病毒UL36蛋白是该病毒皮层结构的主要成分,也是主要的抗原蛋白.本文利用生物信息学方法就基因序列与蛋白组分分析、信号肽预测、跨膜区预测与亚细胞定位等方面对该基因及编码蛋白序列进行分子特性分析,以便为后期实验研究提供参考依据.

摘要： [目的]2020年8月,福建省福州地区某鸭场饲养的半番群发病,发病率约为65％,病死率高达90％以上,感染鸭皮肤表面可见大量出血,为了明确其病原和病理组织学特征.[方法]分别采集发病鸭的肝脏、脾脏、胰腺、肾脏、皮肤等组织进行鸭常见病原检测、病毒分离鉴定、基因序列测定分析及病理组织学观察.[结果]病原检测结果显示,所采集组织仅鸭瘟病毒PCR检测呈阳性,其余病原均为阴性;对阳性样品进行病毒分离鉴定,结果从发病鸭内脏组织和皮肤中分离出鸭瘟病毒,命名为FJ2020176.对新分离鸭瘟病毒FJ2020176株UL2基因进行序列测定与分析发现,其与鸭瘟强毒株CHv株、CV株和2085株的核苷酸同源性为97.8％～99％;与疫苗株VAC株、Attenuatedstrain 1株和Attenuated strain 2株等弱毒株相比,FJ2020176株在UL2基因中存在528 bp的核苷酸插入,表明该毒株为鸭瘟病毒强毒株.病理组织学观察显示,感染鸭可见肝脏局灶性坏死、出血;脾脏组织白髓减少,淋巴细胞坏死、脱落;肾脏出血、淤血;法氏囊出血,淋巴小结坏死;皮下出血.[结论]从皮肤大量出血的发病鸭中分离到1株鸭瘟病毒强毒株,表明皮肤出血亦为鸭瘟病例的临床特征,以上结果为临床上鸭瘟的诊断提供了新的试验数据.

摘要： 2020年3月,山东省高青县某鸭场暴发一种以精神委顿、食欲下降、咳嗽、流泪和腹泻为主要临床特征的疫病,经临床诊断和实验室检测确诊为鸭瘟与鸭疫里默氏杆菌混合感染,为及时采取有效治疗措施提供了参考依据.

摘要： [背景]鸭瘟和鸭坦布苏病毒是鸭的两种重要传染病,鸭瘟属于疱疹病毒科,具有开发成病毒载体的优势.为了优化鸭坦布苏病毒E基因在重组鸭瘟病毒载体中的表达,之前探讨了不同形式鸭坦布苏病毒E蛋白在重组鸭瘟病毒载体中的表达,发现以鸭为宿主进行密码子优化的E基因C端截短形式(E451-dk,简称为Es)表达量最高.[目的]探讨不同启动子对Es在重组鸭瘟病毒载体中表达的影响,为鸭瘟病毒—坦布苏病毒二联苗的研制奠定基础.[方法]将pCAG、pSV40、pRSV、p1.8k(MDV)和pgB(MDV)启动子通过常规基因克隆的方法替换转移载体pEP-BGH-Es中的pCMV启动子,构建不同启动子调控Es表达的重组表达框pro-Es-BGH-pA.在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,将5个重组表达框分别通过"Red E/T两步重组"克隆至pDEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带不同启动子调控的Es突变体克隆pDEV-pro-Es.用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得相应重组病毒rDEV-pro-Es,并对重组病毒感染细胞蚀斑大小和Es蛋白表达情况进行测定.[结果]将重组突变体克隆转染细胞拯救获得了5株重组病毒rDEV-pro-Es.Western blotting分析表明外源蛋白Es在pRSV调控下表达量最高,其表达量较rDEV-Es提高了169.12％.[结论]完成了Es在重组鸭瘟病毒载体中高效表达启动子的筛选,获得了一种调控Es高效表达的启动子pRSV.同时也获得了一株高效表达鸭坦布苏病毒外源基因Es的重组鸭瘟病毒rDEV-pRSV-Es.

摘要： 以江苏昆山某鸭养殖场为例,介绍了鸭群感染鸭瘟的基本情况、临床症状、病理解剖及实验室检查情况,最终确诊,并提出了对应的防治方法.

摘要： 为了一次性检测临床样品中是否存在鸭新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DPV)或鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染,本研究根据GenBank已登录的3种病原的保守基因序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化扩增条件,建立了可同时检测NDV、DPV和DTMUV的多重PCR检测方法.特异性检验表明,该多重PCR方法可同时扩增出NDV (510 bp)、DPV (400 bp)、DTMUV (300 bp)的特异片段,对其他鸭常感染病毒扩增结果均为阴性;敏感性测定表明,该多重PCR技术最低能检出1.02×10 4拷贝·μL-1 NDV、3.50×10 3拷贝·μL-1 DPV和1.17×10 4拷贝·μL-1 DTMUV.采用建立的多重PCR方法对250份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100％.以上结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法具有快速、特异性强、敏感性高等优点,适用于临床样品中上述3种病原的检测.

摘要： 根据鸭瘟病毒(DEV)gE基因的特征,设计特异性引物和探针,经条件优化后,建立检测DEV的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果表明:当gE基因含量为1.0×101～1.0×106拷贝·μL-1时,建立的实时荧光定量PCR检测方法有良好的线性扩增,其标准曲线方程为:y=-3.480x+37.955,扩增相关系数为0.999;敏感性强,最低检测限为10拷贝·μL-1;特异性好,仅对DEV强毒株和弱毒活疫苗株检测到阳性扩增信号,对鸭源其他传染病病原(番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒、新型鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、禽1型副粘病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62％～1.14％和0.69％～2.40％.对临床送检疑似DEV感染的14份样品进行检测,并与常规PCR方法、病毒分离鉴定进行比较,阳性率分别为85.71％(12/14)、71.43％(10/14)和57.14％(8/14);且与常规PCR方法、病毒分离鉴定的阳性符合率均为100％.本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法,可用于开发DEV快速诊断试剂盒,用于开展DEV流行病学调查.

摘要： 旨在研究鸭群中新流行的鸭瘟病毒(duck plaque virus,DPV)感染状况及其分子特征.本研究对2016-2017年福建不同地区疑似感染DPV的发病鸭组织样品进行了检测、病毒分离和部分基因的序列分析.从临床样品中分离获得24株DPV,发现确诊感染DPV鸭的日龄存在品种差异性,其中半番鸭和番鸭感染DPV的日龄中位值分别为90和88 d,而麻鸭感染DPV的日龄中位值为287 d.对DPV UL 56/LORF5基因、TK/gH基因及UL2区域的序列分析表明,分离毒株均未出现基因片段缺失,与我国DPV参考强毒株的序列相似性均在99％以上,但在UL 56/LORF5基因及TK基因上存在有规律性的核苷酸变异.经分子系统进化分析发现,新近流行的DPV毒株与我国参考强毒株(Group Ⅰ)处于不同进化分支,为GroupⅡ进化分支,且可进一步细分为两个不同的亚分支(GroupⅡa、GroupⅡb).以上结果揭示,新近流行的DPV毒株感染不同品种鸭存在日龄差异性,与我国DPV参考强毒株相比已出现不同程度的变异,应加强对该病毒的分子流行病学监测,实时了解其流行变异情况,为新流行鸭瘟的快速准确诊断和防控提供科学依据.

摘要： 为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中的复制非必需区,本研究在已建立的DEV疫苗株5粘粒拯救系统的基础上,利用转座子随机插入技术,将含eGFP表达框架的基因片段随机插入DEV US区,救获两株表达绿色荧光蛋白的重组DEV (rDEV-us7eGFP、rDEV-us8usleGFP).将两株重组病毒在鸡胚成纤维细胞中连续传至20代后,通过PCR、荧光表达鉴定分析,结果显示gfp基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与DEV疫苗株无显著差异.攻毒保护实验结果表明,将rDEV-us7eGFP和rDEV-us8us1eGFP以105TCID50的剂量免疫SPF鸭后,其对鸭瘟强毒攻击的保护效率与DEV疫苗株一致,均为100％.本研究成功筛选到DEV基因组中的两个可供外源基因插入的复制非必需区,分别位于us7基因内部及us8与us1基因之间,为以DEV为载体构建相关重组疫苗奠定了重要基础.

摘要： 通过SPF鸡胚进行鸭瘟病毒培养和增殖,采用反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法(sucrose-density-gradient-centrifugation,SDGC),纯化后病毒粒子作为ELISA包被抗原,从而建立了鸭瘟病毒间接酶联免疫吸附试验(ELISA).经对不同血清样品的检测,表明此方法具有操作简便、敏感性高、特异性好的优点,特别适用于大批鸭群的抗体检测和流行病学调查,为合理免疫和疫病预防提供有效的技术手段.

摘要： 目的：分析鸭瘟病毒感染鸭胚肝间充质干细胞(LSMC)对主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子表达量的影响.方法：利用抗原转运相关蛋白体(TAP)单倍型B2系无特定病原体(SPF)鸭制备鸭胚LSMC,感染鸭瘟病毒,利用荧光定量PCR染料法检测细胞中MHCⅠ类分子表达量的动态变化.结果：鸭瘟病毒疫苗毒株KCE在F4代LSMC吸附2h,感染44h内,MHCⅠ类分子剧烈上调;而强毒株CSC分别感染F1、F4和F7代LSMC后,在48h内MHCⅠ类分子的表达量变化规律不稳定.结论：鸭瘟弱毒株能稳定地引起鸭胚LSMC感染早期上调MHCⅠ类分子的表达,可利用LSMC进行抗原递呈和免疫应答能力的研究.

摘要： 目的：为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法. 方法：根据NCBI公布的来自中国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化. 结果：该方法敏感性高,最低能检出5.3pgⅠ型鸭肝炎病毒和2.7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA模板.其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和流感病毒(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒检测结果为阳性.用建立的方法检测了江苏徐州采集的100份样品,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的阳性率分别为1.2％和26％. 结论：建立了Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法.

摘要： 细胞凋亡在病毒感染导致病理变化中起到重要的作用.这篇文章研究了鸭瘟病毒(DPV,duck plague virus)导致鸭胚成纤维细胞发生细胞凋亡的分子机制.DPV感染鸭胚成纤维细胞(DEF,duck embryo fibroblast)后会出现明显的病理变化,用DAPI染细胞核会发现明显的细胞核碎裂、染色质浓缩等凋亡形态特征的变化.同时发现DPV感染细胞时能够激活caspase-3/7、caspase-8、caspase-9.Caspase-8在死亡受体通路起关键作用,caspase-9在线粒体通路中起关键作用,因此DPV能通过死亡受体通路及线粒体通路诱导DEF凋亡.另外DPV感染细胞后还能引起线粒体膜电位降低.用qRT-PCR检测死亡受体及线粒体通路相关因子(caspase3、caspase-8、caspase-9、Bcl-2、Bcl-xl、Bak、Bid、Apaf-1、Fas、FasL、cyt-c)mRNA都有明显的上调.这是第一次证明鸭瘟病毒感染细胞后能够通过死亡受体通路及线粒体通路诱导细胞凋亡.

摘要： 为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况.本实验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代致第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等方法分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴度(TCID50).第一代DPV即在鸭胚脐带间充质干细胞上产生了明显的CPE,并且在连续传代的过程中CPE能够稳定出现.电镜观察显示,初步提纯的病毒悬浮液在电镜下可见到结构清晰的子代病毒.PCR检测结果显示,F1～F10代DPV均能扩增出大小为416bp的UL6基因片段.间接免疫荧光又进一步证实DPV的阳性血清能够对染毒病灶产生特异性荧光染色.而且连续测定10代的病毒滴度(TCID50)均不低于10-6.43.说明DPV能在鸭胚脐带间充质干细胞上稳定增殖.本研究有望为获得高纯度鸭瘟病毒及细胞源疫苗研究提供理论基础.

摘要： 2015年3月,福建省福州地区两个鸭场(M18肉鸭场及蛋鸭场)发生大量鸭死亡,初诊疑似鸭瘟.为明确其病原,分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离,对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测,确定均为鸭瘟病毒.对新分离鉴定的2株鸭瘟病毒株的UL2基因进行序列测定及分析发现,均具有强毒株的分子特征;经TK基因序列测定及分析表明,2株新分离的鸭瘟病毒株与强毒代表株、弱毒疫苗株的TK基因核苷酸同源性均高达98.7％.

摘要： 建立可同时检测鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒的双重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.根据GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的双重RT-PCR.优化后的双重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,加ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95°C 5 min; 95°C 1 min,54.4°C 1 min,72°C 1 min,35个循环;72°C 10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500 fg和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.建立的双重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.

摘要： 目的:研究白藜芦醇对鸭瘟病毒的体外抑制作用及其作用方式.方法:通过细胞病变法和四甲基偶氮唑盐比色法检测白藜芦醇对鸭瘟病毒的体外抑制作用,并采用荧光定量PCR的方法对其作用方式进行了研究.结果:白藜芦醇能够明显抑制鸭瘟病毒在鸭胚成纤维细胞中蚀斑的形成,白藜芦醇对鸭瘟病毒的半数有效浓度为3.85±0.08μg/mL,选择系数为15.86.作用方式的研究结果表明,白藜芦醇主要在病毒进入细胞的生物合成阶段起作用.结论:白藜芦醇具有较好的体外抗鸭瘟病毒效果,其主要是通过抑制病毒在宿主细胞内的增殖而起到抑制病毒的效果.

摘要： 鸭黄病毒(BYD)与鸭瘟病毒(DPV)两种鸭病均是严重危害养鸭业的传染病，特别是有混合感染时，更增加了临床诊断工作的难度。本研究建立的BYD和DPV二重荧光定量PCR方法全程(包括核酸提取、荧光PCR扩增)仅需约3h，鉴别检测的敏感性可达100拷贝，对于BYD和DPV的发病早期提供准确的诊断结果，切断其传播途径有重要意义。同时建立的荧光定量PCR方法还可用于BYD和DPV疫苗和药物疗效的评估，以及BYD和DPV致病机理等方面的研究，因此该方法的建立对BYD和DPV的防治有重要意义。

摘要： 根据GenBank已发表的鸭瘟病毒(DEV)活疫苗C—KcE株基因组序列(AccessionNo.Eu082088)，设计对引物，扩增出含TK基因完整ORF的2.7kbp的片段，克隆至pMD18T simpIe载体。利用该片段内的两个酶切位点Xho Ⅰ和BcoDR V酶切，切除TK基因内的244bp，用T4 DNA聚合酶补平末端;pVAX1-LacZ用Nru Ⅰ和肋Nar Ⅰ双酶切，回收含LacZ表达盒的4.1Kb片段，通过平末端连接将LacZ表达盒插入到TK基因中，从而获得了转移载体pTK-LacZ,为构建重组鸭瘟病毒奠定了基础。

摘要： 从湖北省武汉市某鸭场送检的死亡鸭肝脾中分离到1株病毒，结合流行病学调查、剖检变化等初步诊断为鸭瘟病毒感染。根据在GenBank上已发表的鸭瘟病毒TK基因序列(AY963569)设计引物，提取病毒核酸进行PCR扩增，得到预期大小为1077 bp的目的片段，经序列分析比较，与发表的鸭瘟病毒TK基因序列同源性达到99.16％。动物回归试验中感染雏鸭出现鸭瘟的典型临床症状，在透射电镜下观察到胸腺细胞中有与鸭瘟病毒颗粒的形态相符的病毒颗粒，上述结果表明分离的病毒为鸭瘟病毒。

摘要： 本发明提供了一种同时检测鸭圆环病毒、鸭瘟病毒和鸭3型腺病毒的引物探针组合，属于畜禽疾病诊断技术领域，包括引物对和探针，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述探针包括鸭圆环病毒探针、鸭瘟病毒探针和鸭3型腺病毒探针，所述鸭圆环病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述鸭瘟病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述鸭3型腺病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。采用本发明提供的引物探针组合能够同时检测出鸭圆环病毒、鸭瘟病毒和鸭3型腺病毒。

摘要： 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因、重组鸭瘟病毒及构建方法和应用。所述鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。一种重组鸭瘟病毒，所述重组鸭瘟病毒的基因组中插入有所述的鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因。本发明筛选获得了一种鸭坦布苏病毒E蛋白的截短体基因，通过将该E蛋白截短体基因插入到重组鸭瘟病毒的基因组中获得一种新的重组鸭瘟病毒，感染CEFs细胞后，该E蛋白截短体基因获得高效表达。该插入了E蛋白截短体基因的重组鸭瘟病毒能够用于鸭瘟病毒和鸭坦布苏病毒二联疫苗的制备。

摘要： 本发明提供一种重组鸭瘟病毒转移载体及应用该载体构建的重组鸭瘟病毒，所述的重组载体携带有用于重组到鸭瘟病毒TK基因上的核苷酸片段，所述核苷酸片段是在TK基因同源臂之间插入鸭坦布苏病毒E基因和筛选标记基因；且筛选标记基因的两侧有loxP核苷酸序列。本发明通过同源重组的方法获得的重组鸭瘟病毒在神经细胞等非分裂细胞中的复制能力降低，使得潜伏于神经组织的病毒难以激活，大大降低鸭瘟病毒疫苗株的神经毒力，从而保证该重组鸭瘟病毒作为疫苗具有更优的安全性。本发明还涉及该重组鸭瘟病毒疫苗株用于制备预防鸭瘟及鸭坦布苏的疫苗的应用。

摘要： 本发明提供了一种同时检测鸭圆环病毒、鸭瘟病毒和鸭3型腺病毒的引物探针组合，属于畜禽疾病诊断技术领域，包括引物对和探针，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述探针包括鸭圆环病毒探针、鸭瘟病毒探针和鸭3型腺病毒探针，所述鸭圆环病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述鸭瘟病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述鸭3型腺病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。采用本发明提供的引物探针组合能够同时检测出鸭圆环病毒、鸭瘟病毒和鸭3型腺病毒。

摘要： 本发明公开了一种检测小鹅瘟病毒、鹅副黏病毒、鸭瘟病毒的引物组及其试剂盒和检测方法。所述引物组包括鹅细小病毒检测引物、鹅副黏病毒检测引物和鸭瘟病毒检测引物。所述试剂盒包括上述引物组。本发明建立的多重PCR检测方法可准确检测小鹅瘟病毒、鹅副黏病毒、鸭瘟病毒的单一或混合感染，检测精度高，在病毒鉴别领域具有重要优势。

摘要： 本发明公开了一种表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有小鹅瘟病毒VP2基因，所述小鹅瘟病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。所述构建方法包括：(1)将pDEV-vac中gfp基因的CMV启动子替换成EF1启动子，获得pDEV-EF1；(2)将Pcmv-VP2-BGH-pA表达框插入pDEV-EF1，获得pDEV-VP2；(3)将pDEV-VP2转染鸡胚成纤维细胞，拯救获得所述重组鸭瘟病毒。所述重组鸭瘟病毒与亲本毒株相比，其病毒蚀斑大小不具有显著差异，说明小鹅瘟病毒VP2基因的插入不影响鸭瘟病毒在鸡胚成纤维细胞上的增殖特性。所述重组鸭瘟病毒感染鸡胚成纤维细胞后成功表达小鹅瘟病毒VP2。所述重组病毒使番鸭成功免疫产生相应抗体，为鸭瘟病毒-小鹅瘟病毒二联疫苗的研制奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种共同表达3型鸭甲型肝炎病毒P1和3C基因的重组鸭瘟病毒及其构建方法和用途，属于医学或兽医学技术领域。具体地，本发明利用重组克隆技术，将包含β‑actin启动子以及3型鸭甲型肝炎病毒P1和3C基因的基因片段β‑actin‑P13C插入到鸭瘟病毒US7和US8基因之间的间隔区中，构建获得在US7和US8基因之间插入β‑actin‑P13C表达框架的重组粘粒，由其拯救获得共同表达3型鸭甲型肝炎病毒P1和3C基因的重组鸭瘟病毒疫苗株rDEV‑US78‑P13C。结果显示，重组病毒疫苗株rDEV‑US78‑P13C免疫雏鸭后7天，就可以诱导对3型鸭甲型肝炎病毒强毒致死性攻击的完全保护，同时对鸭瘟病毒攻毒也显示了良好的免疫保护效果，是一株良好的预防鸭病毒性肝炎和鸭瘟的二联疫苗。

摘要： 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因、重组鸭瘟病毒及构建方法和应用。所述鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。一种重组鸭瘟病毒，所述重组鸭瘟病毒的基因组中插入有所述的鸭坦布苏病毒E蛋白截短体基因。本发明筛选获得了一种鸭坦布苏病毒E蛋白的截短体基因，通过将该E蛋白截短体基因插入到重组鸭瘟病毒的基因组中获得一种新的重组鸭瘟病毒，感染CEFs细胞后，该E蛋白截短体基因获得高效表达。该插入了E蛋白截短体基因的重组鸭瘟病毒能够用于鸭瘟病毒和鸭坦布苏病毒二联疫苗的制备。

摘要： 本发明公开了一种表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有鸭坦布苏病毒E蛋白基因，所述鸭坦布苏病毒E蛋白基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.9所示。所述构建方法包括：(1)将pDEV-vac中gfp基因的CMV启动子替换成EF1启动子，获得pDEV-EF1；(2)将Pcmv-E-BGH-pA表达框插入pDEV-EF1，获得pDEV-E；(3)将pDEV-E转染鸡胚成纤维细胞，拯救获得所述重组鸭瘟病毒。所述重组鸭瘟病毒与亲本毒株相比，其病毒蚀斑大小不具有显著差异，说明鸭坦布苏病毒E蛋白基因的插入不影响鸭瘟病毒在鸡胚成纤维细胞上的扩散。所述重组鸭瘟病毒感染鸡胚成纤维细胞后成功表达E蛋白，为鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联疫苗的研制奠定了基础。

摘要： 本实用新型涉及一种鸭源新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭圆环病毒胶体金检测卡，所述胶体金检测卡包括上样垫、标金垫、试纸条、吸水滤纸以及PVC底板，检测卡上样端叠置所述上样垫、标金垫，另一端叠置有吸水滤纸，所述试纸条的底面为PVC底板；所述试纸条从上样端开始依次包被有鸭源新城疫病毒的第一检测线、包被鸭瘟病毒的第二检测线、包被鸭圆环病毒cap蛋白的第三检测线以及质控线；所述标金垫上包被有胶体金标记的鼠抗鸭IgG抗体。本实用新型的鸭源新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭圆环病毒三联胶体金检测卡检测的过程中，所需样本量少，试剂盒的操作简便，检测样本易于获得，检测方便快捷，免疫反应特异性高，结果判定方便。