人晶状体上皮细胞

摘要： 目的探讨circKMT2E在老年性白内障(ARC)患者中的表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响。方法取10例在我院接受白内障手术的ARC患者晶状体前囊膜,另选取4例健康捐献者透明晶状体前囊膜作为对照。使用Trizol试剂从人晶状体前囊膜组织中提取总RNA。依次使用cutadapt软件、DCC软件(v0.4.4)、STAR软件(v2.51 b)、CircBase数据库和circ2Trait数据库对所测得的环状RNA(circRNA)进行注释,筛选circRNA差异表达。将体外培养的SRA01-04细胞随机分组,其中,空白对照组用正常培养液培养,不作特殊处理;miR-control组转染miR-control无序序列;miR-34a组转染miR-34a-5p mimics序列;miR-34a+control组共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-control空载体;miR-34a+HMGB1组共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-HMGB1质粒。采用实时荧光定量PCR与双荧光素酶报告基因检测基因表达情况。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达。结果经生物信息学分析显示,circKMT2E在ARC患者晶状体前囊膜组织中表达上调最为显著。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-34a-5p后circKMT2E-WT报告基因的荧光素酶活性由1.000±0.023降低至0.502±0.057(P0.05)。miR-34a组SRA01-04细胞凋亡率(23.59%±3.47%)较miR-control组(3.82%±0.41%)增高(P<0.05),而miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞凋亡率(8.97%±1.20%)较miR-34a-control组(24.59%±4.33%)降低(P<0.05)。miR-34a组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白、Bax蛋白相对表达量较miR-control组均升高,同时Bcl-2蛋白相对表达量则降低(均为P<0.05);miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白和Bax蛋白相对表达量较miR-34a-control组均降低,同时Bcl-2蛋白相对表达量较miR-34a-control组增加(均为P<0.05)。结论circKMT2E可通过海绵吸附miR-34a-5p减弱其对下游靶点HMGB1的抑制作用,进而有效地阻止SRA01-04细胞凋亡,在一定程度起到延缓ARC发展的作用。

摘要： 目的探讨褪黑素对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人晶状体上皮细胞(HLECs)焦亡的影响及其机制。方法取传代培养的HLECs分为5个组,其中正常对照组常规培养,模型对照组于100μmol/L H_(2)O_(2)条件下培养,褪黑素组、维生素E组和维生素E溶剂组分别用1×10^(-6)mol/L褪黑素、100μmol/L维生素E和维生素E溶剂预处理后,用100μmol/L H_(2)O_(2)继续培养,收集细胞待检测。为进一步探讨褪黑素的作用机制,将细胞分为7个组,其中正常对照组常规培养;模型对照组细胞于100μmol/L H_(2)O_(2)条件下培养;核转录因子E2相关因子2短发夹RNA(shNrf2)阴性对照组和shNrf2组细胞分别用shNrf2阴性对照和shNrf2慢病毒转染,并于终浓度100μmol/L H_(2)O_(2)条件下培养;褪黑素组细胞在终浓度1×10^(-6)mol/L褪黑素条件下培养,然后加入终浓度100μmol/L H_(2)O_(2)继续培养;褪黑素+shNrf2阴性对照组和褪黑素+shNrf2组细胞首先分别采用shNrf2阴性对照或shNrf2慢病毒转染,再于终浓度1×10^(-6)mol/L褪黑素和终浓度100μmol/L H_(2)O_(2)条件下培养,收集各组细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,白细胞介素(IL)-1β和IL-18浓度;采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧簇(ROS)的荧光强度;采用Western blot法检测各组细胞中Nrf2、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1 p20、GSDMD-N蛋白的表达。结果ELISA法检测发现,与模型对照组相比,褪黑素组和维生素E组细胞培养上清液中LDH活性及IL-1β和IL-18浓度均有不同程度的下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞仪检测发现,褪黑素组和维生素E组细胞中ROS荧光强度分别为13040.67±1550.66、12593.67±1677.06,显著低于模型对照组的18310.33±1248.01,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blot结果显示,褪黑素组和维生素E组Nrf2蛋白相对表达量分别为4.24±0.44、3.73±0.38、较模型对照组的2.28±0.34明显上升(均P<0.05),褪黑素组和维生素E组NLRP3、ASC、caspase-1 p20及GSDMD-N蛋白相对表达量较模型对照组显著下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。shNrf2组相较于shNrf2阴性对照组,褪黑素+shNrf2组相较于褪黑素+shNrf2阴性对照组,细胞培养上清液中LDH活性、IL-1β和IL-18浓度均显著上升,细胞中Nrf2蛋白相对表达量明显下降,细胞中ROS荧光强度、NLRP3、ASC、caspase-1 p20及GSDMD-N焦亡相关蛋白相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论褪黑素可能通过激活Nrf2,减少NLRP3炎性体的释放,进而抑制HLECs焦亡。

摘要： 目的探讨决明子总蒽醌(CSTA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导人晶状体上皮细胞(LEC)氧化损伤的影响及其相关作用机制。方法体外培养人LEC细胞系HLE-B3细胞,利用不同浓度梯度CSTA作用于HLE-B3细胞以筛选其最适处理浓度。实验分为对照组(CG组)、H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2)组)、CSTA组和沉默信息调节因子1(Sirt1)抑制剂组(EX527组)。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测HLE-B3细胞活力;流式细胞仪检测HLE-B3细胞凋亡情况;酶联免疫(ELISA)检测HLE-B3细胞内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测HLE-B3细胞内Sirt1、PPARγmRNA表达;Western Blot检测HLE-B3细胞内Sirt1、过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ)、p-PPARγ蛋白水平。结果通过设置浓度梯度选择20 mg/L作为CSTA的处理浓度。(1)细胞活力:H_(2)O_(2)组与CG组比较降低(t=23.048,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较升高(t=5.669,P=0.000),EX527组与CSTA组比较降低(t=4.151,P=0.002),差异均有统计学意义。(2)细胞凋亡率:H_(2)O_(2)组与CG组比较升高(t=18.480,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较降低(t=9.670,P=0.000),EX527组与CSTA组比较升高(t=7.982,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)氧化损伤指标:①MDA含量,H_(2)O_(2)组与CG组比较升高(t=13.040,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较降低(t=9.602,P=0.000),EX527组与CSTA组比较升高(t=7.575,P=0.000),差异均有统计学意义。②GSH-Px含量,H_(2)O_(2)组与CG组比较降低(t=15.220,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较升高(t=11.810,P=0.000),EX527组与CSTA组比较降低(t=9.090,P=0.000),差异均有统计学意义。③SOD含量,H_(2)O_(2)组与CG组比较降低(t=14.930,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较升高(t=11.150,P=0.000),EX527组与CSTA组比较降低(t=8.783,P=0.000),差异均有统计学意义。(4)Sirt1和PPARγmRNA:①Sirt1 mRNA,H_(2)O_(2)组与CG组比较降低(t=33.803,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较升高(t=13.561,P=0.000),EX527组与CSTA组比较降低(t=10.312,P=0.000),差异均有统计学意义。②PPARγmRNA,四组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(5)Sirt1及p-PPARγ/PPARγ蛋白:①Sirt1蛋白,H_(2)O_(2)组与CG组比较降低(t=11.000,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较升高(t=7.667,P=0.000),EX527组与CSTA组比较降低(t=6.333,P=0.000),差异均有统计学意义。②p-PPARγ/PPARγ蛋白,H_(2)O_(2)组与CG组比较升高(t=16.410,P=0.000),CSTA组与H_(2)O_(2)组比较降低(t=13.060,P=0.000),EX527组与CSTA组比较升高(t=10.630,P=0.000),差异均有统计学意义。结论CSTA可能通过调节Sirt1/PPARγ通路,减轻H_(2)O_(2)诱导HLE-B3细胞氧化损伤。

摘要： 目的探讨荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及其对LncRNA FENDRR/miR-146b-3p分子轴的调控作用。方法采用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型(Model组),分别加入不同剂量的荞麦花叶芦丁处理细胞;实验分组:Con组、Model+si-NC组、Model+si-FENDRR组、Model+miR-NC组、Model+miR-146b-3p组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-NC组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-146b-3p组;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;根据试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;采用qRT-PCR法检测FENDRR与miR-146b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测FENDRR与miR-146b-3p的靶向关系;采用Western印迹检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果与Con组比较,Model组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR表达水平升高(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2水平与SOD的活性降低(P<0.05);与Model组比较,荞麦花叶芦丁不同剂量组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR水平降低(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2、SOD水平升高(P<0.05);与Model组、Model+si-NC组比较,Model+si-FENDRR组细胞凋亡率与Bax、MDA的水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性及miR-146b-3p表达水平升高(P<0.05);FENDRR可靶向调控miR-146b-3p;与Model组、Model+miR-NC组比较,Model+miR-146b-3p组细胞凋亡率、Bax、MDA水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性升高(P<0.05),而抑制miR-146b-3p可逆转荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡及氧化应激的作用。结论荞麦花叶芦丁可通过下调FENDRR的表达而上调miR-146b-3p的表达从而抑制细胞凋亡及氧化应激进而减轻高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤。

摘要： 目的探讨miR-423-5p对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及作用机制。方法采用H_(2)O_(2)诱导人晶状体上皮细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-423-5p和泛素羧基末端水解酶(UCH)L1 mRNA表达水平,Western印迹检测UCHL1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡。转染miR-423-5p抑制剂或UCHL1过表达载体至人晶状体上皮细胞,上述相同方法检测干扰miR-423-5p表达或UCHL1过表达对H_(2)O_(2)诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激及凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-423-5p与UCHL1靶向关系。结果H_(2)O_(2)诱导可促进人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和miR-423-5p表达及Bax蛋白表达(P<0.05),抑制细胞SOD和GSH-Px表达、UCHL1 mRNA和蛋白表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。干扰miR-423-5p或过表达UCHL1均可抑制人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达(P<0.05),促进细胞SOD和GSH-Px表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。miR-423-5p靶向负调控UCHL1表达,抑制UCHL1表达逆转了干扰miR-423-5p表达对人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达的抑制作用及对SOD、GSH-Px和Bcl-2蛋白表达的促进作用。结论miR-423-5p可能通过抑制UCHL1表达促进H_(2)O_(2)诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,保护人晶状体上皮细胞免受H_(2)O_(2)损伤。

摘要： 目的探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响及其机制。方法收集2018年12月至2019年8月在新乡市第一人民医院行白内障手术的23例年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织,同时收集20例正常供体眼晶状体前囊膜组织。采用实时荧光定量PCR法检测并比较不同人群晶状体前囊膜组织中KCNQ1OT1和miR-199a-5p mRNA表达水平。体外培养人LECs(SRA01/04),将细胞分为空白对照组、模型对照组、小干扰RNA-阴性对照(siR-NC)组、siR-KCNQ1OT1组、miR-NC组、miR-199a-5p组、siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组和siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组,其中空白对照组不做任何处理,模型对照组采用100μmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2))培养细胞24 h制作氧化应激损伤模型,其余各组分别采用相应转染试剂按照脂质体法转染6 h后换用100%μmol/L H_(2)O_(2)处理细胞24 h。采用实时荧光定量PCR法检测各组晶状体前囊膜组织和各组LECs细胞中KCNQ1OT1和miR-199a-5p表达水平;采用MTT法检测各组细胞活力值;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;采用双荧光素酶报告实验检测KCNQ1OT1和miR-199a-5p的关系。结果年龄相关性白内障患者前囊膜内KCNQ1OT1相对表达量为2.41±0.42,明显高于正常人的0.97±0.19,差异有统计学意义(t=14.112,P<0.001);miR-199a-5p相对表达量为0.36±0.12,明显低于正常人的1.04±0.15,差异有统计学意义(t=16.507,P<0.001)。与空白对照组比较,模型对照组中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量明显增加,miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞活力值、SOD活性值明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.001);与siR-NC组比较,siR-KCNQ1OT1组细胞中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量降低,bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-199a-5p组KCNQ1OT1-WT荧光素酶活性显著降低,差异有统计学意义(t=21.131,P<0.001);与miR-NC组相比,miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显升高,bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显低于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组,细胞凋亡率、bax蛋白相对表达量和MDA含量显著高于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制KCNQ1OT1能够增强人LECs活力,抑制H_(2)O_(2)诱导的细胞凋亡和氧化应激反应,其作用机制可能与上调miR-199a-5p有关。

摘要： 目的探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组,siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6,siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率;转染后48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例;转染后24 h,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率;转染后48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义(F_(分组)=4.776,P<0.05;F_(时间)=13.535,P<0.05),其中转染后48 h和72 h,siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siRNA-NC组比较,siRNA-Pax6组G_(0)/G_(1)期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义(t=9.971、-5.063,均P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%,低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%,差异有统计学意义(t=-7.245,P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组,E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=-23.254、-5.294、6.062,均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(t=5.521、8.270,均P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01,低于siRNA-NC组的1.00±0.05,差异有统计学意义(t=-14.456,P<0.001);siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05,低于siRNA-NC组的1.14±0.10,差异有统计学意义(t=-4.458,P<0.001)。结论沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程,维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

摘要： 目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)含量。结果ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.935,-0.951,均为P0.05)。应用H_(2)O_(2)刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H_(2)O_(2) HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低(均为P<0.05);而circZNF292 siRNA组+H_(2)O_(2)细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H_(2)O_(2)均进一步升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低(均为P<0.05)。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转(均为P<0.05)。结论circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。

摘要： 目的探讨地黄多糖对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人晶状体上皮细胞(HLEC)氧化损伤的保护作用及机制。方法取对数生长期的B-3细胞(HLEC)作为研究对象。筛选H_(2)O_(2)和地黄多糖最佳作用浓度。依据筛选的地黄多糖抑制H_(2)O_(2)致B-3细胞损伤的最佳作用浓度处理细胞,将B-3细胞分为:空白组、H_(2)O_(2)组和地黄多糖组。空白组:用10 g·L^(-1)羧甲基纤维素钠预处理细胞24 h后,换为EMEM培养基培养24 h;H_(2)O_(2)组:用10 g·L^(-1)羧甲基纤维素钠预处理细胞24 h后,换为含100 mol·L^(-1) H_(2)O_(2)的EMEM培养基培养24 h;地黄多糖组:用含40 mg·L^(-1)地黄多糖的培养基预处理细胞24 h后,换为含100 mol·L^(-1) H_(2)O_(2)的EMEM培养基培养24 h。采用扫描电镜和免疫荧光染色观察细胞焦亡情况;测定细胞活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及培养液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;Western blot检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)/caspase-1途径相关蛋白表达水平。结果100 mol·L^(-1) H_(2)O_(2)和40 mg·L^(-1)地黄多糖为最佳作用浓度。扫描电镜结果显示:空白组细胞呈圆球形,边界规则;H_(2)O_(2)组细胞肿胀变大,边界不规则;地黄多糖组细胞肿胀程度减轻。与H_(2)O_(2)组相比,地黄多糖组切割消皮素D(GSDMD)-N阳性细胞数为每视野(5.33±0.46)个,GSDMD-N阳性细胞数显著减少(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,地黄多糖组B-3细胞ROS水平、MDA含量显著降低(均为P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,地黄多糖组培养液中IL-1β、IL-18含量降低(q=20.694、11.618,均为P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,地黄多糖组B-3细胞NLRP3蛋白表达水平及caspase-1/pro-caspase-1、GSDMD-N/GSDMD均降低(均为P<0.05)。结论地黄多糖可减轻H_(2)O_(2)作用下B-3细胞的氧化损伤,其作用机制与抑制细胞焦亡有关。

摘要： 背景细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)是一类具有细胞膜穿透能力的多肽,可以作为药物载体携带大分子物质进入细胞,其因低毒性和多组织普适性广泛运用于医学成像和治疗的研究中。目的构建穿膜肽钴原卟啉药物复合体(R6-CoPP),研究其生物相容性和减轻晶状体上皮细胞氧化应激损伤的作用。方法采用Fmoc固相合成法,根据设计的序列合成寡聚精氨酸穿膜肽(R6),以脱水缩合法将其与钴原卟啉(cobalt protoporphyrin,CoPP)连接,使用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocvanate,FITC)进行标记。应用高效液相色谱仪和质谱仪测定其纯度和相对分子质量,利用扫描透射电镜(STEM)能谱面/线扫和激光纳米粒度电位测量仪观测其表征形貌、元素分布、粒子直径和表面电位;细胞流式仪和共聚焦显微镜观察R6-CoPP对体外培养的人晶状体上皮细胞系的穿膜效果;CCK-8法检测R6-CoPP对人晶状体上皮细胞系细胞活性的影响。利用H_(2)O_(2)构建晶状体上皮细胞氧化损伤模型,比较R6-CoPP与CoPP预处理对细胞凋亡的影响。结果经高效液相色谱法鉴定R6-CoPP纯度为94.56%,质谱鉴定相对分子质量为2109.75,与预计相符,粒径为227.8 nm,表面电位为+13.9 mV,STEM能谱面扫显示R6-CoPP内有钴元素分布。R6-CoPP对细胞毒性较小,生物相容性好。细胞流式结果显示穿膜肽药物孵育细胞2 h后荧光阳性细胞比例可达80%以上。共聚焦显微镜荧光显示孵育15 min后R6-CoPP已经穿越细胞膜进入细胞质,细胞荧光强度随孵育时间的增加而下降。与氧化损伤模型组相比,CoPP和R6-CoPP预处理后的细胞存活率明显提高(P<0.05)。结论穿膜肽药物复合体R6-CoPP生物相容性较好,具有较强的细胞膜穿透能力,体外实验显示其可减轻氧化损伤所致的晶状体上皮细胞凋亡。

摘要： 目的：研究紫外线(UVB)照射对人晶状体上皮细胞系B-3(HLE B-3)细胞质膜钙ATP酶3(plasma membrane calcium ATPase3,PMCA3)表达的影响,探讨其活性氧信号通路之间的关系. 方法：HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时用不同剂量的UVB(0mJ/cm2,5mJ/cm2,10mJ/cm2和20mJ/cm2)照射,然后继续培养不同的时间进行以下指标的检测：MTT法检测UVB对细胞增殖的影响;JC-1染色检测UVB对细胞线粒体膜电位(△Ψm)的影响;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(ROS)的变化;Annexin V-FITC/PI染色检测UVB对细胞凋亡的影响;Fluo-3/AM染色检测细胞内钙离子浓度的变化;实时荧光定量PCR检测UVB对PMCA3在mRNA水平表达的影响;Western blot方法检测UVB对PMCA在蛋白质水平表达的影响. 结果：MTT结果显示UVB可抑制HLE B-3细胞的生长,呈时间和剂量依赖性;随UVB照射剂量的增加,HLE B-3细胞线粒体膜电位下降,细胞内活性氧水平、细胞凋亡及细胞内钙离子浓度增加,PMCA3mRNA表达下降,PMCA蛋白表达下降. 结论：UVB能使HLE B-3细胞PMCA3在mRNA水平以及PMCA在蛋白质水平表达下降,并可通过活性氧信号通路发挥作用.PMCA3在UVB诱导的HLE B-3细胞凋亡中可发挥重要作用.

摘要： 目的：观察天葵提取物对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞SRA01/04氧化损伤的保护作用,探讨其作用机制.方法：以过氧化氢复制人晶状体上皮细胞SRA01/04氧化损伤模型,采用不同浓度的天葵提取物对该模型进行干预,四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率;化学比色法测定细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)活性以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量;透射电子显微镜观察细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电位(△ψm);Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western Blotting法检测Bcl-2和Bax-2蛋白的表达;比色法检测caspase-3、c～paSe-9活性.结果：与模型组相比,天葵药物组的细胞增殖抑制率降低;T-SOD、GSH-px、CAT、T-AOC活性增高、MDA含量降低;线粒体跨膜电位增高;Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降;caspase-3 caspase-9活性降低;细胞呈现轻微的凋亡形态改变.结论：天葵提取物对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞SRA01/04氧化损伤具有保护作用.

摘要： 目的：探讨复方SZ滴眼液(SZ)防护人晶状体上皮细胞紫外线(UV)损伤的蛋白质组学机制，为将SZ作为防治白内障的有效药物提供实验依据。rn 方法：采用SZ与人晶状体上皮细胞系HLE-B3细胞(HLEC)共同孵育，以吡喏克辛滴眼液(PS)作为阳性对照，经UV照射HLEC后，采用双向凝胶电泳(2-DE)和质谱(MS)技术，寻找HLEC有效的功能蛋白及SZ作用靶点。rn 结果：①UV组与正常组比较：发现13个差异点。其中表达上调的差异点有5个，经质谱鉴定为：T复合蛋白1β亚基、核内不均-核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、阻抑素(prohibitin)4种蛋白质；表达下调的差异点有8个，经质谱鉴定为：波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶3种蛋白质。②SZ组与UV组比较：发现12个差异蛋白点。其中表达上调的差异点8个，经质谱鉴定为：波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶3种蛋白质；表达下调的差异点4个，经质谱鉴定为：核内不均-核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、角蛋白8Ⅱ和阻抑素4种蛋白质。rn 结论：SZ可使UV照射引起HLEC下调的3种蛋白质(波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶)上调，又可使UV照射引起上调的4种蛋白质中的3种蛋白质下调(核内不均-核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、阻抑素)。说明在SZ防护UV损伤中，以上6种蛋白质可能起重要作用。

摘要： 本发明属于生物药物领域，涉及藻类的一种捕光色素蛋白，即藻蓝蛋白(phycocyanin)对晶状体上皮细胞的保护作用。藻蓝蛋白可明显抑制亚硒酸钠引起的晶状体上皮细胞存活率的下降、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量的升高，也可显著抑制亚硒酸钠引起的晶状体上皮细胞结构的破坏和细胞凋亡，表明藻蓝蛋白对晶状体上皮细胞有显著的保护作用。

摘要： 在白内障手术前、期间或之后在晶状体囊袋中应用或导入用于预防后囊浑浊化的治疗溶液。治疗溶液包含离子转运机制干扰剂，其单独或与其它治疗剂例如渗透压剂和试剂一起使用以建立适宜的pH，其选择性地诱导了晶状体上皮细胞分离和/或死亡，这样就预防了后囊浑浊化。虽然离子转运机制干扰剂能干扰多种细胞的细胞机制和细胞离子浓度，但要对干扰剂浓度进行选择，这样治疗溶液就能选择性地干扰晶状体上皮细胞的细胞机制，而剩下的其它眼部细胞基本上没有受到损伤。治疗溶液选择性地诱导了晶状体上皮细胞死亡和/或分离，而其它眼部细胞和组织则基本上没有损伤，也没有冗长的术前预治疗。

摘要： 一种用来阻止后囊膜浑浊的处理溶液，在白内障术前、术中或术后应用于或引入晶状体囊袋中。该处理溶液也可在术前应用于人工晶状体。该处理溶液包含离子转运机制干扰剂，该干扰剂可单独使用或与渗透胁迫剂等其它处理剂联用来建立合适的pH，选择性诱导晶状体上皮细胞脱落和/或死亡，从而阻止后囊膜浑浊。虽然离子转运机制干扰剂能够干扰许多种细胞的细胞机制和细胞离子分布，但是其药物浓度还要进行选择，从而使处理溶液选择性干扰晶状体上皮细胞的细胞机制，而基本不损害其它眼部细胞。该处理溶液选择性诱导晶状体上皮细胞脱落和/或细胞死亡，而对其它眼部细胞和组织无损害，且无需冗长的术前处理。

摘要： 本发明公开了一种清除晶状体赤道部上皮细胞的装置，包括手持杆和连接于手持杆一端的连接杆，连接杆的末端弯折形成工作杆，工作杆的顶面上靠近端部的侧壁上连接有抛光杆，工作杆和抛光杆的端部成型为弧面，抛光杆的顶面上靠近端部的位置设有从弧面过渡至抛光杆顶面的圆钝。本发明能够在刚完成撕囊晶体未取出状态下进行高效路的前囊膜抛光，在抛光过程中不需要使用粘弹剂，避免高眼压并发症，还能够解决飞秒撕囊后皮质与囊口紧密粘连的问题，对小瞳孔手术也能较容易的完成前囊膜抛光操作，可以避免超声乳化过程中形成碗状皮质壳，降低后囊膜破裂的风险；同时前端具备能够伸入赤道部进行抛光的柔质延长杆，实现对赤道部的抛光。

摘要： 本发明公开了一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，包括原料选取、枸杞提取液的制备、菊花提取液的制备、晶状体细胞培养液的制备、晶状体细胞的培养，与现有技术相比，本发明采用不同配比枸杞菊花提取液培养晶状体细胞，提高细胞增殖能力，减少氧化应激，降低细胞凋亡的细胞培养方法，可用于指导养肝明目用药的理论基础，具有推广应用的价值。

摘要： 一种用来阻止后囊膜浑浊的处理溶液，在白内障术前、术中或术后应用于或引入晶状体囊袋中。该处理溶液也可在术前应用于人工晶状体。该处理溶液包含离子转运机制干扰剂，该干扰剂可单独使用或与渗透胁迫剂等其它处理剂联用来建立合适的pH，选择性诱导晶状体上皮细胞脱落和/或死亡，从而阻止后囊膜浑浊。虽然离子转运机制干扰剂能够干扰许多种细胞的细胞机制和细胞离子分布，但是其药物浓度还要进行选择，从而使处理溶液选择性干扰晶状体上皮细胞的细胞机制，而基本不损害其它眼部细胞。该处理溶液选择性诱导晶状体上皮细胞脱落和/或细胞死亡，而对其它眼部细胞和组织无损害，且无需冗长的术前处理。

摘要： 本发明属于生物药物领域，涉及藻类的一种捕光色素蛋白，即藻蓝蛋白(phycocyanin)对晶状体上皮细胞的保护作用。藻蓝蛋白可明显抑制亚硒酸钠引起的晶状体上皮细胞存活率的下降、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量的升高，也可显著抑制亚硒酸钠引起的晶状体上皮细胞结构的破坏和细胞凋亡，表明藻蓝蛋白对晶状体上皮细胞有显著的保护作用。

摘要： 本实用新型公开了一种清除晶状体赤道部上皮细胞的装置，包括手持杆和连接于手持杆一端的连接杆，连接杆的末端弯折形成工作杆，工作杆的顶面上靠近端部的侧壁上连接有抛光杆，工作杆和抛光杆的端部成型为弧面，抛光杆的顶面上靠近端部的位置设有从弧面过渡至抛光杆顶面的圆钝。本实用新型能够在刚完成撕囊晶体未取出状态下进行高效路的前囊膜抛光，在抛光过程中不需要使用粘弹剂，避免高眼压并发症，还能够解决飞秒撕囊后皮质与囊口紧密粘连的问题，对小瞳孔手术也能较容易的完成前囊膜抛光操作，可以避免超声乳化过程中形成碗状皮质壳，降低后囊膜破裂的风险；同时前端具备能够伸入赤道部进行抛光的柔质延长杆，实现对赤道部的抛光。

摘要： 本实用新型涉及一种晶状体赤道部上皮细胞清除器，包括操作柄，操作柄前端连接有伸出杆，操作柄的中部支撑连接有与操作柄轴向垂直的支撑轴，支撑轴的端部转动连接有带轮一，伸出杆的前端连接有与支撑轴平行的转轴，转轴两端分别延伸并凸出伸出杆的两侧，与带轮一同侧的转轴的伸出端固定连接有带轮二，轮轮一和带轮二通过传输带传动连接，带轮一的侧缘设有便于驱动带轮一转动的手柄；转轴另一侧的伸出端垂直连接有回转臂，回转臂的外端连接一椭圆形的金属丝环，金属丝环的环面与转轴位于同一平面内。本实用新型的清除器通过带传动结构驱动回转臂及金属丝环回转运行，使金属丝环外缘与晶状体囊赤道部内壁接触刮除残余的细胞组织。

摘要： 一种人晶状体上皮细胞体外培养三维模型，包括外室容器、内室容器、顶盖及挂架；挂架连接在内室容器顶部筒口，内室容器底部筒口处覆盖有PET膜，PET膜上均布有若干微孔，内室容器内腔填充有人晶状体上皮细胞悬液；PET膜的下表面中心处贴覆有第一人晶状体囊膜，PET膜及囊膜中心设有囊膜切开孔；内室容器悬吊设在外室容器内腔中部；内外室容器之间填充有细胞培养液，细胞培养液液面高度低于内室容器顶部筒口边沿，细胞培养液通过PET膜上的微孔与人晶状体上皮细胞悬液相导通；第一人晶状体囊膜正下方外室容器底板上贴覆有第二人晶状体囊膜，第一与第二人晶状体囊膜之间留有间隙，间隙内装夹有人工晶状体，囊膜表面生长有单层人晶状体上皮细胞膜。