HBV-DNA

摘要： 【目的】为了研究慢性乙型肝炎(CHB)患者在核苷(酸)类(恩替卡韦(ETV)或替诺福韦(TDF))抗病毒治疗过程中外周单核细胞衍生的巨噬细胞(MDMs)的极化化状态的动态变化以及与HBVDNA、HBeAg的相关性。【方法】共纳入101例CHB患者和20名健康人的外周血标本。通过外周血单核细胞技术(PBMC)分离培养获得86例CHB患者和12例健康人的MDMs。采用流式细胞技术检测MDMs的特异性标志物(CD80,HLA-DR,CD163和CD206)的表达,从而评估MDMs的极化状态(即M1型/M2型极化状态)。通过qPCR检测15例CHB患者和8例健康对照中MDMs的炎症因子的mRNA水平表达。【结果】我们发现在CHB患者外周血中CD163^(+)CD206^(+)MDMs(M2型MDMs)的比例较正常人群显著减少(P=0.030)。同时,抑炎因子IL-10的mRNA水平表达也明显下降(P=0.040)。随着核苷(酸)类似物抗病毒治疗的进展,CD163^(+)CD206^(+)MDMs(M2型)的比例逐渐增加(P<0.001),而CD80^(+)HLA-DR^(+)MDMs(M1型)逐渐地降低(P=0.005)。另外,M2型MDMs与HBeAg(P=0.019),HBVDNA水平(P=0.002),AST(P=0.048)和ALT(P=0.030)均呈负相关。ROC曲线分析表明M2型MDMs对CHB抗病毒治疗的病毒学应答率有一定的预测作用,可预测HBVDNA阴转率[ROC 95%CI为0.705(0.594,0.815)]和HBeAg的血清转化率[ROC 95%CI为0.740(0.634,0.847)]。【结论】CHB患者在核苷(酸)类抗病毒治疗过程中MDMs极化状态呈现规律动态变化,M2型MDMs与HBVDNA和HBeAg水平呈负相关,对CHB抗病毒治疗的病毒学应答率有一定预测作用。

摘要： 目的建立基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测HBV DNA的方法,并实现对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA的精准检测。方法构建pUC57-HBV质粒作为阳性对照质粒,设计合成HBV DNA ddPCR引物及探针,以梯度稀释的阳性对照质粒为模板进行ddPCR检测,完成标准曲线构建和检出限分析,并进行检测的重复性和特异性分析。收集首都医科大学附属北京佑安医院19例乙型肝炎低病毒血症患者的血浆样本(HBV DNA<10 IU/mL),提取HBV DNA后进行ddPCR检测。结果建立的基于ddPCR技术检测HBV DNA的方法检测下限低至1 copy/μL(阳性质粒稀释法);对3种不同拷贝的阳性对照质粒(1×10^(2)、1×10^(1)、1×10^(0) copies/μL)重复检测的变异系数分别为18.8%、9.9%、9.7%,且具有100%特异性;应用该方法在低于临床检测下限的乙型肝炎低病毒血症患者中,以1 copy/μL为临界值,HBV DNA的阳性检出率为68.42%。结论建立的ddPCR检测低病毒载量HBV DNA检测方法能够高灵敏和高特异地对乙型肝炎低病毒血症患者HBV DNA实现绝对定量。

摘要： 目的合并乙型肝炎(乙肝)的皮肤病患者在糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)应用方面存在潜在风险,合理设计安全用药规范,为患者安全、合理用药提供保障。方法将本院31例使用GC治疗的皮肤科住院患者随机分为对照组和实验组,对照组按传统方案未进行主动干预,实验组采取乙肝患者安全用药流程进行干预。结果实验组患者出现肝功能异常、转氨酶不同程度升高或HBV-DNA拷贝数上升的比率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用GC治疗可能造成乙型肝炎患者出现肝功能异常或HBV病毒激活的副作用,设计合理有效的用药安全规范对保障患者治疗安全有重要意义。

摘要： 目的探讨不同乙肝五项模式乙型肝炎患者血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)检测结果及其作用。方法选取2019年10月至2020年10月本院收治的90例乙型肝炎患者作为研究对象,并根据HBeAg是否表达分为HBeAg表达组(n=34)和HBeAg未表达组(n=56)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙肝五项,采用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)法检测血清HBV-DNA,比较不同乙肝五项模式乙型肝炎患者HBV-DNA阳性检出率,分析血清HBV-DNA浓度与乙型肝炎e抗原(HBeAg)检出率及HBeAg表达与血清HBV-DNA阳性检出率的关系。结果乙型肝炎大三阳患者的HBV-DNA阳性检出率高于乙型肝炎小三阳、小二阳患者(P10^(7)U/ml的HBeAg检出率明显高于其他血清HBV-DNA浓度(P<0.05);血清HBV-DNA浓度与HBeAg检出率呈正相关(r=0.449,P<0.05)。HBeAg表达组血清HBV-DNA阳性检出率为94.1%,显著高于HBeAg未表达组的21.4%(P<0.05);HBeAg表达与血清HBV-DNA阳性检出率呈正相关(r=0.482,P<0.05)。结论对乙型肝炎患者应进行乙肝五项检查联合血清HBV-DNA检测,以提高诊断准确率和判断病情严重度,为临床治疗提供依据。

摘要： 目的了解慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗不同阶段的血清HBV RNA及HBV DNA的变化,探讨在抗病毒治疗中HBV RNA的临床意义。方法收集2015—2018年于南昌大学第二附属医院感染性疾病科就诊的CHB患者的病例资料。并根据治疗不同阶段分为:治疗前、治疗12周、治疗48周、治疗48周以上、停干扰素随访;根据治疗方案不同将治疗12周、治疗48周以及治疗48周以上的患者进一步细分为两个亚组;检测各组患者的HBV RNA及HBV DNA,分析抗病毒治疗中HBV RNA的变化趋势;分析HBV RNA与HBV DNA之间的关系以及不同治疗方案下HBV RNA变化的差异性。结果使用干扰素抗病毒治疗的患者中,HBV RNA、HBV DNA双阴性患者占HBV DNA阴性患者84.6%;使用恩替卡韦抗病毒治疗患者中,HBV RNA、HBV DNA双阴性患者占HBV DNA阴性患者27.8%;停用干扰素后随访时HBV DNA阳性患者的HBV RNA水平显著高于HBV DNA阴性患者的HBV RNA水平。无论干扰素还是恩替卡韦抗病毒,HBV RNA、HBV DNA平均滴度水平整体呈下降趋势,不同时间段的变化差异有统计学意义(P<0.05);恩替卡韦治疗期间HBV RNA与HBV DNA无显著相关性;干扰素治疗48周、干扰素治疗48周以上、干扰素停药随访时HBV RNA与HBV DNA呈正相关,相关系数r分别为0.867、0.811、0.574,P<0.05。结论抗病毒治疗过程中,血清HBV RNA变化与抗病毒药物及疗程有关,总体呈下降趋势;在判断抗病毒治疗疗效方面具有一定的临床意义,尤其体现在使用干扰素抗病毒治疗的患者。

摘要： 目的 通过新疆地区核酸集中化检测“11+1”模式,对献血者结果分析及逐年变化趋势进行系统性回顾性探讨分析,探讨集中化检测在效果、检测效率的优势。方法 采用核酸血筛(HBV/HCV/HIV)检测系统,混样(6混或者8混)检测血液核酸HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA,混样反应性样本进行拆分单检检测;分析2015年12月-2021年5月期间,委托在乌鲁木齐集中化核酸检测的样本资料、结果的总体分析和地区间差异分析。结果 新疆地区集中化检测的12个地区血液质量在经献血前初筛、酶免检测后,核酸检测结果的血液合格率分别为99.955%(291727/291858)、99.894(1878/1880)、99.963 (8168/8171)、99.938 (1616/1617)、99.916 (19000/19016)、99.783 (2890/2896)、99.813(5856/5867)、99.704(2357/2364)、99.868(15862/15883)、99.822(2238/2242)、99.613(3602/3616)、99.741(1931/1936),“11+1”集中化检测模式共检测357346份样本,其中1家血液中心样本291858,11家血站集中化样本65488,共计68065 pool,拆分325 pool,拆分出212个样本为阳性,其中212份HBV DNA阳性,6份HCV RNA阳性,3份HIV RNA阳性;HBV DNA阳性率分别为0.042%(123/291858)、0.106%(2/1880)、0.037%(3/8171)、0.062%(1/1617)、0.084%(16/19016)、0.207%(6/2896)、0.187%(11/5867)0.296%(7/2364)、0.126%(20/15883)0.178%(4/2242)、0.387%(14/3616)、0.258%(5/1936),两两比较地区间存在差异,核酸检测阳性率有年度下降的趋势。结论 因新疆地大物博很多地州血站每日无偿献血者样本量很少,每月仅开展实验不足10次,“11+1”集中化检测可降低输血传播疾病风险,能够优化检测资源配置,提高输血安全,并且在降低成本、报告及时方面比较有优势,但样本运送途中冷链的控制还需要严格控制。

摘要： 目的探讨乙肝e抗原(HBeAg)阴性慢性乙肝患者血清乙肝病毒核酸(HBV DNA)水平与肝纤维化四项(HA、LN、PCIIINP、IV-C)指标的关系。方法选取40岁以上HBeAg阴性慢性乙肝患者共283例,将乙肝患者HBV DNA水平分三组,105组,与肝纤四项比较。采用荧光定量PCR法定量检测其HBV DNA水平,采用化学发光法检测透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢNP)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)四项肝纤维化指标。结果0.05),105组肝纤四项比较,血清肝纤维标志物HA、LN、IV-C升高(P0.05);103~105组与>105组比较,血清肝纤维化标志物HA(P0.05).HBV DNA与HA、LN、PCⅢNP、Ⅳ-C均存在着正相关关系。结论随着HBV DNA复制水平的增高,HBV DNA与肝纤维四项HA,LN,PCⅢNP,Ⅳ-C间存在着正相关关系。HA在HBV DNA复制水平每一个阶段均增高,尤其以HBV DNA高复制水平增高为主。

摘要： 目的分析乙型肝炎患者血清HBV DNA的水平变化及其与肝细胞损伤的关系。方法根据肝功能生化结果将88例乙型肝炎患者分为轻度组(29例)、中度组(29例)和重度组(30例),血清HBVDNA水平采用实时荧光定量PCR测定,血清总胆汁酸、谷丙转氨酶(ALT)等肝功能指标采用日立生化分析仪测定。比较各组血清HBVDNA、总胆汁酸、ALT水平的差异,分析血清HBV DNA水平与肝功能受损程度的关系。结果血清总胆汁酸、ALT水平重度组明显高于中度组,中度组明显高于轻度组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HBV DNA水平重度组明显高于中度组,中度组明显高于轻度组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论乙型肝炎患者血清HBV DNA水平越高,其肝功能指标总胆汁酸、ALT水平也相应升高,反应出肝功能损害的加剧,证实HBVDNA水平与肝功能指标具有紧密的关系。

摘要： 目的分析探讨富马酸替诺福韦在初治低病毒载量慢性乙肝患者中的治疗效果。方法选取初次抗病毒治疗的慢性乙肝患者80例为观察对象,随机分为观察组与对照组。其中对照组采用常规治疗方法;观察组患者在常规治疗上再辅以富马酸替诺福韦治疗,对比两组临床疗效。结果两组患者治疗前的肝功能各项指标差异不明显,治疗后观察组患者的TBIL、ALT与HBV-DNA指标均优于对照组;观察组患者的ALT复常率、HBV-DNA转阴率、总有效率高于对照组。结论采用富马酸替诺福韦治疗初治低病毒载量慢性乙肝患者的临床效果明显,有助于低病毒载量慢性乙肝患者ALT、HBV-DNA指标的改善,值得肯定。

摘要： 目的探讨高敏PCR在慢乙肝低病毒血症患者抗病毒治疗监测中的临床应用价值。方法收集采用普通PCR检测HBV-DNA水平低于检测下限(200、100-200、10-100、200IU/mL组(P200IU/mL组肝硬度值与HBV-DNA阴性组肝硬度值,差异有统计学意义(P=0.023),其余各组之间比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论高敏PCR检测技术更能准确反应感染者的乙肝病毒复制水平;血清HBeAg定量及肝硬度结果也显示了其与HBV-DNA水平的一致性,能更好的对低病毒血症患者进行抗病毒治疗监测。

摘要： 目的:建立一种用SYBR Green Ⅰ荧光染料检测乙肝病毒的实时聚合酶链反应(PCR)方法。rn 方法:应用SYBR Green Ⅰ染料掺入双链DNA的原理，并对实时荧光定量PCR(real-time PCR)反应条件进行优化，验证方法的特异性、敏感性和稳定性，定量检测HBV DNA水平。以抗乙肝药物拉米夫定为例证明该方法。rn 结果:建立了定量检测HBV DNA的方法。rn 结论:应用SYBR Green Ⅰ对HBV DNA的相对定量具有简便、快速、重复性好、特异性强的特点，适用于抗HBV药物的大样品筛选及评价优化工作，并可发展成为高通量技术。

摘要： 目的:建立一种用SYBR Green Ⅰ荧光染料检测乙肝病毒的实时聚合酶链反应(PCR)方法。rn 方法:应用SYBR Green Ⅰ染料掺入双链DNA的原理，并对实时荧光定量PCR(real-time PCR)反应条件进行优化，验证方法的特异性、敏感性和稳定性，定量检测HBV DNA水平。以抗乙肝药物拉米夫定为例证明该方法。rn 结果:建立了定量检测HBV DNA的方法。rn 结论:应用SYBR Green Ⅰ对HBV DNA的相对定量具有简便、快速、重复性好、特异性强的特点，适用于抗HBV药物的大样品筛选及评价优化工作，并可发展成为高通量技术。

摘要： 目的:建立一种用SYBR Green Ⅰ荧光染料检测乙肝病毒的实时聚合酶链反应(PCR)方法。rn 方法:应用SYBR Green Ⅰ染料掺入双链DNA的原理，并对实时荧光定量PCR(real-time PCR)反应条件进行优化，验证方法的特异性、敏感性和稳定性，定量检测HBV DNA水平。以抗乙肝药物拉米夫定为例证明该方法。rn 结果:建立了定量检测HBV DNA的方法。rn 结论:应用SYBR Green Ⅰ对HBV DNA的相对定量具有简便、快速、重复性好、特异性强的特点，适用于抗HBV药物的大样品筛选及评价优化工作，并可发展成为高通量技术。

摘要： 目的：观察肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者肝组织病理改变特征，并分析血清HBeAg及HBVDNA定量与肝组织病理改变的关系。rn 方法：选取肝功能正常的慢性HBV感染者101例，行肝穿刺病理检查，依据血清HBeAg及HBVDNA将患者分组，分别比较HBeAg阳性和阴性组及HBVDNA阳性和阴性组患者肝组织炎症分级和纤维化分期结果。rn 结果：101例肝功能正常的慢性HBV感染者，83.2％(84/101)的患者存在不同程度的病理损害，其中轻度62例(61.4％)，中度11例(10.9％)，重度7例(6.93％)，肝硬化4例(3.96％)。HBeAg阴性组炎症分级和纤维化分级明显重于HBeAg阳性组(P<0.05及<0.01)，HBVDNA阴性者肝纤维化分期明显重于HBVDNA阳性者(P<0.01)。rn 结论：慢性乙肝病毒携带者，HBeAg及HBVDNA不能很好的反应肝组织的病理改变，应尽早进行肝活检，有利于判断病情和确定治疗方案。

摘要： 目的：观察肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者肝组织病理改变特征，并分析血清HBeAg及HBVDNA定量与肝组织病理改变的关系。rn 方法：选取肝功能正常的慢性HBV感染者101例，行肝穿刺病理检查，依据血清HBeAg及HBVDNA将患者分组，分别比较HBeAg阳性和阴性组及HBVDNA阳性和阴性组患者肝组织炎症分级和纤维化分期结果。rn 结果：101例肝功能正常的慢性HBV感染者，83.2％(84/101)的患者存在不同程度的病理损害，其中轻度62例(61.4％)，中度11例(10.9％)，重度7例(6.93％)，肝硬化4例(3.96％)。HBeAg阴性组炎症分级和纤维化分级明显重于HBeAg阳性组(P<0.05及<0.01)，HBVDNA阴性者肝纤维化分期明显重于HBVDNA阳性者(P<0.01)。rn 结论：慢性乙肝病毒携带者，HBeAg及HBVDNA不能很好的反应肝组织的病理改变，应尽早进行肝活检，有利于判断病情和确定治疗方案。

摘要： 目的：观察肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者肝组织病理改变特征，并分析血清HBeAg及HBVDNA定量与肝组织病理改变的关系。rn 方法：选取肝功能正常的慢性HBV感染者101例，行肝穿刺病理检查，依据血清HBeAg及HBVDNA将患者分组，分别比较HBeAg阳性和阴性组及HBVDNA阳性和阴性组患者肝组织炎症分级和纤维化分期结果。rn 结果：101例肝功能正常的慢性HBV感染者，83.2％(84/101)的患者存在不同程度的病理损害，其中轻度62例(61.4％)，中度11例(10.9％)，重度7例(6.93％)，肝硬化4例(3.96％)。HBeAg阴性组炎症分级和纤维化分级明显重于HBeAg阳性组(P<0.05及<0.01)，HBVDNA阴性者肝纤维化分期明显重于HBVDNA阳性者(P<0.01)。rn 结论：慢性乙肝病毒携带者，HBeAg及HBVDNA不能很好的反应肝组织的病理改变，应尽早进行肝活检，有利于判断病情和确定治疗方案。

摘要： 目的：观察肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者肝组织病理改变特征，并分析血清HBeAg及HBVDNA定量与肝组织病理改变的关系。rn 方法：选取肝功能正常的慢性HBV感染者101例，行肝穿刺病理检查，依据血清HBeAg及HBVDNA将患者分组，分别比较HBeAg阳性和阴性组及HBVDNA阳性和阴性组患者肝组织炎症分级和纤维化分期结果。rn 结果：101例肝功能正常的慢性HBV感染者，83.2％(84/101)的患者存在不同程度的病理损害，其中轻度62例(61.4％)，中度11例(10.9％)，重度7例(6.93％)，肝硬化4例(3.96％)。HBeAg阴性组炎症分级和纤维化分级明显重于HBeAg阳性组(P<0.05及<0.01)，HBVDNA阴性者肝纤维化分期明显重于HBVDNA阳性者(P<0.01)。rn 结论：慢性乙肝病毒携带者，HBeAg及HBVDNA不能很好的反应肝组织的病理改变，应尽早进行肝活检，有利于判断病情和确定治疗方案。

摘要： 乙型肝炎是由HBV感染引起的一种我国高发的传染性疾病。在慢性乙型肝炎治疗的过程中，除观察患者的症状体征外，临床上作为乙型肝炎病毒复制的监测指标主要为HBV DNA和HBeAg，受条件的限制，临床上最常用的是HBeAg。然而，由于HBV前C区基因的变异，可导致HBV分泌耶eAg不足或不产生HBeAg。在这种情况下，患者外周血中可检测不到HBeAg，但HBV仍有可能处于复制阶段。本研究对60例HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者HBeAg、PreSlAg检测结果进行比较，旨在探讨在慢性乙型肝炎患者中PreS1 Ag检测的临床意义。

摘要： 乙型肝炎是由HBV感染引起的一种我国高发的传染性疾病。在慢性乙型肝炎治疗的过程中，除观察患者的症状体征外，临床上作为乙型肝炎病毒复制的监测指标主要为HBV DNA和HBeAg，受条件的限制，临床上最常用的是HBeAg。然而，由于HBV前C区基因的变异，可导致HBV分泌耶eAg不足或不产生HBeAg。在这种情况下，患者外周血中可检测不到HBeAg，但HBV仍有可能处于复制阶段。本研究对60例HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者HBeAg、PreSlAg检测结果进行比较，旨在探讨在慢性乙型肝炎患者中PreS1 Ag检测的临床意义。

摘要： 乙型肝炎是由HBV感染引起的一种我国高发的传染性疾病。在慢性乙型肝炎治疗的过程中，除观察患者的症状体征外，临床上作为乙型肝炎病毒复制的监测指标主要为HBV DNA和HBeAg，受条件的限制，临床上最常用的是HBeAg。然而，由于HBV前C区基因的变异，可导致HBV分泌耶eAg不足或不产生HBeAg。在这种情况下，患者外周血中可检测不到HBeAg，但HBV仍有可能处于复制阶段。本研究对60例HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者HBeAg、PreSlAg检测结果进行比较，旨在探讨在慢性乙型肝炎患者中PreS1 Ag检测的临床意义。

摘要： 本发明提供基于转录的扩增目标HBV核酸序列的方法，该方法从可选存在于样品中的HBV DNA开始，其包括下列步骤：-在扩增缓冲液中温育怀疑含有HBV的样品，该温育体系中含有一种或多种能够在选择出的限制位点切割HBV DNA的限制性内切酶，该限制性内切酶形成指定的此HBV DNA链的3′末端；该温育体系中含有启动子引物，该启动子引物具有包含被依赖DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列的5′区域和与指定的DNA链的3′末端互补的3′区域；该温育体系中含有第二或反向引物，其具有与启动子引物相反的极性且含有该目标序列的5′末端；且在HBV ssDNA作为目标序列的情况下，该温育体系中含有限制性引物；-将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行限制性内切酶的消化；-将如此获得的样品以一定的温度和时间进行加热处理，该温度和时间足以失活限制性内切酶和/或至少部分地导致双链的单链化；-向样品中加入下列试剂，具有依赖RNA的DNA聚合酶活性的酶、具有依赖DNA的DNA聚合酶活性的酶、具有RNA酶H活性的酶、具有RNA聚合酶活性的酶；和-将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行扩增。

摘要： 本发明提供基于转录的扩增目标HBV核酸序列的方法，该方法从可选存在于样品中的HBV DNA开始，其包括下列步骤：在扩增缓冲液中温育怀疑含有HBV的样品，该温育体系中含有一种或多种能够在选择出的限制位点切割HBV DNA的限制性内切酶，该限制性内切酶形成指定的此HBV DNA链的3′末端；该温育体系中含有启动子引物，该启动子引物具有包含被依赖DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列的5′区域和与指定的DNA链的3′末端互补的3′区域；该温育体系中含有第二或反向引物，其具有与启动子引物相反的极性且含有该目标序列的5′末端；且在HBV ssDNA作为目标序列的情况下，该温育体系中含有限制性引物；将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行限制性内切酶的消化；将如此获得的样品以一定的温度和时间进行加热处理，该温度和时间足以失活限制性内切酶和/或至少部分地导致双链的单链化；向样品中加入下列试剂，具有依赖RNA的DNA聚合酶活性的酶、具有依赖DNA的DNA聚合酶活性的酶、具有RNA酶H活性的酶、具有RNA聚合酶活性的酶；和将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行扩增。