IMBs-qPCR和多重PCR快速检测乳制品沙门氏菌的技术研究

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 论文的研究背景

1．1．1 研究背景

1．1．2 选题意义

1．2 乳制品中病原微生物研究进展

1．2．1 乳及乳制品中常见病原微生物来源

1．2．2 常见乳制品中致病微生物概述

1．3．1 常规微生物培养与生化检测方法

1．3．2 仪器检测方法

1．3．3 核酸检测方法

1．3．4 以免疫学为基础的检测方法

1．3．5 ATP生物发光法

1．3．6 生物传感器

1．3．7 细菌直接计数法

1．4 研究内容

第2章 沙门氏菌外膜蛋白表达纯化

2．1 引言

2．2 材料

2．2．1 菌株及载体

2．2．2 试剂

2．3 方法

2．3．1 菌株培养与细菌基因组DNA提取

2．3．2 沙门氏菌PagC基因扩增

2．3．3 沙门氏菌PagC基因原核表达载体构建及鉴定

2．3．4 沙门氏菌PagC蛋白的诱导表达及鉴定

2．3．5 包涵体的纯化

2．4 结果与分析

2．4．1 沙门氏菌PagC基因原核表达构建

2．4．1 沙门氏菌PagC蛋白表达

2．5 讨论

2．6 本章小结

第3章 沙门氏菌免疫磁珠制备

3．1 引言

3．2 材料

3．2．1 试验菌株及培养基

3．2．2 试验溶液及配制

3．3．1 PagC抗血清制备

3．3．2 多克隆抗体的纯化及定量

3．3．3 测定PagC抗血清和纯化后抗体效价

3．3．4 重组PagC蛋白Western-blotting验证

3．3．5 重组PagC蛋白免疫磁珠制备

3．3．6 重组蛋白的免疫磁珠条件优化

3．3．7 免疫磁珠富集沙门氏菌能力的确定

3．3．8 免疫磁珠富集沙门氏菌效果测定

3．4 结果与分析

3．4．1 测定重组PagC蛋白抗血清和纯化后抗体效价

3．4．2 重组PagC蛋白Western-blotting结果

3．4．3 PagC蛋白免疫磁珠制备与优化

3．4．4 PagC蛋白免疫磁珠富集沙门氏菌的效率确定

3．4．5 PagC蛋白免疫磁珠富集沙门氏菌的特异性分析

3．5 讨论

3．6 本章小结

第4章 IMBs-q PCR检测乳制品中沙门氏菌

4．1 引言

4．2．1 试验材料

4．2．2 荧光定量PCR试剂

4．2．3 细菌DNA提取

4．2．4 荧光定量PCR

4．2．5 PagC基因荧光定量PCR抗干扰试验分析

4．2．6 免疫磁珠富集生乳中沙门氏菌及荧光定量检测沙门氏菌

4．3 结果与分析

4．3．1 荧光定量PCR检测沙门氏菌的可重复性分析

4．3．2 荧光定量PCR检测沙门氏菌的干扰性分析

4．3．3 IMBs-荧光定量PCR检测生乳中沙门氏菌

4．3 讨论

4．4 本章小结

第5章 多重PCR检测乳制品中沙门氏菌

5．1 引言

5．2 材料

5．2．1 菌株

5．2．2 试剂

5．2．3 菌株培养

5．2．4 细菌基因组DNA提取

5．2．5 沙门氏菌特异引物

5．2．6 多重PCR体系优化

5．2．7 乳制品中的沙门氏菌DNA提取方法

5．3 结果与分析

5．3．1 多重PCR条件优化

5．3．2 多重PCR检测乳制品中的沙门氏菌

5．3 讨论

5．4 本章小结

第6章 比较IMBs-qPCR和多重PCR检测乳制品中沙门氏菌的检测效率

6．1 引言

6．2 材料

6．2．1 菌株

6．3 方法

6．4 结果与分析

6．5 结论

结论

参考文献

攻读硕士学位期间所发表的论文

致谢

个人简历