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嘌呤核苷磷酸化酶温敏型表达载体的构建、表达及应用于腺苷转化的研究

         

摘要

通过双酶切方法将重组质粒上大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)基因克隆到pBV220表达载体上,构建了温敏型PNPase的表达载体pBV 220-PNP,转化大肠杆菌DH5α并使之表达.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异表达条带,其分子量约为26 kDa.在此基础上研究了不同诱导条件对蛋白表达量的影响.分别以肌苷和尿苷为核糖供体研究重组菌转化腺苷的条件,发现肌苷最适合作为核糖供体,在30 mmol·L-1 pH 7.5的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液中,以30 mmol·L-1肌苷和10 mmol·L-1腺嘌呤作底物,加入0.5% 基因工程湿菌体60 ℃反应3 h,腺苷的转化率为85.57%.

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