构建胸膜肺炎放线杆菌apxIC基因插入突变株

徐福洲; 陈小玲; 史爱华; 杨兵; 王金洛

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目的:构建胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxIC基因插入突变菌株,以鉴定Apx I毒素的生物学特性.方法:根据apxI核酸序列(U05042)设计1对引物,用于自APP血清10型参考菌株(D13039)基因组DNA中扩增apxIC基因及其上下游约2.8kb的基因片段,经克隆测序后在apxIC基因下游Xho I酶切位点处插入约0.9 kb的氯霉素(Chl)抗性基因表达盒,构建用于转化的转移载体pUIC-Chlr,将转移载体DNA经电转化导入APP血清10型参考菌株中进行同源重组,以获得突变菌株.结果:在含有氯霉素的培养基中经筛选获得2株丧失溶血活性的突变菌株(D13039C-Chlr);利用PCR和Southern blot对突变菌株鉴定,显示氯霉素抗性基因已被插入细菌基因组中.结论:利用电转化和同源重组技术构建成功APP apxIC基因插入突变菌株,为分析Apx I毒素的生物学特性,进而研制APP基因工程减毒活疫苗奠定了基础.

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来源
《生物技术通讯》 |2008年第2期|229-231|共3页
作者
徐福洲; 陈小玲; 史爱华; 杨兵; 王金洛;
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作者单位

北京市农林科学院,畜牧兽医研究所,北京,100097;

北京市农林科学院,畜牧兽医研究所,北京,100097;

北京市农林科学院,畜牧兽医研究所,北京,100097;

北京市农林科学院,畜牧兽医研究所,北京,100097;

北京市农林科学院,畜牧兽医研究所,北京,100097;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;病原细菌;
关键词
胸膜肺炎放线杆菌; apxIC基因; 突变; 同源重组;

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