一种白鬼笔菌种培养方法

技术领域

本发明涉及菌种种植技术领域，具体为一种白鬼笔菌种培养方法。

背景技术

白鬼笔(Phallus impudicus L.Pets.)属鬼笔科(Phallaceae)、鬼笔属(Phallus)真菌，别名鬼笔、鬼笔菌、竹下菌、竹菌、无裙荪。李泰辉等(2004)对滇黔桂鬼笔科研究，阐明了白鬼笔分布在山西、内蒙古、辽宁、吉林、黑龙江、江苏、安徽、山东、河南、湖北、广东、海南、四川、云南、西藏、甘肃及亚洲(日本、韩国等亚洲温带地区)、欧洲、非洲、北美洲、南美洲，生于竹林、树林内或草地上；经调查贵州也有大量白鬼笔野生资源分布，夏秋季节群生或单生于林中地上的腐叶层中。《全国中草药汇编》(2014)记载其具有重要食药用价值，味甘、淡，性温，归心经。具有活血、除湿、止痛功效，常用于风湿痛。

有中国发明专利，专利号为CN103004475A，的白鬼笔高产栽培方法采用了大量的化学药品，使得白鬼笔生产成本过高，且容易污染环境，且培育出的产品不但没有降低白鬼笔内的有毒成分，而增加了有毒成分，增加了后期的提纯成本。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种白鬼笔菌种培养方法，解决了现有技术中白鬼笔培育的产品质量低、成本高的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种白鬼笔菌种培养方法，包括如下步骤：(1)种源采集：采集新鲜、无病虫害、生长良好的野生或家种球形后期菌蕾；(2)纯母种(亦称一级种)培养：制作母种培养基，通过组织块分离法纯化培养，获得纯母种；(3)二级菌种培养：制作二级菌种培养基，将纯母种接种到二级菌种培养基中；(4)三级菌种培养：制作三级菌种培养基，将二级菌种接种到三级菌种培养基中。

优选的，所述步骤(1)种源采集、(2)纯母种、(3)二级菌种、(4)三级菌种培养，具体是指，在野生或家种环境采集白鬼笔球形后期菌蕾放入采集箱(篮)，挑选出新鲜、无病虫害、生长良好的野生或家种球形后期菌蕾，将选好的菌蕾用清水清洗干净，用火焰或75％酒精消毒的小刀切掉基部残留的菌索，在接种箱或超净工作台中用75％酒精进行表面消毒，最后用蒸馏水清洗后并用吸水纸吸干其表面水分，用火焰或75％酒精消毒的小刀按横纵向“十字形”切开菌蕾，用镊子取出胶质体以内的组织块接入到母种(培养皿)培养基中，22-24℃条件下避光培养。菌丝萌发生长至0.5～1.5cm后，切取菌落边缘分叉少、粗壮的菌丝接种到母种(试管斜面)培养基中，22-24℃条件下避光培养20～30d获得纯母种，将母种接种到二级菌种(玻璃瓶)培养基中，每支试管接种2-3瓶二级菌种培养基，22-24℃条件下避光培养60～90d获得二级菌种，将二级菌种接种到三级菌种(塑料袋)培养基中，每瓶接种30-40包，22-24℃条件下避光培养70～90d获得三级菌种。

优选的，所述纯母种培养基，按10个培养皿或10支试管所需重量数计算，包括淀粉0.5g，竹叶0.05g，琼脂粉0.5g，葡萄糖0.1g，蒸馏水500g，pH自然条件下；在121℃、0.105MPa压力条件下，灭菌60min后，制作成60mm的培养皿平板培养基或18*180mm(或18*220mm)的试管斜面培养基，二级菌种培养基，按重量份数计算，包括木屑70份，玉米面20份，石膏粉0.5份，蔗糖0.5份，水60份；用500ml的盐水玻璃瓶分装，装入量为450ml，在100℃下常压灭菌10～12h，或在121℃、0.105MPa压力条件下灭菌2～3h，制作成二级菌种培养基。三级菌种培养基与二级菌种培养基相同，用菌种培养专用塑料袋分装，装入量为1000g，供冬荪栽培用。

优选的，所述步骤(1)中，挑选的球形后期菌蕾直径为7～16cm。

优选的，所述步骤(2)中，火焰消毒用外焰，消毒时间1min；超净工作台使用前进行紫外线照射15min，然后吹风15min或通风30min；接种箱使用前用熏蒸消毒剂(一般环氧乙烷、过氧乙酸)熏蒸30min。

(三)有益效果

本发明提供了一种白鬼笔菌种培养方法。具备以下有益效果：

本发明有利于保护白鬼笔野生资源，有利于开展白鬼笔菌种提纯复壮工作，消除化学试剂、杀菌剂等使用，有利于降低白鬼笔菌种有害成分，提高白鬼笔产品品质，为白鬼笔大面积种植提供质量保障，持续、稳定推进食用菌产业发展，且本发明生产工艺简化、便于操作、利于推广

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例：

本发明实施例提供一种白鬼笔菌种培养方法，包括如下步骤：(1)种源采集：采集新鲜、无病虫害、生长良好的野生或家种球形后期菌蕾；(2)纯母种(亦称一级种)培养：制作母种培养基，通过组织块分离法纯化培养，获得纯母种；(3)二级菌种培养：制作二级菌种培养基，将纯母种接种到二级菌种培养基中；(4)三级菌种培养：制作三级菌种培养基，将二级菌种接种到三级菌种培养基中。

步骤(1)种源采集、(2)纯母种、(3)二级菌种、(4)三级菌种培养，具体是指，在野生或家种环境采集白鬼笔球形后期菌蕾放入采集箱(篮)，挑选出新鲜、无病虫害、生长良好的野生或家种球形后期菌蕾，将选好的菌蕾用清水清洗干净，用火焰或75％酒精消毒的小刀切掉基部残留的菌索，在接种箱或超净工作台中用75％酒精进行表面消毒，最后用蒸馏水清洗后并用吸水纸吸干其表面水分，用火焰或75％酒精消毒的小刀按横纵向“十字形”切开菌蕾，用镊子取出胶质体以内的组织块接入到母种(培养皿)培养基中，22℃条件下避光培养，菌丝萌发生长至0.5cm后，切取菌落边缘分叉少、粗壮的菌丝接种到母种(试管斜面)培养基中，22℃条件下避光培养20d获得纯母种，将母种接种到二级菌种(玻璃瓶)培养基中，每支试管接种2瓶二级菌种培养基，22℃条件下避光培养60d获得二级菌种，将二级菌种接种到三级菌种(塑料袋)培养基中，每瓶接种30包，22℃条件下避光培养70d获得三级菌种。

纯母种培养基，按10个培养皿或10支试管所需重量数计算，包括淀粉0.5g，竹叶0.05g，琼脂粉0.5g，葡萄糖0.1g，蒸馏水500g，pH自然条件下；在121℃、0.105MPa压力条件下，灭菌60min后，制作成60mm的培养皿平板培养基或18*180mm(或18*220mm)的试管斜面培养基，二级菌种培养基，按重量份数计算，包括木屑70份，玉米面20份，石膏粉0.5份，蔗糖0.5份，水60份；用500ml的盐水玻璃瓶分装，装入量为450ml，在100℃下常压灭菌10h，或在121℃、0.105MPa压力条件下灭菌2h，制作成二级菌种培养基。三级菌种培养基与二级菌种培养基相同，用菌种培养专用塑料袋分装，装入量为1000g，供冬荪栽培用。

步骤(1)中，挑选的球形后期菌蕾直径为7cm。步骤(2)中，火焰消毒用外焰，消毒时间1min；超净工作台使用前进行紫外线照射15min，然后吹风15min或通风30min；接种箱使用前用熏蒸消毒剂(一般环氧乙烷、过氧乙酸)熏蒸30min。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。