变性高效液相色谱

摘要： 目的 建立针对线粒体DNA 12SrRNA基因常见耳聋相关突变的Primer Extension-DHPLC(PE-DHPLC)基因诊断新方法.方法 将包含线粒体DNA 12SrRNA 961insC、T1095C、C1494T、A1555G 4种不同突变的4例外周血DNA样本和4例正常对照标本经测序验证,PCR扩增靶序列,设计延伸引物,延伸后得到线粒体DNA 12SrRNA基因961insC、T1095C、C1494T、A1555G 4个常见突变的特异性延伸片段,用全变性高效液相色谱分析延伸片段混合物,分离图谱鉴定被检样本的基因型.结果 4例包含线粒体DNA 12SrRNA基因4种耳聋相关突变的DNA样本均扩增出包含4种突变的975 bp特征性条带,PE-DHPLC检测结果显示突变者有引物峰和突变峰两个峰,完全可以鉴别出4种突变,而4例正常对照标本仅显示单个引物峰.结论 本实验建立了Primer Extension-DHPLC的线粒体相关耳聋突变分析新方法,可用于耳聋的基因诊断.

摘要： 目的 探讨染色体微阵列分析技术(chromosomal microarray analysis,CMA)在检测胎儿DMD基因缺失的价值.方法 对2例超声软指标异常、无杜氏肌营养不良Duchenne muscular dystrophy,DMD)或贝氏肌营养不良(Becker muscular dystrophy,BMD)家族史的胎儿羊水样本进行染色体核型分析及CMA检测,应用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatograghy,DHPLC)技术检测胎儿及其母亲DMD基因.结果 胎儿1羊水染色体核型为46,XY;CMA结果为arr[GRCh37]Xp21.1(32 565 489～32 681 461)×1,缺失范围为119 kb,涉及DMD基因的第10～16外显子;DHPLC检测结果显示胎儿1 DMD基因第10～16外显子缺失,胎儿1母亲DMD基因第10～16外显子杂合缺失.胎儿2羊水染色体核型为46,XY;CMA结果为arr[GRCh37] Xp21.1(32 104 604～32 358 874)×1,缺失范围为254 kb,涉及DMD基因的第41～44外显子;DHPLC检测结果显示胎儿2 DMD基因第41～44外显子缺失,胎儿母亲DMD基因未见异常.结论 CMA检出2例无家族DMD/BMD病史的DMD基因缺失胎儿,CMA用于产前诊断有助于发现因基因缺失所致的单基因病,可在一定程度上提高疾病诊断率.

摘要： 利用PCR结合变性高效液相色谱法快速检测大肠埃希菌喹诺酮耐药决定区gyrA基因和gyrB基因突变.方法:对22株喹诺酮耐药大肠埃希菌进行2种基因的PCR扩增,产物经DNA杂交形成同源和异源双链后进行变性高效液相色谱法检测和序列测定.结果:20株试验菌gyrA基因出现异常峰型,14株试验菌gyrB基因出现异常峰型.测序证实所有异常峰型的样本均存在突变位点,正常单峰则无突变位点.其中gyrA基因存在Ser83Leu和Asp87Asn突变,突变率分别为90.9％和86.4％;gyrB基因存在Glu185Asp突变,突变率为4.5％,两种基因均存在多个位点的同义突变.结论:DHPLC方法可用于快速检测大肠埃希菌gyrA和gyrB基因突变.

摘要： Objective To screen for carriers of SMN1 gene mutation,which underlies spinal muscular atrophy (SMA),in 4931 pregnant women from Liuzhou region of Guangxi,and to determine the carrier rate.Methods Combined denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) and multiple PCR techniques were used to detect the copy number of SMN1 gene.The carrier frequency was calculated.The spouse of the carrier was also screened,and prenatal diagnosis was provided to the couples who were both positive.Results Among the 4931 pregnant women,61 were found to harbor only one copy of the SMN1 gene,which yielded a carrier rate of 1.2％.Subsequent testing has identified 1 fetus carrying homozygous deletions of the SMN1 gene.Conclusion The carrier rate of SMA mutation in Liuzhou region is slightly lower than that of other regions of southern China.DHPLC can effectively screen the carriers of SMA mutation and provide a basis for genetic counseling and prenatal diagnosis.%目的 对广西柳州地区4931例孕妇进行脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)突变携带者筛查,了解本地区人群SMN1基因拷贝数异常的携带率.方法 联合应用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)和多重PCR技术对孕妇进行SMN1基因的拷贝数检测,判断其是否为携带者,并计算携带者的频率.对携带者的配偶进行筛查,并为双方均为阳性者提供产前诊断.结果 在4931例孕妇中,共检出SMN1拷贝数为1的携带者61例,检出率为1.2％.诊断SMN1纯合缺失胎儿1例.结论 广西柳州地区SMA突变的携带率略低于中国南部其他地区.DHPLC可有效筛查SMA突变的携带者,为遗传咨询和产前诊断提供依据.

摘要： Objective To explore the candidate disease causing gene for a case with floppy infant syndrome (FIS).Methods Single nucleotide polymorphism array (SNP array) was used for analyzing the whole genome copy number mutations in the proband.Multiple PCR combined with denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC) was employed to verify the suspected mutations in the proband and his family members.Results A large duplication arr [hg19] Xq13.1:67 987 646-73 805 828,which spans approximately 5.818182 Mb and encompasses 66 known genes,was identified in the proband.The multiple PCR-DHPLC assay confirmed duplication of HDAC8,PHKA1,TAF1,DLG3,KIF4A,IGBP1,PJA1 and SLC16A2 genes in the proband.His mother and grandmother both had duplication of the above genes in one X chromosome,but his aunt had not.Conclusion The large Xq13.1 duplication identified by the SNP array probably underlies the FIS in this family.For its high-throughput,high resolution and capacity of automation,SNP array has provided a first line method for the genetic testing for infants featuring developmental delay with unknown reason,mental retardation,autism,multiple malformation and FIS.%目的 探讨1例松软婴儿综合征(floppy infant syndrome,FIS)家系的侯选致病基因.方法 用单核苷酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism array,SNP-array)芯片对患儿进行全基因组拷贝数扫描,之后用PCR和变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)在患儿及其家系成员中验证芯片检测的结果.结果 患儿的检测结果为arr[hg19] Xq13.1:67 987 646-73 805 828,即存在5.818 182 Mb的大片段重复,该区域共涉及66个已知基因.DHPLC检测证实患儿重复区内的8个基因(PJA1、IGBP1、KIF4A、DLG3、TAF1、HDAC8、PHKA1和SLC16A2)均存在重复,其母亲和外祖母仅一条X染色体携带上述重复,其姨妈则未携带上述重复.结论 Xq13.1区的大片段重复可能是患儿的遗传学病因.SNP-array检测具有通量高、分辨率高、自动化操作的优势,可作为不明原因发育迟缓、智力低下、自闭症、多发畸形及FIS的首选检测方法.

摘要： 变性高效液相色谱技术是一种新型的筛选基因序列变异技术,具有单次检测量大、自动化操作度高等特点,本文介绍了变性高效液相色谱技术的工作原理,及其在科研、医疗上的应用.

摘要： 应用多重PCR(motiplex PCR)结合变性高效液相色谱技术(denaturing high-performanceliquid chromatography,DHPLC)建立了快速检测食品中产志贺毒素大肠杆菌O111和O157的方法.以基因wzxO111、rfbEO157为靶基因,建立多重PCR-DHPLC方法,进行特异性和灵敏度测试,同时进行RT-PCR检测比较灵敏度.该方法具有良好特异性,可以一次PCR扩增同时检测O111、O157;灵敏度达到25 CFU/mL.129份牛肉样品中检出1例O111,3例O157阳性;74份鸡肉样品中检测出O111、O157阳性各1例,67份蔬菜样品中未检测到O111、O157.本文建立O111、O157多重PCR-DHPLC检测方法,操作简便,特异性强,适用于产志贺毒素大肠杆菌筛选检测.

摘要： 变性高效液相色谱(Denaturing High Performance Liquid Chromatography,DHPLC)是近年发展起来的一种高通量筛选核酸多态性和基因突变的新技术,已广泛应用于生命科学研究的众多领域.本文对该技术的基本原理及在植物病原线虫检疫中的应用前景进行了评述.与传统的分子生物学方法相比较，DHPLC具有许多优势：高通量检测，适合大量样本的同时检测,自动化程度高，提高检测效率，降低劳动强度，检测的准确率高，特异性强，研究成果易于形成标准推广使用，检测结果以波形图呈现，直观明了，这些优势都极大地满足了现代植物线虫检测工作的需要，除此之外，DHPLC与现有的植物线虫检测技术和方法有很好的兼容性。

摘要： 应用多重PCR反应(multiplex PCR，mPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high—performance liquid chromatography，DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16s rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因为靶基因，选择2对引物，建立并优化了鉴别空肠弯曲菌的多重PCR体系，扩增产物分别为287 bp、159 bp。采用22株细菌验证了该多重PCR具有特异性。PcR检测的灵敏度在DNA水平上达到10 pg/μL；在人工模拟污染样品起始污染浓度为1．5个／mL时，42°C微需氧条件下培养24 h可被检出。在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中，检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性。本研究建立的多重PCR—DHPLC方法可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌的快速检测。

摘要： P-糖蛋白(P-gp)是ATP依赖的跨膜转运蛋白,能从细胞内向外泵药物或其代谢物,降低细胞内的药物浓度,多种药物都是P-gp的底物,这些药物包括抗肿瘤药物、地高辛、环孢素A(CsA)和HIV-1抑制剂等多种药物。P-gp广泛分布于胃肠道、血脑屏障等处,影响药物的吸收、代谢、分布和排泄。P-gp由多药耐药基因(multidrug resistance gene,MDR1)编码,MDR1基因由28个外显子组成,含有29个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),SNPs是指基因组中由单个核苷酸改变所引起的DNA序列多态性,包括碱基转换、颠换、插入、缺失等变化。本实验以44名服用单剂量CsA的健康志愿者为研究对象，以变性高效液相色谱技术，检测了C3435T的单核苷酸多态性，并与DNA测序法进行了比较。DHPLC是近年来建立并迅速发展的高效、经济的变异检测技术。其原理是通过HPLC在部分本性的条件下将发生错配的异源杂合双链DNA与完全匹配的同源双链DNA、分离。

摘要： 变性高效液相色谱(DHPLC)是一种新型遗传变异筛查技术,可用于单碱基替换(或单核苷酸多态性),小片段缺失或插入等多种基因突变的检测。DHPLC基因扫描技术可在生殖细胞系和体细胞系中筛查遗传变异。而像特定位点DNA甲基化状态的改变等遗传现象也可用在DHPLC基础上建立的方法来检测。遗传变异的生物学效应是由突变基因的位置和特点决定的,而功能相关基因突变的发现对相关药物的研发有很大的促进作用。本文将对DHPLC技术在突变检测领域的应用实例进行介绍和讨论；介绍的重点分别是致病基因突变位点的确认,以及药物代谢和耐药性相关基因突变的检测。

摘要： 本研究使用DHPLC技术检测TEM型ESBLs基因亚型，结果表明，在最适温度下DHPLC分析样本的阳性率为100%，42株TEM阳性标本中，35株出现单一洗脱峰，峰的形态与TEM-1标准参考模板峰型一致。7株表现为异常洗脱峰，其中5株为一种异常洗脱峰，另外2株为另一种异常洗脱峰，异常峰型比单一峰型滞留时间提前0.15-0.30min。与测序结果对比显示35株单一峰型标本均为TEM-1型;5株DHPLC显示为一种异常洗脱峰型的标本为TEM-10，存在第425位碱基由T→C，第335位碱基由G→A两种突变;2株DHPLC显示为另一种异常洗脱峰型的标本测序结果为TEM-116，存在第228位碱基由T→C第396位碱基由T→G2种突变。本研究中DHPLC技术对TEM型基因检测的特异性达100%。另外，TEM-10和TEM-116型ESBLs均为首次在该院发现，应引起临床高度重视，避免引起院内感染。

摘要： 目的：建立PCR/DHPLC(变性高效液相色谱)分析技术检测线粒体12S rRNA基因第1555位A-G均质点突变。方法：收集4例临床诊断为氨基甙类抗生素耳聋标本，以40例健康体检者作为对照，提取患者及对照组血液DNA，PCR扩增，用DHPLC对PCR产物进行突变检测。

摘要： 本研究建立了一种应用PCR结合变性高效液相色谱技术(PCR-DHPLC)检测柑橘溃疡病菌的方法。根据柑橘溃疡病菌GENEBANK中报道的OPM-12 SCAR ragment基因片段(AF312370)，设计特异性PCR检测引物，并结合文献报道的rpf基因设计的引物对参试菌株进行了PCR-DHPLC和双重PCR-DHPLC特异性和灵敏度分析。结果显示：PCR-DHPLC检测的特异性强、灵敏度为菌浓度2×102 cfu/mL。该方法能简便、特异性强、灵敏度高地检测柑橘溃疡病菌。

摘要： 变性高效液相色谱(DHPLC)是一种新型遗传变异筛查技术,可用于单碱基替换,小片段缺失或插入、微卫星不稳定性等检测,具有全自动、高通量、快速、准确等技术特点.目前我们已成功地将DHPLC应用于单核苷酸多态性、微卫星及小卫星等遗传标记的检测,并进行疾病易感性的研究.本文探讨遗传标记的DHPLC检测在肿瘤分子病理学研究中的应用。

摘要： 成功地建立了以DHPLC筛查LDLR基因点突变的方法及技术参数,该方法简便,结果稳定,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段.

摘要： 为准确了解沙门菌受NTG及VBNC条件作用,其基因组发生突变的情况.本研究用Msel和EcoRI两种酶对VBNC沙门菌突变体基因组DNA进行酶切,酶切产物与接头连接后,依次进行了预扩增和选择性扩增.扩增产物经8％PAGE电泳与DHPLC检测后,分别获得AFLP与DHPLC图谱.两图谱综合分析结果显示,突变体存在1条大约200bp的特异性条带,是典型的分子标记.整个AFLP图谱共扩增出108条带,这些片段分布在29个不同位置,其中突变体平均在每个泳道上出现19.3条谱带,而原菌则平均出现12条.而且突变体还在20个不同位置上还具有多态性条带,多态性为68.96％(20/29),说明突变体与供体的基因组多态性存在差异.统计分析表明,突变体组间的重复率为96.6％,组内平均重复率为96.55％,说明AFLI,图谱具有较高的重复性与稳定性.上述结果充分证实沙门菌因在受到NTG及VBNC条件作用后,其基因组发生了突变,并存在1个分子标记,可用VBNC沙门氏突变体的快速鉴定.

摘要： 本发明涉及一种新型液相色谱柱。该色谱柱包括色谱柱管、装设在色谱柱管两端的色谱柱头、垫片、和筛板，还包括一柱芯，柱芯直径小于色谱柱管内径，柱芯与色谱柱管同轴置于色谱柱管的中心，填料填充在柱芯与色谱柱管间的环状区域；筛板中心处穿孔，柱芯的上下底面中心各有一个小圆柱，小圆柱的尺寸与筛板中心孔径匹配。本发明通过在色谱柱管内固定一根柱芯，可以基本解决在色谱分析时普遍存在的拖尾问题，从而提高色谱柱的分辨率，在化工、生物、医药等领域中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种采用液—液—液三相静态萃取高效液相色谱鉴别阿胶的方法。即采用三种不同极性和不同比重的溶剂，以非极性溶剂为轻相、极性溶剂为中间相(将阿胶预先溶于该相)、弱极性溶剂为重相组成三相萃取体系，在静态下对阿胶进行萃取，相分离后制成三种极性萃取物供试液并对三种供试液分别以不同的流动相梯度，按照高效液相色谱法测定，记录色谱图和三维谱图。对黄明胶、杂皮胶采用与阿胶相同的方法进行实验。通过对三种胶在相同条件下测定的同相萃取物HPLC图谱进行对比分析。该法鉴别阿胶，检测灵敏度高，分离度、对称性、重现性好，鉴别特征明显，能够准确鉴别阿胶真伪并有效控制其内在质量。

摘要： 本发明涉及液相色谱测定方法、液相色谱测定装置和液相色谱测定程序存储介质。在切换多个测定模式来测定HbA1c的情况下，抑制HbA1c的保留时间产生偏移并且缩短测定时间。HPLC装置中，使用液相色谱法，切换通过将多个种类的洗脱液依次输送至分析柱来对测定试样的血红蛋白A1c和变异血红蛋白进行测定的第一测定模式与通过将多个种类的洗脱液中与第一测定模式中使用的洗脱液共通的多种共通洗脱液依次输送至所述分析柱来对血红蛋白A1c进行测定的第二测定模式，在第一测定模式下测定血红蛋白A1c时，以使血红蛋白A1c的第一保留时间与在第二测定模式下测定的血红蛋白A1c的第二保留时间相同的方式，使分析柱平衡化。

摘要： 本发明的液相色谱用柱具有：筒状的柱主体；配置在该柱主体的洗脱液流入侧端部的流入侧过滤器、和配置在该柱主体的洗脱液流出侧端部的流出侧过滤器；以及填充在上述流入侧过滤器与上述流出侧过滤器之间的填充剂，上述流入侧过滤器具有从与上述填充剂相接触侧起依次配置的第1树脂过滤器构件和第2树脂过滤器构件这二层结构，上述第1树脂过滤器构件具有比上述第2树脂过滤器构件的压痕弹性模量低的压痕弹性模量。

摘要： 本发明提供一种附子的高效液相色谱检测方法及高效液相色谱串联质谱联用检测方法，属于药物检测技术领域，所述高效液相色谱检测方法是取附子供试品溶液利用0.04mol/L的乙酸铵‑乙腈作为流动相进行高效液相色谱检测，即得检测结果；所述高效液相色谱质谱联用检测方法利用上述附子的高效液相色谱检测条件进行检测。本发明通过调整色谱条件及附子的前处理过程，再分别采用高效液相色谱检测方法及高效液相色谱串联质谱联用检测方法对附子进行检测，能够有效将活性成分分离并检出。

摘要： 本发明涉及一种高效液相色谱配合液相色谱串联质谱检测兽药非法添加喹诺酮类物质，包括样品处理、标准工作溶液配置、标准曲线的绘制、定性分析和定量分析；其中样品处理包括以下步骤，步骤1：称取样品，将样品置于离心管中，加入Na2.EDTA、乙腈、甲醇、氯化钠和磷酸盐缓冲溶液，旋涡混匀，并震荡提取上清液，分组加入蒸馏水稀释至100倍、1000倍和10000倍；步骤2：用甲醇对步骤1中稀释后上清液进行洗脱，洗脱液置于试管中40°C氮气浓缩至干，加入甲酸乙腈定容液后，涡旋混匀，过0.22um滤膜备用；由于采用液相色谱串联质谱和高效液相色谱，提高了定性和定量的准确性。

摘要： 本发明涉及一种新型液相色谱柱。该色谱柱包括色谱柱管、装设在色谱柱管两端的色谱柱头、垫片、和筛板，还包括一柱芯，柱芯直径小于色谱柱管内径，柱芯与色谱柱管同轴置于色谱柱管的中心；筛板中心处穿孔，柱芯的上下底面中心各有一个小圆柱，小圆柱的尺寸与筛板中心孔径匹配。本发明通过在色谱柱管内固定一根柱芯，可以基本解决在色谱分析时普遍存在的拖尾问题，从而提高色谱柱的分辨率，在化工、生物、医药等领域中具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种采用液——液——液三相静态萃取高效液相色谱鉴别阿胶的方法。即采用三种不同极性和不同比重的溶剂，以非极性溶剂为轻相、极性溶剂为中间相(将阿胶预先溶于该相)、弱极性溶剂为重相组成三相萃取体系，在静态下对阿胶进行萃取，相分离后制成三种极性萃取物供试液并对三种供试液分别以不同的流动相梯度，按照高效液相色谱法测定，记录色谱图和三维谱图。对黄明胶、杂皮胶采用与阿胶相同的方法进行实验。通过对三种胶在相同条件下测定的同相萃取物HPLC图谱进行对比分析。该法鉴别阿胶，检测灵敏度高，分离度、对称性、重现性好，鉴别特征明显，能够准确鉴别阿胶真伪并有效控制其内在质量。

摘要： 本发明的液相色谱用柱具有：筒状的柱主体；配置在该柱主体的洗脱液流入侧端部的流入侧过滤器、和配置在该柱主体的洗脱液流出侧端部的流出侧过滤器；以及填充在上述流入侧过滤器与上述流出侧过滤器之间的填充剂，上述流入侧过滤器具有从与上述填充剂相接触侧起依次配置的第1树脂过滤器构件和第2树脂过滤器构件这二层结构，上述第1树脂过滤器构件具有比上述第2树脂过滤器构件的压痕弹性模量低的压痕弹性模量。

摘要： 本实用新型提供了一种高效液相色谱柱及应用其的液相色谱‑质谱联用系统，所述高效液相色谱柱包括柱管和柱接头，所述柱管为螺旋形。采用本实用新型提供的高效液相色谱柱，减少了色谱柱占用的体积，进而可以采用体积较小的柱温箱，提高应用所述高效液相色谱柱的液相色谱‑质谱联用系统摆放组装的灵活性。