RNA沉默

摘要： RNA沉默技术由于其简便、高效及高特异性在各种模式和非模式生物系统中得到了广泛的应用.植物转基因技术是将植物、动物或微生物中分离到的目的基因,通过各种手段整合到植物基因组上,使其稳定遗传并赋予植物新的优良性状的生物技术.RNA沉默在植物转基因工程领域的研究十分广泛,目前已经成功研究培育出许多抗病毒、抗虫转基因植物,为农业病虫害的防控提供了新的思路和方法.本文重点综述了近年来植物转基因介导RNA沉默在抗虫与抗病毒研究方面的进展,加深人们对转基因植物抗虫与抗病毒研究的认识.

摘要： RNA沉默在植物对抗外源性病源入侵,尤其是病毒入侵的过程中具有重要作用,当外源RNA或病毒进入植物细胞时,RNA沉默被激活,从而把外源病原性RNA和病毒等对细胞的影响降到最低程度。类病毒这种非编码RNA由于其特殊的结构,为研究RNA沉默和非编码RNA在植物中的互作提供了绝佳的模型。

摘要： RNA沉默是植物中重要的抗病毒机制之一。病毒侵染后,寄主细胞中产生大量病毒来源的小干扰RNA(virus-derived small interfering RNA,vsiRNA),vsiRNA装载到寄主ARGONAUTE(AGO)蛋白中形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)靶向病毒基因组,发挥抗病毒作用。近年来,科学家们通过对拟南芥的遗传分析和多种植物vsiRNA的高通量测序,揭示了vsiRNA的起源和生物合成过程。本文综述了vsiRNA的研究现状及其在果树病毒研究中的应用,为果树病毒研究及病毒病防控提供一定的思路和借鉴。

摘要： 为探究温度和植物抗性的相互作用,本研究对本氏烟(Nicotiana benthamiana,Nb)被芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)侵染后在不同温度下的表现进行实验,通过分子研究手段测定了温度对植物抗病毒能力的影响.结果显示,与常温(23°C)处理相比,病毒侵染在高温(30°C)处理下被抑制;且高温处理下水杨酸羟化酶(NahG)转基因烟草更显著.进一步检测表明,高温能够显著提高NahG烟草中抗氧化酶的活性.在侵染后期,高温促使染病植株中茉莉酸(Jasmonic acid,JA)相关基因表达显著上调.同时,RNA沉默相关基因的表达量在高温处理下的NahG烟草中均上调.上述结果表明,高温通过刺激RNA沉默及相关抗逆激素途径提高了植株对病毒的抗性.

摘要： 植物除了依靠表面的角质层、蜡质层及细胞壁对病毒产生物理屏障外,也能以RNA介导的病毒基因沉默机制或R基因介导的防御反应等方式进行自我保护.我国第一个批准种植的、对番木瓜环斑病毒具有良好抗性的转基因作物——转基因番木瓜“华农一号”,就是利用转录后基因沉默的现象,将番木瓜最主要的病害——环斑病毒的复制酶基因转入番木瓜基因组中培育成的.

摘要： 作物病毒病害是限制我国农作物优质稳产的主要因素之一,其主要由媒介生物传播,作物普遍缺乏抗病毒病的种质资源,病毒病害防治难度大,主要依赖化学农药通过防控媒介昆虫进行控制.近年来,随着纳米生物学、分子生物学和组学研究的飞速发展,以及微观生物学技术和理念对宏观生物学的快速渗透与交叉,基因组编辑技术的快速发展,病毒—昆虫—植物三者互作机制等各方面研究取得了诸多重要进展,在寻找病毒病害流行爆发的宏观生态学现象背后的分子生物学与生物化学机制上取得了长足进步,从而促进新型病毒病害的持久防控技术的发展,提供了科学依据和潜在新方案.文章简要回顾了近年来这些新技术的主要机理,并抛砖引玉提出了对未来发展的建议和思考.建议国家和社会组织研究力量,大力加强1)探索利用微纳米递送化学药物或者核酸干扰等防治病毒病害的新方法研究;2)病害发生的多元生物体系互作机制及科学防控科技支撑能力建设;3)基因组编辑创建病毒病害绿色防控的技术等方向的探索与突破,力求在病毒病害绿色生态防控方面为农业提供强有力的科技创新和支撑能力.

摘要： RNA结合基序4(RNA-binding motif4,RBM4)是一个参与不同细胞生物学过程的RNA结合蛋白(RNA-binding pro-tein,RBP),其结构包含两个RNA识别基序和一个CCHC型锌指结构.RBM4表达于多种组织,参与前体mRNA的选择性剪接、翻译控制和RNA沉默等转录后基因调控过程.RBM4具有多种生物学功能,包括维持胚胎和性腺发育、控制昼夜节律及介导细胞分化等.RBM4的表达异常可导致多种疾病的发生,特别是与肿瘤的关系密切,但具体分子机制尚需进一步研究.文章就RBM4的相关研究进展作一综述.

摘要： 1发现和简介尽管RNA沉默现象是在秀丽隐杆线虫（Coenorhabditis elegans）中发现其机制之后才广为人知,但是这种现象在植物中的报道可以回溯到1928年发表的论文。在那篇论文中,Wingard描述了烟草（Nocitiana tabacum）植株感染烟草环斑病毒后的症状恢复情况,只有植株下部受感染叶片坏死,而上部叶片对病毒感染有免疫力,而且无症状。

摘要： 本文探讨核心岩藻糖基化(CF)修饰在大鼠腹膜透析腹膜纤维化中的作用.将SD大鼠随机分为正常对照组、腹膜纤维化(PF)组、α-1,6核心岩藻糖基转移酶干预(FUT8)组、空载体组,使用RNA沉默技术(构建FUTshRNA腺病毒后腹腔注射)干扰FUT8基因表达,分别在3周、6周留取大鼠腹膜,通过腹膜病理(HE、Masson染色)观察大鼠腹膜的形态学变化、腹膜毛细血管密度和腹膜厚度变化,评估腹膜超滤功能和葡萄糖转运功能,应用免疫荧光方法检测腹膜FUT8、CF表达和VWF(新生血管指标)的变化;通过给予伊马替尼(PDGFR抑制剂)进行干预PF，在3周、6周留取大鼠腹膜，并检测上述各项指标，观察伊马替尼干预和RNA沉默技术干扰FUT8基因表达，对大鼠PF的影响。结果表明，FUTBshRNA干预后通过阻断腹膜组织CF修饰，减轻PF，其作用优于伊马替尼治疗效果。

摘要： 本文探讨核心岩藻糖基化(CF)修饰在大鼠腹膜透析腹膜纤维化中的作用.将SD大鼠随机分为正常对照组、腹膜纤维化(PF)组、α-1,6核心岩藻糖基转移酶干预(FUT8)组、空载体组,使用RNA沉默技术(构建FUTshRNA腺病毒后腹腔注射)干扰FUT8基因表达,分别在3周、6周留取大鼠腹膜,通过腹膜病理(HE、Masson染色)观察大鼠腹膜的形态学变化、腹膜毛细血管密度和腹膜厚度变化,评估腹膜超滤功能和葡萄糖转运功能,应用免疫荧光方法检测腹膜FUT8、CF表达和VWF(新生血管指标)的变化;通过给予伊马替尼(PDGFR抑制剂)进行干预PF，在3周、6周留取大鼠腹膜，并检测上述各项指标，观察伊马替尼干预和RNA沉默技术干扰FUT8基因表达，对大鼠PF的影响。结果表明，FUTBshRNA干预后通过阻断腹膜组织CF修饰，减轻PF，其作用优于伊马替尼治疗效果。

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摘要： 水稻是我国的主要粮食作物之一,长期以来备受多种病毒侵害的重要粮食作物,病毒病害造成的水稻减产直接危害粮食安全,植物病毒素有"植物癌症"之称,在生产上缺乏有效的防治方法.

摘要： 水稻是我国的主要粮食作物之一,长期以来备受多种病毒侵害的重要粮食作物,病毒病害造成的水稻减产直接危害粮食安全,植物病毒素有"植物癌症"之称,在生产上缺乏有效的防治方法.

摘要： 本发明公开了一种免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体，是由转录shRNA的DNA序列、转录ssRNA的DNA序列与pTZU6+1载体组成的重组载体，其序列如seq.1所示。本发明的免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体，转染HepG2.2.15细胞，经Northern blot鉴定能够在胞内表达；转染HepG2.2.15细胞，24h后检测，发现能够下调HBV的表达；转染HepG2.2.15细胞，24h后检测，发现能够下调上清中HBV抗原含量和胞内抗原含量；由此可见，本发明的免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体能够作为抗HBV的药物应用。

摘要： 本发明公开了一种免疫刺激RNA和肝癌靶基因Pim-3沉默RNA的双表达载体，是由转录shRNA的DNA序列、转录ssRNA的DNA序列与pTZU6+1载体组成的重组载体，其序列如seq.12所示。本发明的免疫刺激RNA和肝癌靶基因Pim-3沉默RNA的双表达载体，转染小鼠肝癌Hepa1-6细胞，24h后检测，通过Sem-qPCR和Western-blot检测发现能够下调Hepa1-6细胞中Pim-3的表达；转染Hepa1-6细胞，24h后检测，发现能够明显增加Hepa1-6细胞的凋亡；转染Hepa1-6细胞，能明显上调Hepa1-6细胞上清中I型干扰素(IFN-α和IFN-β)的分泌，由此可见，本发明的免疫刺激RNA和肝癌靶基因Pim-3沉默RNA的双表达载体有可能成为治疗肝癌的新的生物学手段，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明属于分子生物学领域，公开了一种沉默非编码癌基因H19 RNA表达的单链反义RNA及其效果检测方法。所述单链反义RNA是以H19 RNA的第五外显子的部分序列作为靶位点，设计并合成的23nt, 27nt, 31nt, 35nt,39nt单链反义RNA，其5’和3’均为羟基,不带有其它化学修饰。采用脂质体介导法转染人宫颈癌Hela细胞和人前列腺癌PC3细胞，sasRNA能够持久、高效、特异地抑制H19 RNA的表达。流式细胞检测sasRNA介导的H19 RNA表达水平的下调导致细胞周期阻滞于G2/M期。本发明的单链反义RNA效果明显，检测方法操作简便，成本低廉，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种免疫刺激RNA和肝癌靶基因Pim-3沉默RNA的双表达载体，是由转录shRNA的DNA序列、转录ssRNA的DNA序列与pTZU6+1载体组成的重组载体，其序列如seq.12所示。本发明的免疫刺激RNA和肝癌靶基因Pim-3沉默RNA的双表达载体，转染小鼠肝癌Hepa1-6细胞，24h后检测，通过Sem-qPCR和Western-blot检测发现能够下调Hepa1-6细胞中Pim-3的表达；转染Hepa1-6细胞，24h后检测，发现能够明显增加Hepa1-6细胞的凋亡；转染Hepa1-6细胞，能明显上调Hepa1-6细胞上清中I型干扰素(IFN-α和IFN-β)的分泌，由此可见，本发明的免疫刺激RNA和肝癌靶基因Pim-3沉默RNA的双表达载体有可能成为治疗肝癌的新的生物学手段，具有较好的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体，是由转录shRNA的DNA序列、转录ssRNA的DNA序列与pTZU6+1载体组成的重组载体，其序列如seq.1所示。本发明的免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体，转染HepG2.2.15细胞，经Northern blot鉴定能够在胞内表达；转染HepG2.2.15细胞，24h后检测，发现能够下调HBV的表达；转染HepG2.2.15细胞，24h后检测，发现能够下调上清中HBV抗原含量和胞内抗原含量；由此可见，本发明的免疫刺激RNA和HBV靶基因沉默RNA的双表达载体能够作为抗HBV的药物应用。

摘要： 本发明属于分子生物学领域，公开了一种沉默非编码癌基因H19RNA表达的单链反义RNA及其效果检测方法。所述单链反义RNA是以H19RNA的第五外显子的部分序列作为靶位点，设计并合成的23nt，27nt，31nt，35nt，39nt单链反义RNA，其5’和3’均为羟基，不带有其它化学修饰。采用脂质体介导法转染人宫颈癌Hela细胞和人前列腺癌PC3细胞，sasRNA能够持久、高效、特异地抑制H19RNA的表达。流式细胞检测sasRNA介导的H19RNA表达水平的下调导致细胞周期阻滞于G2/M期。本发明的单链反义RNA效果明显，检测方法操作简便，成本低廉，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种植物抗病毒RNA沉默相关转录因子筛选方法及应用，以植物矮牵牛作为研究对象，采用转录组测序和VIGS相结合的技术，首先构建TRV病毒侵染的差异表达基因数据库，从中选择极显著差异表达转录因子作为候选基因；分别构建至TRV‑GFP‑PhPDS载体，利用双报告基因分别监测病毒积累与RNA沉默过程；接种矮牵牛后，以绿色荧光和光漂白表型作为筛选依据，在上调表达转录因子中，导致绿色荧光增强、光漂白表型受到抑制的基因认定为正调控转录因子，在下调表达转录因子中，造成绿色荧光减弱、光漂白表型受到促进的基因认定为负调控转录因子。本发明为研究植物抗病毒RNA沉默转录调控机理提供了一种简单、快速、有效的基因筛选方法。

摘要： 本发明公开了一种沉默长非编码RNA表达的方法及其应用。本发明提供了用于在真核细胞基因组中沉默长非编码RNA表达的成对sgRNA，其一靶向所述长链非编码RNA任一内含子的BPS位点上游的序列，另一靶向所述长链非编码RNA同一内含子的3’SS位点下游的序列。本发明克服了现有技术不得不采用的切除启动子区域或插入polyA序列或切除全长基因以沉默长非编码RNA表达带来的技术难度和对附近基因的干扰。

摘要： 本发明公开了一种可高效抑制辣椒疫霉纤维素合酶3基因表达的双链RNA分子，属于农业生物技术领域。本发明双链RNA分子由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核酸序列组成。本发明还公开了该双链RNA分子在防治辣椒疫霉引起的植物病害上的应用。本发明双链RNA分子可以通过直接处理辣椒疫霉或者喷施于植物从而抑制辣椒疫霉的侵染。同时，本发明涉及的双链RNA对辣椒疫霉的生长发育必需基因特异性强，不存在抗药性问题，将其用于制备生物农药可以为防治辣椒疫霉引起的相关病害提供了一种有效途径。

摘要： 本发明公开了一种可高效抑制辣椒疫霉氧化固醇结合蛋白1基因表达的双链RNA分子，属于农业生物技术领域。本发明双链RNA分子由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核酸序列组成。本发明还公开了该双链RNA分子在防治辣椒疫霉引起的植物病害上的应用。本发明双链RNA分子可以通过直接处理辣椒疫霉或者喷施于植物从而抑制辣椒疫霉的侵染。同时，本发明涉及的双链RNA对辣椒疫霉的生长发育必需基因特异性强，不存在抗药性问题，将其用于制备生物农药可以为防治辣椒疫霉引起的相关病害提供了一种有效途径。