外源基因

摘要： 外源基因在哺乳动物细胞的整合位点会影响宿主细胞的生殖发育,在基因功能研究中常常会先确定其整合的染色体位置.为研究外源基因在小鼠精原细胞中的整合位点,以转入Cas9基因的小鼠精原细胞为研究材料,通过TAIL-PCR克隆Cas9整合到基因组的旁侧序列,结合T载体连接和碱基测序技术在有限的基因组中检测Cas9整合到小鼠基因组的具体位置.结果表明,转入外源基因的小鼠精原细胞折光性好,生长良好,PCR扩增发现Cas9基因成功转入到小鼠精原细胞的基因组上;结合上游特异性引物和简并引物可扩增出2条特异性条带,测序发现均为载体序列;结合下游特异性引物和简并引物可扩增出4条特异性条带,其中有2条扩增片段属于载体序列,2条扩增片段为小鼠基因组12号染色体中的序列.这表明外源基因整合到小鼠精原细胞12号染色体上.

摘要： 本文分析如何在食品检测工程中应用转基因食品检测技术,结合现有研究文献资料,阐述目前我国对于转基因食品的检测技术及方法,并分析新时代下转基因食品检测技术的创新应用,展望未来发展趋势,旨在为食品安全提供技术保障。随着现代科学技术的进步,转基因食品成为餐桌上常见的产品,它是将外源基因在生物技术的指导下,转移到其他物种,以改变生物遗传特性和性状,促使食品的营养质量满足人类的需求。

摘要： 细胞转染技术是分析细胞内基因及基因产物功能的重要工具,目前已建立了许多细胞稳定转染的方法,这些技术被广泛应用于农业、医药和生物制药等领域中,且在基因治疗、疫苗接种等方面上,这些技术也为疾病的基础研究和临床治疗提供了有力的保障。本文将按照细胞转染方法的不同,对外源基因转入受体细胞的转染技术做一个简要概述。

摘要： 1月19日,颖泰生物发布了关于控股子公司科稷达隆(北京)生物技术有限公司(简称“科稷达隆”)农业转基因生物安全评价环境释放获批的公告。科稷达隆的转外源基因抗虫耐除草剂玉米、转外源基因耐除草剂棉花、突变水稻基因耐除草剂水稻三项生物技术产品近日通过农业农村部的农业转基因生物安全审批,获得环境释放的批文。

摘要： 伪狂犬病病毒(PRV)属于疱疹病毒,含有多个复制非必需区,可以通过基因缺失研制弱毒疫苗,也可以通过异源基因的插入或替换构建活载体疫苗.目前构建重组PRV的技术方法包括传统同源重组技术、细菌人工染色体技术(BAC)、CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术.2011以来,一种毒力更强的变异株在我国暴发流行,应用变异株构建的基因缺失活疫苗(gE/gI、gE/TK或者TK/gE/gI)能对变异株提供完全的保护,为PRV在我国的净化和PRV变异株活载体疫苗的构建奠定了基础.研究发现以PRV基因缺失株为栽体,与其他病原的抗原编码基因共同构建重组病毒,能快速地诱导细胞免疫和体液免疫,达到一针多防的效果,应用前景广阔.适合的插入位点选择、外源基因高效表达和克服PRV母源抗体干扰等是提高活载体效果的关键.

摘要： [目的]建立一种精准、高效的草甘膦抗性基因G2-EPSPS和GAT的检测方法,为转基因大豆新品系ZH10-6的广泛应用提供技术支持.[方法]根据抗草甘膦大豆ZH10-6和受体中黄10的分子特征,设计大豆内源参考基因(Actin)、外源基因(G2-EPSPS和GAT)以及侧翼序列(G2EPSPS-2/ZH10P2和ZH10P1/GAT-2)的特异性引物,通过PCR扩增测试引物的特异性和适用性.调整引物配比、DNA模板量、dNTP含量、退火温度和延伸温度等,筛选该多重PCR体系的最适扩增条件.将转基因大豆ZH10-6和受体中黄1 0的基因组DNA按质量比混合,制备成100％、50％、10％、5％、1％、0.5％、0.1％和0的DNA样品,进行灵敏度检测.运用建立的多重PCR体系检测转基因大豆ZH10-6不同地理来源的11份衍生品系,并根据鉴定结果对该体系的应用性进行评价.[结果]建立的多重PCR方法中引物GmActin11 F/R、G2-EPSPS F/R、GAT F/R、ZH10P1/GAT和G2/ZH10P2可分别扩增出转基因大豆ZH10-6大小为126、4 30、338、81 0和1 626 bp的特异性目标条带.用该方法扩增受体中黄1 0时,除了GmActin11 F/R可以扩增出126 bp目标条带,侧翼序列上游引物ZH10P1和下游引物ZH10P2也可以扩增出632 bp目标条带.多重PCR最适扩增体系为DNA模板量100 ng、5U·μL-1 Ex Taq 0.2μL、10×ExTaq Buffer 2.5 μL、2.5 mmol·L-1 dNTP 2μL、10μmol·L-1引物(GmActinll F/R 0.4 μL、G2-EPSPS F/R 0.6μL、GAT F/R 0.4 μL、ZH10P1/GAT 0.6μL和G2/ZH10P2 0.6 μL),ddH2O补足25 μL.多重PCR扩增最适程序为95°C 5 min;95°C 30 s,60°C 30 s,68°C 1 min 20 s,35个循环;72°C 12 min.该多重PCR体系灵敏度为0.5％,符合欧盟有关转基因产品标识的要求.该多重PCR方法特异性很强,可以成功检测受体中黄10、转基因大豆ZH10-6及ZH10-6不同地理来源的11个衍生品系.[结论]建立的转EPSPS/GAT大豆多重PCR检测体系具有高通量、特异性强、操作简便和应用广泛的优点,并且能够快速、准确地检测转基因大豆ZH10-6及其衍生品系.

摘要： 成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)在多数细菌和古生菌中广泛存在,该遗传结构可以有效防御外源DNA(如质粒、噬菌体等)的侵袭,从而降低外源基因的水平转移。本文的研究对象为志贺氏菌属中的鲍氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌以及福氏志贺氏菌等40株菌。研究不同志贺氏菌种中CRISPR位点的结构差异,其与可移动质粒之间的关联。采用生物信息学的方法比较间隔序列与插入序列的同源性,判断CRISPR位点与RNA二级结构稳定性的关系。结果:40株志贺氏菌中均含CRISPR结构,共有241个CRISPR位点和6个确定位点。本研究发现cas3基因和重复序列均不可作为这4类细菌的分类依据。结论:CRISPR位点的数量和间隔区数量之间在统计学上无关。耐药基因、间隔序列整合子等移动遗传原件具有一定的同源性,表明志贺氏菌在进化过程中不断受到外源基因的侵袭。

摘要： 转基因植物的遗传稳定性分析是基因工程的重要环节.该研究以转基因白桦的控制授粉杂交、正反交以及自由授粉的半同胞子代家系为研究对象,测定各家系间的种子千粒重、发芽率、发芽势以及活力指数.结果表明:各家系间种子千粒重及种子活力等指标差异极显著,千粒重与活力指数呈极显著正相关.转基因与非转基因株系正反交群体的外源基因检测表明:外源基因通过雌配子的传递效率高于雄配子,雌、雄配子外源基因传递效率分别在60.00％、30.00％左右.杂交子代家系外源基因检测结果表明:4个转基因株系有1个插入位点;1个株系有2个插入位点.卡方检验表明:外源基因插入位点为一个的转基因株系,配子类型符合1:1的分离规律;外源基因插入位点为两个的转基因株系,其配子类型符合3:1的分离规律.

摘要： 本研究通过基因组步移和TAIL-PCR方法对转基因抗虫水稻T1Ab-6的外源基因插入整合结构进行了验证和完善，并建立了其转化体特异性的定性和定量PCR检测方法。旨在为转基因生物的检测和监管提供技术方法。以转基因水稻T1Ab-6转化体的外源基因插入位点基因组序列和外源插入片段/基因组连接区序列为靶标，建立了转基因水稻TlAb-6转化体特异性定性检测方法和实时荧光定量PCR检测方法。建立的转化体特异性定性PCR检测方法的两条引物分别位于TlAb-6外源基因插入位点一侧基因组和外源插入片段上，对建立的方法进行体系优化、重复性和灵敏度测试，优化后的检测体系灵敏度达到0.1ng并具有良好的检测重复性。结果表明建立的转化体特异性定性检测方法能科学有效检测转基因水稻Tl Ab-6。

摘要： 为了解和阐述酵母表达系统的研究动态与现状,笔者基于对国内的外文献检索,搜集了酵母表达系统的近期研究动态,概括酵母表达系统的主要种类及其优缺点,并综述了影响酵母表达外源蛋白的因素,酵母表达系统是研究真核蛋白质表达和分析的有力工具，拥有转录后加工修饰功能，适合于稳定表达有功能的外源蛋白质。与昆虫表达系统和哺乳动物表达系统相比，酵母表达系统操作简便，成本低廉，可大规模进行发酵，是最理想的重组真核蛋白质生产制备用工具。尽管人们利用酵母表达系统制备外源蛋白质取得了成功，但是实践中仍然发现大量的外源基因不能在酵母表达系统中表达，具体原因目前还没有明确。另外，还没有彻底克服酵母表达系统制备外源蛋白质时发生的不均一现象。随着酵母基因组测序的完成，人们对酵母的基因表达调控机制和对表达产物的加工修饰及分泌能力将更加清楚，相信不久的将来，这些问题都将得到解决。

摘要： 以玉米内源基因ZEIN及CaMV35S外源基因为检测目的基因,以环介导等温扩增(LAMP)技术为基础,建立了对转基因玉米的快速检测方法.以转基因玉米标准品为阳性对照、有机玉米为阴性对照进行结果验证,且验证结果通过实时荧光及荧光染料显色法直接肉眼直观判断是否为转基因玉米.结果显示:内源基因ZEIN实时荧光及荧光染料显色的检测结果与预测结果一致,因此配制的内源基因ZEIN反应体系可作为样品提取效果的质控;外源基因CaMV35S实时荧光及荧光染料显色的检测结果与预测结果一致,因此该体系适用于外源基因CaMV35S的检测.对于检测样品,两种方法的判定结果均为阳性,即检测玉米样品为转基因玉米.

摘要： 通过分析云南高海拔粳稻区水稻生产主要障碍因素,介绍了云南省大理州农科院粮作所高海拔粳稻新品种选育成效,探讨了云南省高海拔粳稻新品种选育方法.育种目标必须紧密结合生产需求超前确定，紧扣“优质、高产、多抗、广适”这一主题，着力解决生产中的突出问题，同时还需将良好株型、生态适应性、熟色熟相等作为育种目标的主要因子纳入考虑范围。在制定正确育种目标的前提下，只有加快稻种资源的引进评价，加强有利外源基因导入，充分利用外引优质资源，才能扎实解决云南省高海拔粳稻稻米要白大，要白粒率高，整精米率低，品质较差，稻瘟病抗性弱等突出问题，促进云南高海拔粳稻育种工作取得新突破。育种目标确定之后，多学科相互联合，开展协作攻关，科学选择正确的育种途径和方法是育种成败的重要环节。育种和品种示范推广是一项复杂的系统工程，相互协作才能做强做大，协作网络的建设十分重要。

摘要： 本研究构建了玉米UBI启动子驱动Bt CryIA(c)基因的高效植物表达载体pUBTC,通过农杆菌介导法导入甘蔗愈伤组织,经过除草剂PPT三次连续筛选,获得89株抗性植株,经过PCR扩增检测,得到71株阳性植株,对其中7株进行RT-PCR检测,证明外源基因已经成功的整合到甘蔗基因组中,并得到有效的表达.

摘要： 禽类生殖系统和胚胎发育的特殊性,使禽类转基因技术的研究落后于哺乳动物.慢病毒载体作为制备转基因家禽基因转移的工具已被证明具有高效性和稳定整合性.本研究用慢病毒载体,采用赤道开窗法将表达GFP重组慢病毒注射入新生种蛋胚盘下腔制备转基因鸡,通过PCR、RT-PCR、Southern、Western方法鉴定.鉴定阳性的转基因鸡经Tail-PCR分析外源基因的整合位点.转基因阳性鸡(TG)与野生型鸡(WT)交配繁育F1代,荧光显微镜下观察F1代TG鸡组织GFP的表达,F1代阳性鸡与WT鸡交配繁育F2代.成功获得表达GFP的转基因鸡,整合位点分析表明GFP整合到鸡基因组4号染色体.繁育至F2代,在血液与组织中能够检测到外源基因,表明外源基因能稳定遗传,并建立微核心群单元.

摘要： 构建含有组织特异性启动子的载体,能够实现使外源基因在特定的组织中特异表达;将具有相同或相似功能的转录调控元件结合起来应用,可增强天然启动子的活性.本研究采用肌肉特异性表达基因myf61422bp的启动子(由本课题组保存)序列替换pEGFP-N1的CMV启动子,MyoD CDS序列作为外源基因,构建肌肉特异性表达载体,并且在myf6启动子之前引入SV40增强子,以提高组织特异性表达,在细胞水平验证外源基因的表达,然后通过显微注射法制备转基因小鼠,为猪myf6基因启动子驱动外源基因的组织特异性表达及MyoD基因对肌肉生长发育机制提供一个活体分析研究的基础.

摘要： 卵清蛋白(OV)启动子是最强的组织特异性启动子之一,筛选高效特异性强的OV启动子是输卵管生物反应器制备的关键.本文以海兰白鸡基因组为模板,扩增了3.0kb、2.7kb的OV启动子区,克隆到带有EmGFP报告基因的pcDNA6.2载体上,构成表达载体pOV3.0k-GFP和pOV2.7k-GFP;将CMV的增强子成分插入到2.7kb OV序列上游,构建了表达载体pCOV2.7k-GFP;通过脂质体转染CHO细胞,均检测到GFP表达,表明克隆的OV启动子序列能够有效地驱动外源基因的表达,为输卵管生物反应器的研究奠定了基础.

摘要： 核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接导入动物体细胞内,并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防或治疗疾病目的的一类新型疫苗.核酸疫苗从出现至今仅有二十多年历史,研究表明核酸疫苗不仅具有良好的免疫原性与安全性,且由于核酸更易于修饰与改造,核酸疫苗较以往蛋白疫苗具有更大的灵活性.在实际生产中,核酸疫苗制备、纯化工艺简单,生产周期更短,生产成本更低,且易于制成多价苗.有案可查的动物用DNA疫苗包括:马西尼罗病毒疫苗、鱼传染性造血坏死病毒疫苗、狗黑色素瘤疫苗和猪生长素释放因子基因治疗疫苗等;人用HIV DNA疫苗、肿瘤RNA疫苗的研究也显示出一定的保护效果.核酸疫苗极有可能成为下一个成功应用于人类的新型疫苗.本文对核酸疫苗的研究进展进行综述.

摘要： 本发明提供了一种鉴定转基因植物或者转基因玉米双抗12‑5外源基因插入染色体位置的方法及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的鉴定转基因植物外源基因插入染色体位置的方法，通过筛选与阴性转基因个体连锁的分子标记引物，并根据分子标记引物所在的位置确定外源基因的位置，能够实现对基因组相对复杂的物种如玉米，大豆等作物的外源基因插入位置的快速准确识别。此外，本发明还提供了该方法在转基因玉米双抗12‑5中的应用，准确识别了双抗12‑5中，外源基因插入染色体的位置。另外，本发明还提供了上述方法在转基因作物育种，分子特征安全性评价以及转基因产品溯源等方面中的应用，具有良好的应用前景和可观的市场价值。

摘要： 本发明公开了一种用标记基因预测外源基因表达量及筛选转基因生物的方法。采用分子生物学技术构建包含有标记基因和外源基因两个相邻且转录方向相同的表达框的转基因表达质粒；采用显微注射法将转基因质粒与辅助质粒一起导入到生物的基因组内，培育成外源基因能够稳定遗传和表达的转基因生物；根据转基因生物中标记基因表达量的信息预测外源基因表达量，并筛选获得该外源基因表达量对应的生物个体或品种。本发明可简单、快捷、省力地从大量的转基因生物中筛选出高效表达外源基因的转基因生物个体或品种，为建立高效的生物反应器提供了理想的筛选手段。

摘要： 适合转基因康乃馨外源基因检测的内标准基因，本发明依据内标准基因的种内非特异性、种间特异性、单拷贝或低拷贝数三个标准，通过生物信息学分析和分子生物学实验验证，在康乃馨中寻找到了符合上述标准ANS基因作为转基因康乃馨定性、定量PCR检测的内标准基因。定性PCR引物为ANS-F1/ANS-R1，定量PCR引物为ANS-F2/ANS-R2，定量PCR探针为ANS-probe。ANS基因作为转基因康乃馨定性、定量PCR检测及拷贝数分析的内标准基因。

摘要： 本发明公开一种花生球蛋白Ara 3基因启动子在驱动外源基因在转基因植物种子中特异表达的应用，该启动子为花生球蛋白基因Ara 3上游第1位～第634位共长634bp的序列。本发明的启动子可与外源基因连接插入表达载体中构建重组表达载体，转化宿主细胞或宿主组织及其后代，实现植物的品质改良或生产外源蛋白。本发明的启动子把外源基因的表达局限在种子或胚组织中，避免了外源蛋白在成熟的根茎等器官中的积累所造成的对植物生长的影响和能量物质的浪费。本发明的启动子诱导外源基因在种子中特异表达，且表达产物被贮存在成熟种子中，有利于表达产物的高水平累积，且可在常规条件下长期保存，也有利于表达产物的纯化回收。

摘要： 本发明涉及适合于转基因棉花、番茄、水稻、油菜外源基因定性、定量PCR检测及拷贝数分析的内标准基因及其应用。本发明依据内标准基因的种内非特异性、种间特异性、单拷贝或低拷贝数，通过生物信息学分析和分子生物学实验验证，在棉花、番茄、水稻和油菜中寻找到4个内标准基因，分别为棉花的SAD I、番茄的LAT52、水稻的SPS和油菜的HMG I/Y基因。应用PCR方法进行了这些内标准基因的检测灵敏度和精确度实验验证。同时依据这些内标准基因分别建立了转基因棉花、番茄、水稻和油菜外源基因的定性、定量PCR检测系统；根据内标准基因的恒定拷贝数，建立转基因水稻、油菜、棉花、番茄的外源基因拷贝数的荧光定量PCR检测分析平台。

摘要： 本发明提供了一种特异性剔除胚乳中外源基因的重组载体及其在构建无外源基因的转基因玉米中的应用，属于玉米生物技术育种技术领域。本发明以pEGAD载体为骨架载体，Cre/loxP系统中两个特异性识别位点loxP分别位于LB和RB，筛选标记表达框与Cre酶表达框和目标基因表达框插入在两个loxP位点之间；目标基因表达框为植物基因启动子驱动的靶基因；筛选标记表达框为标记蛋白基因和除草剂抗性基因形成的融合基因；Cre酶表达框为胚乳特异性表达启动子驱动的重组酶基因Cre。以玉米胚性愈伤组织为受体材料，构建一种胚乳中无外源基因的转基因玉米。利用重组表达载体实现了转基因成分在胚乳中精确剔除的转基因。

摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了基因编辑介导的外源基因敲入到棉花基因组的方法，包括以下步骤：1)菜豆黄矮病毒的复制子元件BeSRL和ULIR目的序列的获得：查阅文献DNA Replicons for Plant Genome Engineering从中获取菜豆黄矮病毒的复制子元件BeSRL和ULIR目的序列，然后经过(GenScript)合成；2)转化载体BeYDV‑Cas9‑KI的构建：利用限制性内切酶Sbf I酶切pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体，连接黄矮病毒的复制子元件BeSRL，将pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ进行Sbf I酶切。该基因编辑介导的外源基因敲入到棉花基因组的方法及载体，在棉花中首次成功建立了适应于棉花基因组特性的基因敲入编辑系统，该系统能够将外源基因定点插入到棉花基因组中，它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段，且在棉花中的敲入效率达1.0％。

摘要： 本发明提供了一种鉴定转基因植物或者转基因玉米双抗12‑5外源基因插入染色体位置的方法及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供的鉴定转基因植物外源基因插入染色体位置的方法，通过筛选与阴性转基因个体连锁的分子标记引物，并根据分子标记引物所在的位置确定外源基因的位置，能够实现对基因组相对复杂的物种如玉米，大豆等作物的外源基因插入位置的快速准确识别。此外，本发明还提供了该方法在转基因玉米双抗12‑5中的应用，准确识别了双抗12‑5中，外源基因插入染色体的位置。另外，本发明还提供了上述方法在转基因作物育种，分子特征安全性评价以及转基因产品溯源等方面中的应用，具有良好的应用前景和可观的市场价值。

摘要： 本发明公开了一种用标记基因预测外源基因表达量及筛选转基因生物的方法。采用分子生物学技术构建包含有标记基因和外源基因两个相邻且转录方向相同的表达框的转基因表达质粒；采用显微注射法将转基因质粒与辅助质粒一起导入到生物的基因组内，培育成外源基因能够稳定遗传和表达的转基因生物；根据转基因生物中标记基因表达量的信息预测外源基因表达量，并筛选获得该外源基因表达量对应的生物个体或品种。本发明可简单、快捷、省力地从大量的转基因生物中筛选出高效表达外源基因的转基因生物个体或品种，为建立高效的生物反应器提供了理想的筛选手段。

摘要： 适合转基因康乃馨外源基因检测的内标准基因，本发明依据内标准基因的种内非特异性、种间特异性、单拷贝或低拷贝数三个标准，通过生物信息学分析和分子生物学实验验证，在康乃馨中寻找到了符合上述标准ANS基因作为转基因康乃馨定性、定量PCR检测的内标准基因。定性PCR引物为ANS-F1/ANS-R1，定量PCR引物为ANS-F2/ANS-R2，定量PCR探针为ANS-probe。ANS基因作为转基因康乃馨定性、定量PCR检测及拷贝数分析的内标准基因。