晶体蛋白

摘要： 热休克蛋白(heat shock proteins:HSPs)为动植物响应外界胁迫产生的一类蛋白质,能有效改善机体对外界胁迫的适应能力.本研究基于先前获得的低盐胁迫金乌贼(Sepia esculenta)高通量转录组数据,对与低盐胁迫密切相关的热休克蛋白(热休克蛋白家族和晶体蛋白(crystallin)家族)基因进行挖掘;鉴于实时定量内参基因筛选,同时挖掘出金乌贼肌动蛋白(actin)家族系列基因;然后,对肌动蛋白、热休克蛋白和晶体蛋白家族基因及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析并探究低盐胁迫对金乌贼热休克蛋白和晶体蛋白家族基因表达的影响.金乌贼肌动蛋白家族基因包括actin、内收肌actin、胞质actin、actin 1、actinⅡ和βactin 6个成员,热休克蛋白家族基因包括HSPβ、小HSP、HSP 10、HSP 16、HSP 30、HSP 60、HSP 70、HSP 75、HSP 90α、HSP 90和HSP 90β11个成员,金乌贼晶体蛋白家族基因包括S crystallin、S crystallin 6、S crystallin SL18和O crystallin 4个成员.氨基酸序列比对发现,肌动蛋白家族6个基因共享甘氨酸、精氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、苏氨酸和天冬氨酸等13个位点,晶体蛋白家族4个基因共享苯丙氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸、酪氨酸、丝氨酸和半胱氨酸等17个位点,而热休克蛋白家族HSPβ、小HSP、HSP 10、HSP 16和HSP 305个基因共享1个甘氨酸位点和4个保守位点,HSP 60、HSP 70、HSP 75、HSP 90α、HSP 90和HSP 90β6个基因仅共享2个保守位点.实时定量结果发现,低盐胁迫可以明显提高金乌贼HSPβ、HSP 16、HSP 30和HSP 70的基因表达,而明显降低晶体蛋白家族基因的表达,表明在低盐胁迫条件下,金乌贼热休克蛋白家族基因通过自身的差异表达来提高机体对外界胁迫的适应防御能力.

摘要： 目的 检测一汉族先天性核型白内障家系的基因突变位点.方法 收集家系内患者及眼部表型正常成员外周静脉血标本并提取家系成员基因组DNA样本.采用白内障致病基因靶向捕获与高通量DNA测序技术在81个先天性白内障已定制候选致病基因panel中筛选可能致病突变.采用PCR技术扩增所有家系成员可疑突变基因外显子片段,并联合Sanger测序验证家系患者突变位点是否为该家系致病突变.结果 与NCBI、HGMD专业版数据库比对,验证突变位点是否为致病突变或全新突变.结果 临床表型分析表明,家系内所有患者在三岁之前均开始出现不同程度的视力下降,均呈现核型白内障表现.靶向捕获联合高通量测序检测到所有家系内患者均携带CRYAB基因的杂合错义突变(c.59C>G,p.P20R),即1号外显子第59位核苷酸碱基由胞嘧啶突变为鸟嘌呤,此突变导致第20位氨基酸残基由脯氨酸变为精氨酸,而家系内正常人不携带该突变.结论 CRYAB基因杂合错义突变c.59C>G可导致先天性核型白内障的发生.

摘要： 转Cry1Ab/Cry1Ac基因稻谷(华恢1号)可以用于储粮害虫印度谷螟的防治,前期研究表明在其短期取食含有Bt毒蛋白的稻谷后,其体内三种主要的抗氧化酶过氧化物酶(peroxidase,POD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力会发生明显变化.聚焦储藏期间的特性开展研究,结果发现,转基因稻谷稻壳和糙米中Bt蛋白含量分别为5.534μg/g和1.003μg/g,在25°C下经过270 d,其降解率分别为67.3％和27.7％.利用酶活力测定方法研究长期取食转Bt稻谷所制大米粉对印度谷螟幼虫体内上述三种酶活性的影响,结果表明,在含有不同比例的转Bt大米粉饲喂印度谷螟12 d及连续饲养5个月后,其体内的SOD活力均受到了显著抑制.但是对于POD而言,在长期取食不同含量的转Bt大米粉后,印度谷螟体内POD活性与对照相比产生了显著提高.同时,在印度谷螟幼虫长期取食转Bt大米粉后,其体内CAT活力随着含Bt大米粉比例的提高而显著增强.另外,使用转基因大米粉连续饲养5个月的印度谷螟种群体内的保护酶活力同喂食12d后的酶活变化趋势一致.结果说明在长期取食含有Bt毒素的大米粉后,印度谷螟幼虫体内三种保护酶的增降趋势存在差异,这表明印度谷螟体内三种保护酶可能存在不同的调节机制来应对Bt毒素的胁迫,这对于转Bt作物的毒理和相关抗性机理研究提供了理论依据.

摘要： 我国科学家发现棉铃虫对Bt作物的抗性新机制据中国农科院植保所通报,该所棉花害虫研究组与华中师范大学等单位合作,发现了棉铃虫对Bt作物的抗性新机制。据介绍,苏云金芽孢杆菌(Bt)代谢过程中产生的晶体蛋白对多种害虫具有毒杀作用,利用转基因技术培育的Bt棉花、Bt玉米和Bt大豆已在全球范围内商业化种植。研究人员发现,棉铃虫Bt毒素受体基因ABCC2的变异可以导致其对Bt作物产生高水平的抗性,但这种变异显著增加了抗性棉铃虫

摘要： 抗癌晶体蛋白（ parasporins，PS）是由没有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌产生的一种晶体蛋白，在经过蛋白酶酶解后产生的活性多肽对来自人类不同组织的癌细胞具有特异性细胞毒性，而对正常细胞具有较低毒性或不具有毒性，是一种具有很大潜力的微生物抗癌蛋白。就最近几年苏云金芽胞杆菌中已发现的抗癌晶体蛋白的种类、结构特征、细胞活性谱和杀虫机制进行简要概述。%Parasporin( PS)is a kind of crystal proteins synthesized by Bacillus thuringiensis that has no insecticidal activity,after digested by protease the zymolytically active polypeptide possessed specific cytotoxicity against human cancer cells from diferent tissues,however,having lower or non toxicity against normal cells;it is a kind of microbial anti-cancer protein with great potency. Category of the PSs that have been discovered in B. thuringiensis in recent years,their structural features,cytoactive spectrum,and insectcidal mechanism were briefly summarized in this paper.

摘要： 来自常见的土壤细菌苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白是一种作用于毛孔的杀虫毒素。

摘要： 目的 探讨发现新的抗肿瘤天然物质,拓展寻找抗肿瘤药物的新研究思路及研究领域.方法 采用改良方法提纯球形芽孢杆菌晶体蛋白,采用MTT法筛选检测该晶体蛋白对肿瘤细胞的抑制作用.结果 球形芽孢杆菌晶体蛋白对肿瘤肝癌细胞7721及乳腺癌细胞MCF7的生长抑制率分别为91％和93％,并显示一定的浓度依赖性.结论 首次检测并发现球形芽孢杆菌晶体蛋白具有一定的体外抗肿瘤性.

摘要： γ-氨基丁酸旁路(GABA shunt)普遍存在于原核和真核生物体中,对于动物、植物和微生物具有不同的生理功能.苏云金芽胞杆菌gab基因簇中gabT和gabD基因所编码的γ-氨基丁酸转氨酶和琥珀酸半醛脱氢酶参与GABA shunt.在前期研究获得的苏云金芽胞杆菌HD-73菌株gabT、gabR(gab基因簇中的调控基因)和gabD基因缺失突变菌株的基础上,从菌株生长、芽胞产量和晶体蛋白产量等方面研究GABA shunt阻断对Bt芽胞和晶体形成的影响.结果表明,GABA shunt阻断对芽胞产量有一定影响,但对Bt生长和晶体蛋白产量无明显影响

摘要： Bt L-7601是一株能自然产生黑色素抗紫外线的野生菌株.其黑色素与Sigma公司标准黑色素(Melanin)的性质相似.细胞经紫外线照射后存活率是不产黑色素的Bt菌株的17倍.凡是不加黑色素的样品,经紫外线照射后,晶体蛋白极易被酶降解,发酵液的杀虫活力明显降低.证明Bt L-7601菌株所产的黑色素对杀虫晶体蛋白有很好的紫外保护作用.

摘要： 本课题通过珍青明目片对RC大鼠模型的晶体蛋白及其影响因子等的影响,探讨药物对RC的防治效应,阐明药物阻断RC发生发展并提升疗效的科学内涵.

摘要： 本研究采用了两种液体培养基,两种培养条件对三种苏云金芽孢杆菌进行培养,镜检观察当90％以上的芽孢脱落时处理菌体,经碱液裂解后比较等电点沉淀和高速离心方法提取Bt蛋白的收率和纯度.实验得出三种菌体在1/2NB培养基,28°C,200r/min培养3d,蛋白产量均较高,其中HD-1型菌株高达107.48mg/L.高速离心得到的蛋白收率低于等电点沉淀法,但其纯度较高,满足作为抗原的条件,为ELISA检测转基因食品中Bt蛋白奠定了基础.

摘要： 目的：运用蛋白质组技术鉴定和分析正常人晶状体纤维的蛋白质，建立正常人晶状体纤维的蛋白质组数据库和表达谱，为研究晶状体疾病提供基础。rn 方法：晶状体纤维总蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离、胶内酶切后的多肽利用液相色谱串联质谱的方法，对正常人晶状体中的全部纤维蛋白质进行鉴定。根据高丰度离子的匹配率、匹配离子的连续性和随机性得分，通过SEQUEST和AMASS软件筛选结果。同一样品重复做三次实验。rn 结果：具有可信度在98％以上、有2个或2个以上合格谱图、不少于两次实验均鉴定的蛋白质作为阳性结果，共60个蛋白质，有22个晶状体蛋白质在以前的晶状体蛋白质组研究中有过鉴定。rn 结论：实验结果为晶状体纤维的蛋白质随年龄而变化以及白内障形成机理的探索奠定基础。聚丙烯酰胺凝胶电泳与液相色谱串联质谱相结合是简单、快捷的方法，将在大规模的临床样品研究中具有良好的应用前景。

摘要： 目的：运用蛋白质组技术鉴定和分析正常人晶状体纤维的蛋白质，建立正常人晶状体纤维的蛋白质组数据库和表达谱，为研究晶状体疾病提供基础。rn 方法：晶状体纤维总蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离、胶内酶切后的多肽利用液相色谱串联质谱的方法，对正常人晶状体中的全部纤维蛋白质进行鉴定。根据高丰度离子的匹配率、匹配离子的连续性和随机性得分，通过SEQUEST和AMASS软件筛选结果。同一样品重复做三次实验。rn 结果：具有可信度在98％以上、有2个或2个以上合格谱图、不少于两次实验均鉴定的蛋白质作为阳性结果，共60个蛋白质，有22个晶状体蛋白质在以前的晶状体蛋白质组研究中有过鉴定。rn 结论：实验结果为晶状体纤维的蛋白质随年龄而变化以及白内障形成机理的探索奠定基础。聚丙烯酰胺凝胶电泳与液相色谱串联质谱相结合是简单、快捷的方法，将在大规模的临床样品研究中具有良好的应用前景。

摘要： 目的：运用蛋白质组技术鉴定和分析正常人晶状体纤维的蛋白质，建立正常人晶状体纤维的蛋白质组数据库和表达谱，为研究晶状体疾病提供基础。rn 方法：晶状体纤维总蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离、胶内酶切后的多肽利用液相色谱串联质谱的方法，对正常人晶状体中的全部纤维蛋白质进行鉴定。根据高丰度离子的匹配率、匹配离子的连续性和随机性得分，通过SEQUEST和AMASS软件筛选结果。同一样品重复做三次实验。rn 结果：具有可信度在98％以上、有2个或2个以上合格谱图、不少于两次实验均鉴定的蛋白质作为阳性结果，共60个蛋白质，有22个晶状体蛋白质在以前的晶状体蛋白质组研究中有过鉴定。rn 结论：实验结果为晶状体纤维的蛋白质随年龄而变化以及白内障形成机理的探索奠定基础。聚丙烯酰胺凝胶电泳与液相色谱串联质谱相结合是简单、快捷的方法，将在大规模的临床样品研究中具有良好的应用前景。

摘要： 目的：运用蛋白质组技术鉴定和分析正常人晶状体纤维的蛋白质，建立正常人晶状体纤维的蛋白质组数据库和表达谱，为研究晶状体疾病提供基础。rn 方法：晶状体纤维总蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离、胶内酶切后的多肽利用液相色谱串联质谱的方法，对正常人晶状体中的全部纤维蛋白质进行鉴定。根据高丰度离子的匹配率、匹配离子的连续性和随机性得分，通过SEQUEST和AMASS软件筛选结果。同一样品重复做三次实验。rn 结果：具有可信度在98％以上、有2个或2个以上合格谱图、不少于两次实验均鉴定的蛋白质作为阳性结果，共60个蛋白质，有22个晶状体蛋白质在以前的晶状体蛋白质组研究中有过鉴定。rn 结论：实验结果为晶状体纤维的蛋白质随年龄而变化以及白内障形成机理的探索奠定基础。聚丙烯酰胺凝胶电泳与液相色谱串联质谱相结合是简单、快捷的方法，将在大规模的临床样品研究中具有良好的应用前景。

摘要： 目的：运用蛋白质组技术鉴定和分析正常人晶状体纤维的蛋白质，建立正常人晶状体纤维的蛋白质组数据库和表达谱，为研究晶状体疾病提供基础。rn 方法：晶状体纤维总蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离、胶内酶切后的多肽利用液相色谱串联质谱的方法，对正常人晶状体中的全部纤维蛋白质进行鉴定。根据高丰度离子的匹配率、匹配离子的连续性和随机性得分，通过SEQUEST和AMASS软件筛选结果。同一样品重复做三次实验。rn 结果：具有可信度在98％以上、有2个或2个以上合格谱图、不少于两次实验均鉴定的蛋白质作为阳性结果，共60个蛋白质，有22个晶状体蛋白质在以前的晶状体蛋白质组研究中有过鉴定。rn 结论：实验结果为晶状体纤维的蛋白质随年龄而变化以及白内障形成机理的探索奠定基础。聚丙烯酰胺凝胶电泳与液相色谱串联质谱相结合是简单、快捷的方法，将在大规模的临床样品研究中具有良好的应用前景。

摘要： 目的：运用蛋白质组技术鉴定和分析正常人晶状体纤维的蛋白质，建立正常人晶状体纤维的蛋白质组数据库和表达谱，为研究晶状体疾病提供基础。rn 方法：晶状体纤维总蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分离、胶内酶切后的多肽利用液相色谱串联质谱的方法，对正常人晶状体中的全部纤维蛋白质进行鉴定。根据高丰度离子的匹配率、匹配离子的连续性和随机性得分，通过SEQUEST和AMASS软件筛选结果。同一样品重复做三次实验。rn 结果：具有可信度在98％以上、有2个或2个以上合格谱图、不少于两次实验均鉴定的蛋白质作为阳性结果，共60个蛋白质，有22个晶状体蛋白质在以前的晶状体蛋白质组研究中有过鉴定。rn 结论：实验结果为晶状体纤维的蛋白质随年龄而变化以及白内障形成机理的探索奠定基础。聚丙烯酰胺凝胶电泳与液相色谱串联质谱相结合是简单、快捷的方法，将在大规模的临床样品研究中具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及杀虫晶体蛋白领域，特别涉及对甜菜夜蛾、水稻二化螟、亚洲玉米螟和小菜蛾有杀虫活性的Cry2类杀虫晶体蛋白。

摘要： 本发明提出了具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的蛋白质在提高苏云金芽孢杆菌的伴孢晶体蛋白毒力中的用途，增效蛋白与伴孢晶体蛋白共同作用后，可以有效地提高伴孢晶体蛋白的毒力，尤其是杀虫能力，从而减少伴孢晶体蛋白的使用量，降低杀虫成本，提高杀虫效率，适于规模化推广应用。

摘要： 本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及蜘蛛毒素肽与苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的融合蛋白及应用，该融合蛋白是通过将两种蜘蛛肽合成基因hv1a，hv2a与苏云金杆菌杀虫基因cry1Ac融合表达后获得的蛋白，蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。本发明是国际上首次将两个蜘蛛肽合成基因与Bt杀虫基因相融合，三个基因融合后比单个或两个基因融合产生了更大的杀虫增效，具有协同作用，该蛋白对防治作物鳞翅目病虫害、螨虫和线虫具有重要意义。

摘要： 本发明属于基因工程领域，具体的涉及一种蛋白融合蛋白序列的构建及融合蛋白的表达与应用。本发明具体提供一种转导肽-杀虫晶体蛋白融合蛋白及其应用，首次将有关PTD的研究成果应用于微生物杀虫晶体蛋白领域，开辟PTD应用的新领域和克服害虫抗药性的新途径，发明结果证明融合蛋白具有比单独的杀虫晶体蛋白高的杀虫活性。本发明对有害生物的防治和PTD的应用均有重要的理论和实践意义。

摘要： 本发明涉及杀虫晶体蛋白领域，特别涉及对甜菜夜蛾、水稻二化螟、亚洲玉米螟和小菜蛾有杀虫活性的Cry2类杀虫晶体蛋白。

摘要： 本发明公开一种具有抗癌活性的伴孢晶体蛋白，它具有序列表1所示的氨基酸序列的蛋白或其融合蛋白、或其活性片段、或其活性衍生物中的一种；一种具有抗癌活性的伴孢晶体蛋白的编码基因，它具有序列表2所示的核苷酸序列；一种具有抗癌活性的伴孢晶体蛋白的制备方法，采用序列表2所示核苷酸序列的编码基因融合表达之后经亲和层析的方法进行分离制备具有抗癌活性的伴孢晶体蛋白。本发明制备的蛋白能识别肝癌细胞并将其杀死，效果显著；对正常肝细胞安全性高；蛋白表达条件简单，易于纯化，生产成本低廉，因而适宜进行工业化生产。

摘要： 本发明提出了具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的蛋白质在提高苏云金芽孢杆菌的伴孢晶体蛋白毒力中的用途，增效蛋白与伴孢晶体蛋白共同作用后，可以有效地提高伴孢晶体蛋白的毒力，尤其是杀虫能力，从而减少伴孢晶体蛋白的使用量，降低杀虫成本，提高杀虫效率，适于规模化推广应用。

摘要： 本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及蜘蛛毒素肽与苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的融合蛋白及应用，该融合蛋白是通过将两种蜘蛛肽合成基因hv1a，hv2a与苏云金杆菌杀虫基因cry1Ac融合表达后获得的蛋白，蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。本发明是国际上首次将两个蜘蛛肽合成基因与Bt杀虫基因相融合，三个基因融合后比单个或两个基因融合产生了更大的杀虫增效，具有协同作用，该蛋白对防治作物鳞翅目病虫害、螨虫和线虫具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种杀虫晶体蛋白的非受体结合蛋白组合物及其提取方法和应用，该非受体结合蛋白组合物包括但不局限于微管蛋白、谷胱甘肽合成酶、ATP合成酶、精氨酸激酶、凝集素、胰蛋白酶、翻译延伸因子和细胞色素C氧化酶，且该非受体结合蛋白组合物是通过亲和层析自包含中肠肠腔液的害虫中肠的水溶性物质中提取的，上述亲和层析所用的亲和分子为杀虫晶体蛋白Cry。应用本发明的非受体结合蛋白组合物可在不改变工厂现有产品基础上，提高Cry的杀虫活性，克服害虫对现有产品所产生的抗性问题，以及一些重要害虫对现有产品活性不高的问题。

摘要： 本发明属于基因工程领域，具体的涉及一种蛋白融合蛋白序列的构建及融合蛋白的表达与应用。本发明具体提供一种转导肽－杀虫晶体蛋白融合蛋白及其应用，首次将有关PTD的研究成果应用于微生物杀虫晶体蛋白领域，开辟PTD应用的新领域和克服害虫抗药性的新途径，发明结果证明融合蛋白具有比单独的杀虫晶体蛋白高的杀虫活性。本发明对有害生物的防治和PTD的应用均有重要的理论和实践意义。