根癌农杆菌

摘要： 解决茶树缺乏高效、稳定的遗传转化体系问题,建立了一种基于根癌农杆菌介导的茶树原位转化转基因方法,为茶树基因功能研究和种质创新奠定坚实的基础。以茶树品种‘铁观音’、‘白叶1号’和‘龙井43’的实生幼苗为受体材料,进行去顶芽和腋芽处理。利用根癌农杆菌菌液侵染实生苗伤口,通过抗性筛选获得再生芽,经分子生物学鉴定后,采用短穗扦插法获得茶树转基因植株。结果表明,再生芽中GUS(β-glucuronidase)和HYG(hygromycin)标记基因经多次PCR检测均为阳性,经测序验证PCR产物序列与标记基因序列一致。‘铁观音’、‘白叶1号’和‘龙井43’的转化率分别为8.14%、2.99%和2.53%。建立了不依赖茶树组织培养的原位转化转基因体系,具有操作简便、转化率高、成本低、试验周期短的特点。

摘要： 丹参是我国传统的大宗药材,广泛用于治疗心脑血管疾病。转基因技术作为基因功能研究和转基因育种的重要手段在丰富和优化丹参种质资源方面取得了显著成效。通过利用转基因技术中常用的农杆菌介导法来转入外源基因以及探索丹参有效成分合成代谢相关基因功能,以期获得高产、高抗丹参植株的方法已较为成熟,目前研究工作主要集中于不同遗传转化体系的建立和优化。本文就农杆菌介导的丹参遗传转化的转化原理、影响因素和研究现状三方面进行详细综述,以期为今后丹参基因功能研究和新品种培育提供参考。

摘要： [目的]以'王林'苹果愈伤组织为转化研究的材料,在已经建立的遗传转化基础上,优化根癌农杆菌介导的'王林'愈伤组织的遗传转化系统.[方法]在遗传转化的过程中,通过对根癌农杆菌的侵染时间、共培养以及抗性的选择,优化遗传转化体系并且增加转化效率.[结果]选择生长20 d的愈伤组织,在根癌农杆菌OD600=0.8时侵染20 min,共培养3d、转入卡那霉素30 mg/L和头孢噻肟250 mg/L的培养基上进行筛选,可显著提高遗传转化效率.[结论]将McmiR 399d作为标记基因进行转化,优化苹果'王林'愈伤组织的遗传转化系统,从而得到过表达和沉默的McmiR399d'王林'愈伤组织.

摘要： 根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)是一种丝状真菌常用的遗传转化手段,但目前还不能有效地应用于少孢节丛孢菌的转化。构建由PgpdA启动子调控mgfp-gus基因的真菌表达载体pCAMBIA1304''-PgpdA并转入农杆菌中,利用ATMT技术对少孢节丛孢菌进行转化。结果显示,农杆菌AGL-1介导的转化在共培养时间为60 h,温度为23°C的条件下获得了1株转化子,以其基因组为模板可以扩增出hph和gus基因片段,进行GUS组织染色能观察到蓝色,表明目的基因成功转入少孢节丛孢菌基因组中并能正常表达。初步建立了农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化方法,为少孢节丛孢菌功能新基因的研究、菌株改良等研究奠定了基础。

摘要： 玉米是世界上三大粮食作物之一,目前,玉米产量和品质的提高较大程度依靠基因工程技术.而玉米的农杆菌转化是对玉米基因组进行遗传修饰的有效手段.综述了玉米农杆菌转化的受体、影响农杆菌转化效率的因素,以有效地提高转化效率.

摘要： 根癌农杆菌介导的遗传转化法(ATMT)是一种丝状真菌常用的遗传转化手段,但目前还不能有效地应用于少孢节丛抱菌的转化.构建由PgpdA启动子调控mgfp-gus基因的真菌表达载体pCAM-BIA1304'-PgpdA并转入农杆菌中,利用ATMT技术对少孢节丛孢菌进行转化.结果显示,农杆菌AGL-1介导的转化在共培养时间为60 h,温度为23°C的条件下获得了1株转化子,以其基因组为模板可以扩增出hph和gus基因片段,进行GUS组织染色能观察到蓝色,表明目的基因成功转入少孢节丛孢菌基因组中并能正常表达.初步建立了农杆菌介导的少孢节丛孢菌遗传转化方法,为少孢节丛孢菌功能新基因的研究、菌株改良等研究奠定了基础.

摘要： 丝状真菌分泌蛋白与其致病性密切相关,目前对于病原真菌的蛋白胞外分泌途径及其调控机制的报道不多.为建立一个方便高效的真菌分泌蛋白调控途径的遗传研究体系,本研究以植物病原丝状真菌——板栗疫病菌寄生隐赤壳Cryphonectria parasitica为对象,选取分泌表达量最高的两个分泌蛋白的信号肽SP1和SP2,分别构建带有GUS报告基因的分泌蛋白表达载体pCPXBIe-SP1-GUS和pCPXBIe-SP2-GUS并用于转化板栗疫病菌.选择高效分泌GUS蛋白的转化株SP1-9为出发菌株,利用农杆菌介导的遗传转化技术构建了T-DNA插入突变体库,从576个突变体中筛选到2株GUS分泌表达明显降低的突变体.本研究成功构建了可用于研究丝状真菌蛋白分泌的遗传研究体系,并筛选获得了分泌蛋白缺陷突变体,为深入研究丝状真菌分泌途径及其调控机制奠定了基础.

摘要： 为解决三孢布拉霉转化过程中原生质体转化率低、孢子细胞壁厚难以导入外源载体等问题,本研究中构建了根癌农杆菌侵染原生质体的转化体系,同时克隆了与非同源末端连接修复途径相关的ku80基因,并将该转化体系应用于ku80的敲除中.将ku80基因敲除框插入双元载体pDHt-sk上构建了重组敲除载体pDH-85H3,通过化学转化法将敲除载体pDH-85H3导入根癌农杆菌LBA4404,并基于农杆菌介导法转化三孢布拉霉原生质体.结果表明,经潮霉素筛选和PCR鉴定,得到的20株转化子中,有18株的基因组插入了敲除框,转化率达90％.经鉴定有2株转化子发生了同源重组,敲除率为10％.该结论表明了根癌农杆菌介导三孢布拉霉原生质体转化技术的可行性.

摘要： 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)能够将自身质粒上的部分DNA片段(简称T-DNA)以T-复合物的形式转运、整合至宿主基因组,而用作高效的植物转基因工具.vbp2是编码VBP蛋白的3个同源基因之一,VBP蛋白通过与T-复合物上的VirD2结合参与T-DNA的转运过程.根据生物信息学预测,vbp2基因的启动子区可能含有多个转录调控元件.通过同源重组的方法,将A.tumefaciens染色体上的vbp2基因替换成编码红色荧光蛋白的rfp基因,使vbp2的启动子控制rfp的表达,因此,可通过测定所表达的RFP的荧光强度来表征vbp2启动子的活性.结果表明:乙酰丁香酮(AS)和鼠李糖(Rha)均能诱导vbp2启动子表达RFP,AS和Rha的最佳诱导浓度分别为150μmol/L和100μmol/L.通过截短vbp2启动子DNA片段的方法,证明响应AS和Rha诱导的调控区域分别位于上游的165-260 bp和126-165 bp.

摘要： 根癌农杆菌介导转化法(Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation,ATMT)具有转化效率高、遗传稳定、适用范围广等诸多优点,已成为真菌遗传转化研究中的强有力手段,在真菌基因资源开发、真菌性疾病研究和外源蛋白表达研究中发挥巨大作用.本文概述了根癌农杆菌转化法在真菌转化中的研究进展、技术优缺点、转化机制、实验方法和应用现状,着重介绍影响其转化效率的因素并对优化方法进行探讨,展望了该技术在真菌基因资源发掘、基因编辑等方面的应用前景,为今后真菌的遗传转化研究提供参考.

摘要： 近年来,根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导遗传转化的应用越来越广泛.本文综述了影响根癌农杆菌介导遗传转化法(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)转化效率的因素,并结合其在食药用菌中的应用,以期为根癌农杆菌介导金针菇遗传转化体系的建立提供参考依据.

摘要： 为了提高根癌农杆菌介导黑曲霉转化效率.本文对影响转化效率的分生孢子与农杆菌的比例、转化媒介、诱导溶氧、诱导时间、诱导时乙酰丁香酮浓度这五个因素进行根癌农杆菌介导黑曲霉的单因素转化试验,观察上述条件下的根癌农杆菌介导黑曲霉的转化效率,并确定提高其转化效率的最优条件.结果表明，转化效率的最优条件为:根癌农杆菌诱导过程在400μmol/L乙酰丁香酮终浓度条件下,100mL三角瓶中,28°C、100r/min振荡培养5h,分生孢子与农杆菌的比例为1∶100,在硝酸纤维膜媒介上24°C共培养48h.黑曲霉的转化效率能达到35个/107分生孢子.相比于优化前,转化效率提升了78％,并且整合至黑曲霉基因组的外源潮霉素抗性基因在转接15代以后仍能稳定遗传,并在众多转化子中筛选得到不产孢突变株.

摘要： 目的：探讨根癌农杆菌介导须癣毛癣菌的遗传转化条件及其影响因素.方法：构建双元载体pDHt/hph,通过根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)方法对须癣毛癣菌进行非定点的遗传转化,并设定不同的共培养温度(24°C,25°C,26°C,27°C,28°C,29°C)、共培养时间(12h，24h，36h,48h，72h)及共培养媒介(尼龙膜、硝酸纤维素膜、滤纸),观察在不同条件下的遗传转化效率.结果：共培养温度、共培养时间、共培养媒介均对根癌农杆菌介导须癣毛癣菌转化效率产生影响.结论：使用尼龙膜做媒介,28°C,共培养48小时为根癌农杆菌介导的须癣毛癣菌遗传转化体系的最优条件。

摘要： 以自育甘蔗品种“川蔗23号”诱导的胚性愈伤为受体材料,首次用较低的根癌农杆菌侵染浓度(OD600=0.1左右)与较短的侵染时间(1.5min)成功实现甘蔗遗传转化Bt(cry1Ab)基因.结果表明,胚性愈伤分化与小芽生根最适潮霉素筛选浓度分别为20mg/L和30mg/L;愈伤组织胚性的一致性是影响筛选阶段愈伤再生的重要因素,培养40d的愈伤组织为转化最适受体;转化材料经连续的潮霉素抗性筛选后,获得65株抗性植株,通过特异性引物的PCR扩增检测,有2株获得阳性条带,初步表明目的基因已整合到甘蔗染色体基因组中.

摘要： 目的：本研究是对于须癣毛癣菌Mep Ⅰ基因的遗传转化的研究.须癣毛癣菌是狐狸、猫等毛皮动物癣病的主要致病菌,在入主要引起头癣、体癣、股癣、手足癣.方法：金属蛋白酶(metalloprotease)作为角蛋白酶的主要组成部分,也是须癣毛癣菌的主要致病因子,是真菌破坏机体防御屏障的关键因素,决定着病原致病性的强弱.对金属蛋白酶基因(Mep)的研究可以更加深入的了解金属蛋白酶的功能,为进一步揭示真菌致病机理、研制高效真菌疫苗、服务临床奠定基础.根癌农杆菌介导的真菌转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)是研究真菌基因的一个有效工具,已经有多种真菌被成功转化.结果：结果表明8个Mep Ⅰ基因被成功敲除株,同源重组率为40％.结论：本研究通过ATMT成功构建了须癣毛癣菌Mep Ⅰ基因缺陷株,且可稳定传代.对了解该基因对须癣毛癣菌形态及致病性的影响奠定了基础.

摘要： 目的：建立起根癌农杆菌介导的广藿香遗转转化体系。方法：以广藿香无菌苗的子叶为外植体，利用携带质粒pBI121 的根癌农杆菌菌株LBA4404进行诱导，并对遗传转化过程的多个因素进行优化。结果：根癌农杆菌介导的最佳广藿香遗转转化体系为选取无菌苗的子叶作为外植体，转接至分化培养基MS+6-BA2.0 mol·L-1+NAA0.1 mol·L-1上进行预培养2d，用OD600＝0.3的农杆菌浓度侵染15 min，共培养3d，再转接到筛选培养基MS+6-BA2.0 mol·L-1+NAA0.1 mol·L-1+Carb 500 mol·L-1 +Kan 30 mol·L-1进行培养;对所获得的13株抗性植株进行PCR扩增，其中阳性植株为10株。结论：已成功建立起根癌农杆菌介导的广藿香遗转转化体系，为利用转基因技术进行广藿香的抗病育种奠定基础。

摘要： 对影响农杆菌介导水稻基因转化效率的各种因素进行了综述,并对转化过程中存在的问题进行了讨论,认为农杆菌菌株和载体、水稻基因型、转化受体、共培养条件、选择标记基因和转化程序等均是农杆菌介导高效水稻遗传转化必不可或缺的环节.要建立一个高效的农杆菌介导的植物转化系统,需要针对特定品种(品系)、特定组织和组培条件等诸多因素进行优化.

摘要： 苜蓿是重要的豆科牧草，我国苜蓿资源丰富，但可消化率较低，如何提高苜蓿的可消化率，改良其品质，更高的提高其营养价值，是目前苜蓿育种工作者的主要任务之一。试验以海拉尔野生黄花苜蓿（Mcdicago falcata L.）的子叶和下胚轴为外植体，通过组织培养手段建立了体细胞胚再生体系。在此基础上，将携带增加含硫氨基酸基因AK和APR和降低木质素基因449-C3H和HCT的共过表达载体pDESAK-APR和共干扰载体p449 hct-c3 h通过冻融法转入根癌农杆菌 LBA4404中，然后利用农杆菌介导法将含目的基因的两个载体直接转化黄花苜蓿无菌苗的子叶和下胚轴。结果表明：最佳愈伤诱导培养基为 MS+1.5mg/L2,4-D+0.4mg/L6-BA+3﹪蔗糖+0.7﹪琼脂，子叶也和下胚轴的愈伤率都可达100﹪；最佳胚性愈伤形成培养基为MS+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+2﹪蔗糖+0.7﹪琼脂，胚性愈伤形成率为81.5﹪；最佳分化芽形成培养基为 MS+0.25mg/LKT+0.05mg/LNAA+2﹪蔗糖+0.7﹪琼脂，分化芽形成率为36.5﹪，且分化芽直接转入MS培养基中培养成植株；最佳生根培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+1.5﹪蔗糖+0.7﹪琼脂，生根率为93.3﹪。农杆菌介导的遗传转化过程中，黄花苜蓿的子叶是理想的转基因受体，kan抗性试验筛选浓度为50mg/L，cef抑菌浓度为500mg/L，侵染时间为6-8min，农杆菌侵染液OD600为0.5-0.6。

摘要： 用含质粒载体pBl121的根癌农杆菌LBA4404转化中华猕猴桃(Acinidia chinensis)伏牛950.2叶片，探讨了不同侵染方式、预培养时间、菌液浓度、共培养时间对GUS瞬时表达率的影响。结果表明，预培养3d，用菌液浓度OD600值为00.3，真空渗入方式侵染10min，共培养4d，GUS瞬时表达率最高达920.2％。

摘要： 建立了叶片诱导的741毛白杨高频再生体系。结果表明：最佳不定芽诱导培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA；继代培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L IBA,最佳生根培养基为1/2MS+0.05mg/L IBA;对影响遗传转化的几个因素也进行了探讨。结果表明,共培养时间为3d时,不定芽诱导率最高；共培养培养基加入乙酰丁香酮、pH调到5.2时,诱导潮霉素抗性芽效果最显著；最佳潮霉素筛选浓度为3mg/L；利用以上方法,将抗逆基因(YCPA2)通过农杆菌导入到毛白杨中,经PCR检测,在抗性植株DNA中扩增出与目的基因大小相同的片断,初步确认目的基因已经整合到741毛白杨基因组中。

摘要： 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的桃熏草莓遗传转化方法，包括：采用桃熏草莓匍匐茎茎尖培育桃熏草莓组培苗，切割叶块进行预培养，得预培叶片；制备根癌农杆菌溶液，并将预培叶片和根癌农杆菌溶液进行转化共培养，经延迟筛选并筛选培养后进行荧光检测和PCR鉴定。本发明的转化方法利用根癌农杆菌介导，通过桃熏草莓离体再生体系建立、转化体系建立、转化植株细胞水平鉴定和分子水平鉴定的遗传转化过程，建立十倍体桃熏草莓遗传转化体系，为今后针对桃熏草莓的遗传改良基因工程奠定基础。

摘要： 本发明涉及根癌农杆菌检测技术领域，具体涉及根癌农杆菌的微滴数字PCR检测引物探针组、试剂盒及其应用。本发明提供根癌农杆菌的微滴数字PCR检测引物探针组，其包括序列如SEQ ID NO.2‑3所示的引物对和序列如SEQ ID NO.4所示的探针。本发明根据根癌农杆菌Ti质粒上的VirD2基因序列设计特异性引物和荧光探针，该引物和探针具有较高的特异性，扩增的线性相关良好，灵敏度高，可应用于实际植物样本的定量检测，准确性高，为植物冠瘿病的早期发现、预防和治疗提供高效的绝对定量检测方法，具有重要的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种根癌农杆菌和CRISPR‑Cas9介导的基因定点插入失活方法，使用甘蔗鞭黑穗菌内源snRNA启动子(甘蔗鞭黑穗菌u6基因启动子)驱动sgRNA表达盒，将CRISPR‑Cas9系统与根癌农杆菌T‑质粒整合，构建以潮霉素为抗性筛选标记的根癌农杆菌介导的甘蔗鞭黑穗菌基因定点插入载体失活系统；将目标基因的特异识别序列克隆入sgRNA表达盒，用于转化甘蔗鞭黑穗菌担孢子，从而将载体系统的可跳动DNA片段准确插入甘蔗鞭黑穗菌目标基因靶标序列，达到破坏基因功能的目的。本发明为研究甘蔗鞭黑穗菌的功能基因组学提供了重要工具，该系统具有高效性和准确性，方便在甘蔗鞭黑穗菌中进行基因功能的研究。

摘要： 本发明公开了一种利用根癌农杆菌转化高山被孢霉菌丝的方法，属于生物工程技术领域。本发明采用高山被孢霉(Mortierella alpina)尿嘧啶营养缺陷型CCFM 501的液体菌丝作为共培养材料，通过带有尿嘧啶筛选标记载体的根癌农杆菌介导的遗传操作技术，成功得到多个转化子。本发明改进了根癌农杆菌介导高山被孢霉的转化方法，对根癌农杆菌介导高山被孢霉的基础理论研究及高山被孢霉高效的遗传改造有重大意义。

摘要： 本发明提供一种根癌农杆菌介导的火木层孔菌的遗传转化方法，包括如下步骤：1)将火木层孔菌菌丝经溶壁酶液酶解、纯化得到火木层孔菌原生质体，2)以含有外源基因的重组根癌农杆菌对步骤1)中得到的火木层孔菌原生质体进行遗传转化处理，3)将处理后的火木层孔菌原生质体进行再生培养和抗性筛选培养，获得整合外源基因的火木层孔菌转化株。本发明方法能有效地介导外源基因整合入火木层孔菌基因组中，并使之得到稳定的复制和表达，从而建立了火木层孔菌的转化系统。本发明方法所建立的火木层孔菌转化系统，为火木层孔菌开辟了广阔的应用领域，将使火木层孔菌这一宝贵资源得到更充分的利用。

摘要： 本发明涉及包含一个或更多个根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)抗性基因的蔷薇植物。本发明还涉及本文所公开的植物的植物部分、细胞或生殖组织以及用于鉴定根癌农杆菌抗性蔷薇植物的方法。具体地，本发明涉及根癌农杆菌抗性蔷薇植物，其中根癌农杆菌抗性由位于二倍体蔷薇一致性图谱(consensus map)的56Mb至58.5Mb之间的连锁群7(LG7)中的一个或更多个基因提供，特别是选自由SEQ ID No.1至5组成的组中的一个或更多个基因提供。

摘要： 本发明提供一种根癌农杆菌及应用，所述根癌农杆菌分类命名为根癌农杆菌Agrobacterium sp.BJ‑04，保藏号为CCTCC No:M 2022213，保藏时间为2022年3月08日。在本发明中，通过筛选培育出的菌株，可降解作为单一碳源六氯二丁烯，且在高浓度六氯丁二烯存在的情况下，依旧保持高的降解效率。

摘要： 本发明涉及一种根癌农杆菌介导的羊草遗传转化的方法，属于植物组培技术和植物转基因技术领域，所述方法包括获得羊草组培无菌愈伤组织、冻融法转化农杆菌感受态、活化根癌农杆菌、侵染羊草愈伤组织并共培养、植物转化材料的筛选培养、分化筛选培养基及培养条件和生根培养基及培养条件。本发明实现了添加生长素促进羊草再生效率的提高，获得具有转基因的再生植株。

摘要： 本发明提供一株促进采后马铃薯块茎愈伤的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No：24362。本发明所涉及的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens菌株，分离自愈伤的马铃薯组织，具有繁殖快、菌种容易收集、易于采后块茎的处理、加速块茎愈伤表皮封闭层(即次生周皮，次生周皮主要由木质素、聚酚软木脂和聚酯软木脂的细胞层组成)的生成速度，从而降低了块茎的重量损失速度和镰刀菌侵染病斑扩展的特点。

摘要： 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的菊花‘神马’的转基因方法，主要包括外植体预培养、菌液制备、共培养、延迟培养和筛选培养几个关键步骤。本发明对影响菊花‘神马’转化过程的多个因素进行了筛选和改良，通过优选外植体、提供足够时间的暗培养以及优化培养基的组成，从而提高了菊花转基因过程的再生转化率，提高了转化体系的稳定性，为后期在菊花中进行转基因功能验证和基因工程育种奠定了基础。