猪胸膜肺炎放线杆菌

摘要： 为调查广西地区某规模化猪场疑似患猪传染性胸膜肺炎猪的病原、血清型及有效治疗药物等情况,首先对患病猪进行剖检观察其病理变化,同时无菌采集病猪肺脏等病料,接种平板后纯化培养,然后通过革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA序列比对、血清型及毒素基因分析等方法进行鉴定,并对分离菌株的耐药性和动物致病性进行探究。结果:从病料中分离到1株细菌,其菌落、菌体形态、生理生化特性和16S rRNA基因序列符合胸膜肺炎放线杆菌(APP)特征,该菌株含有ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅣ三种毒素,属于APP血清5型,因此将其命名为APP5-YXLM;药敏试验结果显示,该菌对β-内酰胺类药物和头孢类药物敏感,对红霉素、庆大霉素、多西环素、四环素等6种药物耐药;动物致病性试验表明,该菌株对小鼠具有较强的致病性,其半数致死量(LD_(50))为7.06×10^(8) CFU。试验结果为该发病猪场猪传染性胸膜肺炎的防治提供了理论依据,同时也为掌握胸膜肺炎放线杆菌在广西地区的流行情况提供了数据支持。

摘要： 猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumoniae,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobczcillus pleuropeumonicze,APP)引起的猪高度致死性呼吸道传染病,主要临诊特征为肺出血、坏死和纤维素性渗出。PCP传染性强,任何生长阶段的猪均有易感性,世界范围内各养猪场PCP发病率不断上升,对养猪业造成的危害不容忽视。根据APP荚膜多糖(CPS)和脂多糖(LPS)抗原性差异,可将其分为18种血清型;依据生长是否需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD).

摘要： 为建立检测猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)的可视化环介导等温扩增(LAMP)方法,对比猪APP主要流行毒株的ApxⅣA基因序列,选择高度保守区域设计LAMP引物,以钙黄绿素(Calcein)为指示剂,对反应体系和反应条件优化后建立了一种快速检测猪APP的可视化LAMP方法。采用建立的方法在63°C水浴锅中扩增40 min后,85°C作用10 min即可完成检测。用该方法检测大肠杆菌、绿脓杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、猪霍乱沙门菌、猪链球菌、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌等,均不发生交叉反应。以10倍稀释的APP基因组DNA为模板,评价方法的敏感性,结果最低检出量为1.67×10^(-5)ng/μL,比普通PCR方法的最低检出量1.67×10^(-2)ng/μL高1000倍;在反应体系中加入钙黄绿素,反应结束后阳性反应管颜色从橘黄色变为黄绿色且在紫外光下有绿色荧光。采用建立的方法检测312份临床样品,共检出阳性样品46份,而采用普通PCR方法仅检出阳性样品10份。该方法的建立为快速诊断猪传染性胸膜肺炎提供了技术支持。

摘要： 为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37°C孵育2 h,加入4％猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用酶标仪测定反应混合物上清液的OD540nm值判断溶血程度,计算出能够保护50％红细胞不发生溶血的最低血清稀释倍数,即为该血清的中和效价.利用该方法进一步检测了副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌等阳性血清,无交叉反应,表明该方法特异性较强;利用该方法最高能够检测到中和效价为1:1580的APP ApxI毒素抗体阳性的猪血清,表明建立的中和试验具有较高的敏感性;以BALB/c小鼠为模型的感染试验结果表明,当其血清中ApxI毒素抗体的中和效价达到1:20时能够为小鼠提供有效保护.采用建立的方法检测临床采集的103份猪血清样品,能够有效检测其中和抗体,表明该方法可以应用于临床检测可分泌ApxI毒素的APP的感染和含ApxI毒素的亚单位疫苗免疫效果评估,为评价亚单位疫苗的免疫效果和猪传染性胸膜肺炎的诊断提供了技术支持.

摘要： 为了确诊某种猪场后备母猪疑似猪传染性胸膜肺炎(PCP)病例,试验在掌握相关信息的基础上,应用常规细菌学鉴定方法对采集的4头发病猪病料组织进行细菌分离培养与生物型测定,PCR技术对分离菌进行猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)及其血清型测定、毒力基因检测以及分离菌之间亲缘关系的鉴定,Kirby-Bauer纸片法分析分离菌的药物感受性.结果显示,4份病料均分离出APP,且同为生物I型、血清8型菌株,均检测到毒力基因Omp2和ApxⅣ而无ApxⅡ、ApxⅢ,菌株之间的Omp2和ApxⅣ基因核苷酸序列相似度达100％,并处于系统发育树的同一分支,4株APP分离菌高度同源.4株APP分离菌对环丙沙星、诺氟沙星、氟苯尼考、氧氟沙星、头孢唑林和头孢曲松均100％敏感;对青霉素、卡那霉素和四环素均100％耐药,对链霉素、庆大霉素、丁胺卡那、复方新诺明、多西环素、红霉素、阿莫西林和氨苄西林的耐药率介于25％～75％.结果表明,该种猪场存在血清8型APP菌株感染且为同一菌株,分离菌对抗菌药物的感受性存在差异.

摘要： 为快速准确鉴别猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清2、6、8、12型,从已发表的文献中筛选出4对引物,通过扩增体系和扩增程序的优化来建立APP血清2、6、8、12型的多重PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了研究。结果发现,所建立的多重PCR方法特异性良好,对APP血清1~15型进行PCR检测,除血清2、6、8、12型外,均不能扩增出任何条带,检测猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪多杀性巴氏杆菌和猪大肠杆菌也呈阴性,对APP血清2、6、8、12型的细菌纯培养物、组织样品的检测敏感性分别都为1×10^(3) CFU/mL、1×10^(3) CFU/g。本PCR方法快速有效,可在4.5 h左右直接从肺脏组织中得到检测结果。本方法的建立为APP的分子分型和流行病学调查提供了有力的技术支撑。

摘要： 针对猪胸膜肺炎放线杆菌种特异性基因ApxⅣ和血清1、3、5、7型的特异Cps基因设计5对引物,通过扩增条件的优化,建立了猪胸膜肺炎放线杆菌及血清1、3、5、7型的五重PCR检测方法.特异性试验显示,对血清1～15型参考菌株均扩增出相应的预期目的条带,对6种引起猪发病的主要病原菌均未扩增出任何条带.敏感性试验表明,对各血清型细菌纯培物的敏感性皆为103 CFU/mL;对1、5型感染样品的敏感性为104 CFU/g,对3、7型感染样品的敏感性为103 CFU/g.可在4.5 h左右直接从病猪肺脏中得到检测结果.方法的建立为相关临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效的技术支持.

摘要： 为治疗猪胸膜肺炎放线杆菌(App)寻找新的药物靶点,试验根据GeneBank中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌DOXP消旋酶基因序列,对DOXP消旋酶基因及其编码蛋白进行生物信息学分析.结果 表示App DOXP消旋酶由687个核苷酸所组成,编码228氨基酸的蛋白质.该蛋白质的分子量为(MW)25.636kd,理论等电点(pI)为7.83,该序列与APP7型的同源性为100％;与副嗜血杆菌为不同的分支.该蛋白具有螺旋,折叠,转角等明显的二级结构成分.对猪胸膜肺炎放线杆菌中MEP途径的研究,为治疗App寻找新的药物提供了线索.

摘要： 福建省某猪场大猪出现呼吸因难、喘气和咳嗽,病死猪肺脏有纤维素性胸膜肺炎病变,从病变肺脏中分离出一株革兰氏阴性短小球杆菌,生化试验表明该菌能发酵木糖、甘露醇、麦芽糖、蔗糖、果糖和葡萄糖.经PCR扩增、克隆和测序确定该菌为猪胸膜肺炎放线杆菌.药敏实验显示该分离菌株只对阿莫西林、头孢噻肟和青霉素这3种药物敏感,而对氟苯尼考、替米考星、四环素、链霉素、强力霉素、环丙沙星、林可霉素、壮观霉素和磺胺类药敏呈现耐药现象.动物实验表明该菌对小鼠具有致病性.该研究为猪场用药提供了参考依据.

摘要： 本文扼要阐述猪胸膜肺炎放线杆菌毒力因子等的研究概况，认为：在研制疫苗时，对亲本株的选择上，要么是分离本地具强毒力的优势血清型，因其可以提供菌体以及毒素抗原，产生最大限度的保护；要么使疫苗含有多种血清型，能够尽可能地包括四种毒素，也就可以提供更全面的保护。

摘要： 本研究构建clpP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，采用结晶紫染色法和荧光显微镜观察比较c1pP基因缺失株和APP亲本株的生物被膜形成能力。结果成功筛选获得一株c1pP基因缺失的胸膜肺炎放线杆菌突变株，通过对突变株生物学特性进行初步研究，结果表明突变株与亲本株相比，在25°C和37°C条件下培养生长能力未受影响，在42°C条件下培养生长能力略有下降，在添加有1mM H2O2和0.5M KC1的培养条件下也表现出下降的生长能力;结晶紫染色法和荧光显微镜观察结果显示，clpf，基因缺失株与亲本株相比，其生物被膜形成能力显著下降。该突变株构建体系的建立为胸膜肺炎放线杆菌新毒力基因的功能研究及猪传染性胸膜肺炎弱毒活疫苗的开发奠定了良好基础。

摘要： 猪传染性胸膜肺炎(PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的高度接触性传染病，该病严重危害养猪业发展。本试验对构建的三株缺失株APP血清1型apxⅡC-/kan+，血清型5型Sw1△ⅠC和apxⅡC-/IN+进行活化及鉴定，生物学特性的研究，毒力试验以及免疫保护力试验。结果显示，三株缺失株均对小鼠能够产生一定的保护力，其中，Sw1△IC能够提供对小鼠更为有效的保护。指出研究其血清型的基因缺失株对该病的防制具有重要意义，为今后APP基因缺失疫苗的应用研究打下了基础。

摘要： 2013年3月初河南省某规模化猪场育肥猪发病,经实验室诊断,分离到1株传染性胸膜肺炎放线杆菌和一株猪链球菌,对这两种菌分别进行了药敏试验.结果同时对这两种菌敏感的药物有头孢哌酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑啉、头孢呋辛、氧氟沙星和氯霉素.

摘要： 2013年3月初河南省某规模化猪场育肥猪发病,经实验室诊断,分离到1株传染性胸膜肺炎放线杆菌和一株猪链球菌,对这两种菌分别进行了药敏试验.结果同时对这两种菌敏感的药物有头孢哌酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑啉、头孢呋辛、氧氟沙星和氯霉素.

摘要： 2013年3月初河南省某规模化猪场育肥猪发病,经实验室诊断,分离到1株传染性胸膜肺炎放线杆菌和一株猪链球菌,对这两种菌分别进行了药敏试验.结果同时对这两种菌敏感的药物有头孢哌酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑啉、头孢呋辛、氧氟沙星和氯霉素.

摘要： 2013年3月初河南省某规模化猪场育肥猪发病,经实验室诊断,分离到1株传染性胸膜肺炎放线杆菌和一株猪链球菌,对这两种菌分别进行了药敏试验.结果同时对这两种菌敏感的药物有头孢哌酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑啉、头孢呋辛、氧氟沙星和氯霉素.

摘要： 2013年3月初河南省某规模化猪场育肥猪发病,经实验室诊断,分离到1株传染性胸膜肺炎放线杆菌和一株猪链球菌,对这两种菌分别进行了药敏试验.结果同时对这两种菌敏感的药物有头孢哌酮、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑啉、头孢呋辛、氧氟沙星和氯霉素.

摘要： 胸膜肺炎放线杆菌(APP)是一种组织嗜性很强的革兰氏阴性菌，主要黏附、定植猪肺上皮细胞。黏附是APP定植和致病的重要过程。本实验室前期首次发现APP血清5b型菌株L20存在完整的三聚体自转运蛋白(命名为Aad1)，为确定APP三聚体自转运粘附蛋白的功能结构域及其生物学特性，将APP三聚体自转运蛋白Aad 1承载区域124—325 5序列分6段克隆入原核表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达，并对6种重组蛋白进行粘附活性比较，结果发现124—612aa区域所表达的蛋白黏附活性最强(命名为adh)。将本区域adh基因运用同源重组的方法进行敲除(Δadh菌株)，与亲本野生株进行体内外生物学特性比较，发现△adh菌株粘附宿主细胞活性显著下降，生物被摸形成活性显著降低，菌体自凝现象几乎丧失，菌体生长速度明显加快。感染仔猪后初期临床症状明显减轻，后期症状差别不显著，可能与基因敲除株生长速度较快有关。证明adh是重要的粘附结构域，不但与菌体粘附、被膜形成功能相关，而且与菌体的生长速度、致病性有关。这为三聚体自转运粘附素在APP感染中的机制及亚单位疫苗研究奠定基础。

摘要： 本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪肺炎支原体与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌四联灭活疫苗，包括灭活的猪肺炎支原体菌株HNMhy1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1血清型抗原和免疫佐剂，五种菌株均有良好的免疫原性，可以很好的预防临床猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和胸膜肺炎放线杆菌型的感染，安全性好，免疫效果好、免疫期长，同时可以达到一针防多病，降低成本。

摘要： 本发明涉及一种含有猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体和猪肺炎支原体抗体的ELISA检测试剂盒及其制备方法，属于化学技术领域。本发明的试剂盒包括盒体，所述盒体内设支架，所述支架中设有抗体反应板区，放线杆菌阳性对照血清区、阴性对照血清区，支原体阳性对照血清区、阴性对照血清区，样品稀释液区，洗涤液区，底物缓冲液区，终止液区和酶标抗体区，各区内放置相应的试剂。

摘要： 本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌、猪链球菌与胸膜肺炎放线杆菌三联灭活疫苗，包括灭活的副猪嗜血杆菌菌株HNHPS1血清型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌菌株HN1570血清型抗原、灭活的猪链球菌菌株HNSS1血清型抗原、灭活的胸膜肺炎放线杆菌菌株HNAPP1抗原；四株菌株均有良好的免疫原性，以这四株菌株灭活抗原制备的疫苗，可以很好的预防临床副猪嗜血杆菌、猪链球菌和胸膜肺炎放线杆菌型的感染，同时该疫苗制备工艺简单，且安全性好，免疫效果好、免疫期长，同时可以达到一针防多病，降低成本，减少应激的目的。

摘要： 本实用新型涉及一种试剂盒，尤其涉及一种猪传染性胸膜肺炎放线杆菌抗体和猪肺炎支原体抗体的ELISA检测试剂盒,属于医疗器械技术领域。本实用新型的结构包括盒体，所述盒体内设支架，所述支架中设有抗体反应板区，放线杆菌阳性对照血清区、阴性对照血清区，支原体阳性对照血清区、阴性对照血清区，样品稀释液区，洗涤液区，底物缓冲液区，终止液区和酶标抗体区，各区内放置相应的实验用品。本实用新型具有灵敏度高、特异性好、批量快速检测样品的优点。

摘要： 本发明“一种猪胸膜肺炎放线杆菌减毒菌株及其制备的预防猪胸膜肺炎产品”，涉及微生物和免疫学领域，本发明在单突变菌株GS7C的基础上，进一步缺失基因组中ureC基因片段，并插入具有免疫原性的apxIII‑N基因片段，进而再利用sacB基因负向筛选系统，筛选到成功表达ApxIII‑N蛋白的apxIIC‑/apxIA+、ureC‑/apxIII+双突变菌株(GS7CA)，保藏号为CGMCC NO.10016。实验数据表明，该双突变菌株的溶血活性和尿素酶活性完全丧失，毒力大大降低，可稳定遗传，采用本发明的猪胸膜肺炎放线杆菌减毒菌株制成的减毒活疫苗，毒力低，具有交叉保护活性，生物安全性高，质量稳定。

摘要： 本发明属于家畜传染病技术领域，与细菌基因工程技术领域有关。具体涉及一种重组猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型与猪支原体肺炎双价基因工程株的构建、疫苗制备及应用。本发明的特征是，构建了一株重组猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)血清1型弱毒株SLW05，该重组株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M209068，它是在猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型弱毒株SLW03的染色体中插入猪支原体肺炎抗原性P36基因片段，所述的P36基因片段的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。本发明还公开利用重组株制备的二价基因工程疫苗及其应用。

摘要： 本发明“一种猪胸膜肺炎放线杆菌减毒菌株及其制备的预防猪胸膜肺炎产品”，涉及微生物和免疫学领域，本发明在单突变菌株GS7C的基础上，进一步缺失基因组中ureC基因片段，并插入具有免疫原性的apxIII-N基因片段，进而再利用sacB基因负向筛选系统，筛选到成功表达ApxIII-N蛋白的apxIIC-/apxIA+、ureC-/apxIII+双突变菌株(GS7CA)，保藏号为CGMCC NO.10016。实验数据表明，该双突变菌株的溶血活性和尿素酶活性完全丧失，毒力大大降低，可稳定遗传，采用本发明的猪胸膜肺炎放线杆菌减毒菌株制成的减毒活疫苗，毒力低，具有交叉保护活性，生物安全性高，质量稳定。

摘要： 本发明属于家畜传染病技术领域，与细菌基因工程技术领域有关。具体涉及一种重组猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型与猪支原体肺炎双价基因工程株的构建、疫苗制备及应用。本发明的特征是，构建了一株重组猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)血清1型弱毒株SLW05，该重组株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M209068，它是在猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型弱毒株SLW03的染色体中插入猪支原体肺炎抗原性P36基因片段，所述的P36基因片段的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。本发明还公开利用重组株制备的二价基因工程疫苗及其应用。

摘要： 本发明提供猪胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌的双重PCR引物，所述的引物如下：A1:5

摘要： 本发明涉及动物疫苗生产技术领域，特别公开了一种血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌无血清高密度发酵培养工艺。该发酵培养工艺，其特征在于：将血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌冻干种子溶解后涂板，洗板后接种液体TSB培养基制备二级种子；将二级种子接种至含无血清培养基的发酵罐中，发酵过程中补料两次，当发酵液OD600­nm≥2.5时停止发酵，收获菌液；将菌液浓缩、洗滤，得到血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌高密度发酵抗原。本发明工艺操作简单，培养时间段，制备的血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌半成品不含血清，进一步制备的灭活疫苗可有效预防血清5型猪传染性胸膜肺炎疾病的发生。