荚膜多糖

摘要： 目的构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及Spc^(R)抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D。将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用Spc^(R)抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证。比较野毒株05ZYH33和敲除株Δcps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同。结果L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1030 bp)、R(1030 bp)以及S(1130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株Δcps2D;与野毒株05ZYH33相比,Δcps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄。结论成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础。

摘要： 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm),又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌,是一种革兰氏阴性菌,根据荚膜多糖可分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群,主要寄居在人体鼻咽部,可通过飞沫传播。人感染脑膜炎奈瑟菌可引起败血症或流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)等急性呼吸道传染病,常伴随着较高的死亡率[1-3]。建立高效的Nm检测方法对流脑的临床诊断有重要的意义。

摘要： 猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumoniae,PCP)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobczcillus pleuropeumonicze,APP)引起的猪高度致死性呼吸道传染病,主要临诊特征为肺出血、坏死和纤维素性渗出。PCP传染性强,任何生长阶段的猪均有易感性,世界范围内各养猪场PCP发病率不断上升,对养猪业造成的危害不容忽视。根据APP荚膜多糖(CPS)和脂多糖(LPS)抗原性差异,可将其分为18种血清型;依据生长是否需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD).

摘要： 目的使用两种方法分离和纯化临床分离阿萨希毛孢子菌的荚膜多糖葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖(GXM)。方法对临床分离的阿萨希毛孢子菌进行增菌,采用无水乙醇沉淀荚膜多糖,通过十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对GXM特异性沉淀,分别采用透析法和萃取法分离GXM-CTAB复合物从而纯化GXM。使用苯酚硫酸法测定GXM的浓度。结果通过透析法从200 mL培养上清中获得了约6.6 mg的GXM,阿萨希毛孢子菌GXM的获得率(GXM/GXM和GalXM混合多糖)为13.9%(6.6/47.4)。通过萃取法从200 mL培养上清中获得了约8.4 mg的GXM,阿萨希毛孢子菌GXM的获得率为14.2%(8.4/59)。结论两种方法都成功地提取和纯化了阿萨希毛孢子菌荚膜多糖GXM,萃取法较透析法更为高效。

摘要： 为建立最佳的牛源停乳链球菌荚膜多糖提取和纯化方法,用停乳链球菌地方菌株,开展了细菌生长过程中菌液浓度与荚膜多糖得率、发酵液pH值对荚膜多糖得率、不同浓度乙醇沉淀核酸及多糖的效果、温度和时间对荚膜多糖得率、冷酚抽提次数对荚膜多糖得率和蛋白含量的影响等一系列实验,同时对制备的3批荚膜多糖进行了各项指标的检测。结果表明,牛源停乳链球菌在pH值为7.0的发酵培养液中培养8 h时荚膜多糖得率最高,最佳的去核酸乙醇浓度为25%,最佳沉淀多糖的乙醇浓度为80%,最佳温度和时间为4°C作用24 h。制备的3批荚膜多糖,其荚膜多糖回收率均在85%以上,蛋白质与核酸含量均低于1%,唾液酸含量在12.5%~14.3%间。说明建立的牛源停乳链球菌荚膜多糖提取纯化方法纯化荚膜多糖得率和纯度均比较高,符合疫苗生产要求。

摘要： 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)是一种分布广泛的人兽共患性致病菌。新生儿感染可引起致命性的败血症和脑膜炎。母体免疫是预防新生儿无乳链球菌感染的最有前景的有效策略。然而,目前尚无可用的疫苗。作为无乳链球菌最重要的毒力因子之一,荚膜多糖(CPS)被认为是开发无乳链球菌疫苗的主要靶标。在此,我们综述了无乳链球菌CPS疫苗和CPS-蛋白结合疫苗的研究概况以及最新进展,旨在为无乳链球菌疫苗的研究提供参考。

摘要： 目的 分析碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)ST11菌株的基因组学特点.方法 挑取南京地区流行的3株CRKP-ST11菌株,提取基因组DNA,进行全基因组学测序,获得拼接后的全基因组.同时,从NCBI数据库中下载HS11286(中国上海)、JM45(中国杭州)、ATCC BAA-2146(美国/印度)的基因组为对照菌株,进行基因组GC碱基含量、单核苷酸多态性、亲缘关系及荚膜多糖(CPS)基因簇结构分析.结果 CPS基因簇的G+C含量大多<50％,不同于染色体其他部分,是CRKP-ST11的主要单核苷酸多态性位点;进化树分析显示南京地区分离的3株CRKP-ST11菌株与上海、杭州的CRKP-ST11亲缘关系相近,与美国/印度的CRKP-ST11较远.这3株CRKP-ST11的CPS基因簇一致,与杭州、上海及美国/印度的3株CRKP-ST11菌株的差异主要在CPS可变区.结论 CPS是CRKP-ST11的主要单核苷酸多态性位点,可能是CRKP-ST11菌株的主要进化区,CRKP-ST11的流行可能与CPS基因簇可变区有关,具有地域特点.

摘要： 荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)是一种广泛存在于细菌、支原体、部分真菌等菌体表面的碳水化合物.同时,荚膜多糖有助于菌体抵抗干燥和低温等不利环境,并通过在菌体表面形成物理屏障阻碍宿主补体的杀伤与吞噬作用.在长期多种应激-压力环境下,病原菌已进化出多种免疫逃避机制并促进宿主感染;在非病原微生物中,荚膜多糖可正向调节宿主免疫作用,并拮抗机体免疫因子,保护宿主免受病原菌引起的炎症性疾病.本文将结合本团队的相关研究工作,对荚膜多糖的结构、合成调控机制、生物学功能、免疫逃避机制和致病机制,特别是荚膜多糖正向调节宿主免疫系统及其应用潜力等方面作一综述,为病原菌致病机制的研究和疫病的有效防控提供参考依据.

摘要： 肺炎链球菌表面覆盖着一层荚膜,由多糖组成,是肺炎链球菌关键的毒力因子和重要的抗原,也是细菌分型的依据.强毒血清型的荚膜多糖被制成糖疫苗在抗感染方面发挥了巨大作用.荚膜多糖结构复杂,经常被O-乙酰化修饰,这些多变的化学修饰扮演着重要的生物学角色.本文对肺炎链球菌荚膜多糖O-乙酰化修饰的研究进展进行了介绍,包括荚膜多糖的遗传基础、合成途径和血清学特征,荚膜多糖的O-乙酰化修饰的化学结构及其相应的O-乙酰基转移酶,O-乙酰化修饰的化学鉴定和生物学功能.同时,我们也总结了多糖O-乙酰化修饰在肺炎链球菌微进化中的作用和对糖疫苗的影响,并对今后的研究进行了展望.本综述旨在为研究荚膜多糖的O-乙酰化修饰的致病机制奠定基础,也为糖疫苗的设计提供指导.

摘要： 目的 探索儿童来源的黏液型肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)微生物学特征.方法 复活并重新鉴定2016-2019年我院保存的黏液型肺炎链球菌临床株,用E-test完成药敏试验,荚膜肿胀试验完成血清分型,并分析宿主临床特征.结果 共复活黏液型肺炎链球菌21株,分别来自阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患儿切除的扁桃体和/或腺样体(47.6％)、肺炎患儿的深部痰液(28.6％)和肺泡灌洗液(14.3％)、阴道炎患儿的阴道分泌物(4.8％)等.血清分型示95.2％为3型,4.8％为37型.对青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、哌拉西林、美罗培南、万古霉素、左氧氟沙星、复方磺胺甲恶唑和利福平敏感率为100％,对四环素和红霉素的耐药率为66.7％和100％.结论 我院儿童肺炎链球菌临床株中黏液型少见,血清3型为主,对β-内酰胺类抗生素敏感,对大环内酯类耐药.

摘要： 通过猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)体外生物被膜模型,采用扫描电镜技术和结晶紫染色法观察芦丁对猪链球菌生物被膜形成的干预作用.在猪链球菌生物被膜形成的黏附阶段采用Real-time PCR的方法检测芦丁对荚膜多糖基因簇表达的影响,通过苯酚-硫酸法测得对照组与芦丁干预组的荚膜多糖含量,采用核磁共振光谱(NMR)检测芦丁干预后荚膜多糖与其对应脱唾液酸后产物结构的变化情况.结果显示,芦丁对S.suis的MIC为0.3125mg/mL,芦丁在1/4MIC时能抑制其黏附并且导致cps2D、cps2E、cps2Q、cps2S cps2J、cps2C、cps2R基因mRNA的表达上调,ps2M、cps2V、ps2U、ps2B、ps2K基因mRNA的表达下调.与对照组相比,芦丁干预猪链球菌生物被膜后荚膜多糖的含量显著升高(P＜0.05),但其荚膜多糖结构未发生变化.研究表明,芦丁可通过调节S.suis荚膜多糖的cps基因簇的表达,抑制S.suis生物被膜的形成.

摘要： 目的:建立层析法提纯A,C,Y,W135群脑膜炎球菌荚膜多糖的工艺,以替代传统苯酚抽提。方法:使用层析柱分别对A,C,Y,W135群荚膜多糖进行纯化,收集目的峰,脱盐、冻干后,进行检测。结果:按照2010年版《中华人民共和国药典》三部的检定要求,对提纯的A,C,Y,W135群多糖进行检测,各项指标均符合要求。结论:层析法提纯工艺,纯化获得了合格的荚膜多糖。与传统苯酚抽提工艺相比,操作简单,易于放大。

摘要： 目的：制备肺炎链球菌荚膜多糖；方法：采用立瓶静置培养肺炎链球菌血清型9V，经过离心、中空纤维过滤、25%和80%两步醇沉、超纯水复溶、透析、0.22μm无菌滤膜过滤、冻干等手段分离提取多糖；结果：经检定其主要质量指标均符合欧洲药典(2005年版)要求；结论：已建立起较为成熟的规模化肺炎多糖生产工艺。

摘要： 本文为了评价肺炎链球菌英膜多糖结合物在小鼠体内的免疫原性，用0.8%的二甲基酸胺(DMF)诱导分化4天后的HL-60细胞作为效应细胞、4个血清型的肺炎链球菌作为靶细菌，检测了本科室用不同方法制备的8组肺炎链球菌荚膜多糖结合物在小鼠体内诱导的功能性抗体水平，并与其对应的ELISA检测的总抗体水平进行了相关性分析。

摘要： 金葡菌荚膜多糖在其感染中起着重要的作用.主要介绍了血清1和2型的发现史、生化性质及其在免疫中的作用.天然荚膜多糖只对同株型起到保护作用,而纯化的荚膜多糖只有少量的致免疫性.从而了解到完全抗原只能用灭活金葡菌或者纯化的荚膜多糖结合蛋白质来实现.

摘要： 目的：建立适用临床上检测SS2抗体的IHA检测方法。方法：用SS2的荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)致敏经戊二醛处理过的鸡红细胞，优化致敏醛化红细胞的抗原量和时间。结果：在37°C条件下CPS(2．25μg／mL)致敏鸡红细胞90分钟，IHA试验在25°C条件下操作，被检血清IHA效价在1：8及其以上时判为SS2抗体阳性。应用此方法对猪大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、猪肠球菌、SS1、SS7、SS9、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌阳性血清进行检测，结果：SS2抗体均为阴性。对1044份无临床症状的猪血清进行检测，SS2抗体阳性率为61．69％。结论：该方法敏感性高，特异性较强，可用于大规模SS2抗体水平的检测和SS2的血清流行病学调查。

摘要： @@脑膜炎球菌多糖疫苗的使用有效的预防了细菌性脑膜炎的发生。但与脑膜炎球菌A，C，Y，W135群不同，B群脑膜炎奈瑟氏菌(Nesseria MeningitisGroup B,MenB)荚膜多糖结构因与人体正在发育的神经组织及少数成熟组织中的神经细胞黏附分子同源，而不能激发有效的保护性免疫。

摘要： 利用PCR的方法,从猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)四川资阳分离株449-1扩增出cps2J基因,克隆到pMD18-T载体中,构建质粒pMD18T-cps2J.以SalI和BamHI从pMDl8T-cps2J中切下目的cps2J基因片段并克隆到质粒pMAL-p2X中,构建重组表达质粒pMALp2X-cps2J,转在宿主菌TB1中进行诱导表达.SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了136 kD左右的目的蛋白MBP-cps2J,目的蛋白为可溶表达,约占菌体蛋白总量的13.5%.表达的蛋白可用Amylose树脂层析柱纯化.将纯化的融合蛋白MBP-cps2J免疫家兔,利用制备的抗血清经ELISA和协同凝集试验检测,与SS2型呈特异性阳性反应.本试验研究了SS2型cps2J的克隆与高效表达,并将协同凝集试验用于SS2型检测.

摘要： 采用超速离心和阴离子交换层析等方法提取制备了App血清1至10型等10个血清型的荚膜多糖和脂多糖抗原,建立了检测App型特异性抗体的ELISA方法,试验结果为:以App血清1型和4型的荚膜多糖及2型和10型的脂多糖为诊断抗原建立的ELISA方法,只与相应血清型的App标准阳性血清呈阳性反应,与其它App血清型标准阳性血清无交叉反应；其它6种App血清型的两种抗原与异型App阳性血清之间具有不同程度的交叉反应。结果表明,两种诊断抗原均可用于胸膜肺炎放线杆菌型特异性抗体的检测,尤以App血清1型和4型的荚膜多糖及2型和10型的脂多糖抗原最佳。

摘要： 猪链球菌2型的毒力因子主要包括荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素(HLY)以及多种具有毒性作用的蛋白片段.荚膜多糖是猪链球菌2型抵抗巨噬细胞吞噬的重要物质,也是猪链球菌进行分型的标志;溶菌酶释放蛋白和细胞外因子多出现于高致病力的毒株中,MRP和EF阳性菌株一般具有较高的毒力;溶血素具有很强的细胞毒性作用,其对微血管内皮细胞的破坏作用有利于细菌在组织内的扩散;其它多种毒力因子虽也具有致病作用和免疫原性,但还有待于进一步研究.由于猪链球菌2型致病机理复杂,毒株表型多样,尚未发现可区分毒力株、弱毒力株和无毒力株的标志性因子.对猪链球菌2型的毒力因子进行深入研究,对于阐明猪链球菌2型的致病机理,寻找到快速有效的诊断治疗方法,以及疫苗的构建都有重要意义.

摘要： 本发明一种肺炎链球菌荚膜多糖结合物中游离多糖含量的测定方法，属于生物技术领域，其步骤为取肺炎链球菌荚膜多糖结合物为样1，另取等量肺炎链球菌荚膜多糖结合物，加入无水乙醇和氯化钠，置-20°C70～90小时，离心去上清液；用适当溶剂充分洗涤沉淀，离心收集上清液，上清液经超滤脱盐和乙醇后为样2；以蒽酮法测定样1、样2的多糖含量，计算出肺炎链球菌荚膜多糖结合物中的游离多糖含量。本发明可准确、简便地测定出肺炎链球菌荚膜多糖结合物中游离多糖的含量。

摘要： 本发明提供一种脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖或/和改性的两性离子荚膜多糖的新应用。主要涉及脆弱拟杆菌的荚膜多糖提取物在制备抗焦虑症的药物中的应用，所述脆弱拟杆菌的保藏编号为CGMCC NO.10685，所述荚膜多糖提取物为荚膜多糖A的提取物。与传统技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明的发明人发现，脆弱拟杆菌ZY312的荚膜多糖A提取物对焦虑症显效，并且该效果通过在大鼠模型上进行高架十字迷宫行为学测定和旷场实验得以验证。

摘要： 本发明提供隐球菌荚膜多糖及其制备方法，所述制备方法包括以下步骤：S1：对灭菌后的隐球菌的菌液离心后保留第一上清液；S2：在所述第一上清液中加入醋酸钙和冰醋酸得到第一混合液；S3：在所述第一混合液中加入无水乙醇，离心弃去上清，得到隐球菌荚膜多糖粗提物；S4：在所述隐球菌荚膜多糖粗提物中依次加入去离子水和氯化钠，得到第二混合液；S5：在所述第二混合液中加入十六烷基三甲基溴化铵，得到第三混合液，将所述第三混合液离心后得到第一沉淀；S6：在所述第一沉淀中依次加入氯化钠溶液和无水乙醇后离心并弃去上清，得到隐球菌荚膜多糖纯品。本发明能降低纯化制备成本，简化制备步骤和提高制备效率，且隐球菌荚膜多糖纯度高。

摘要： 本发明公开一种牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型荚膜多糖疫苗及其制备方法，属于兽用疫苗技术领域。提供的荚膜多糖疫苗由牛多杀性巴氏杆菌荚膜A型荚膜多糖和由包括精制司本‑80和精制吐温‑80的原料制成的疫苗佐剂配制而成，该荚膜多糖疫苗能够有效防控A型Pm引起的牛纤维素性化脓性肺炎，并且具有良好的安全性，可以用于为健康易感犊牛、健康孕期母牛以及健康产奶奶牛提供安全有效的防护作用。

摘要： 本发明公开了纯化荚膜多糖的方法，包括：将荚膜细菌发酵液离心，收集上清液，超滤浓缩，乙醇沉淀，收集上清液；乙醇沉淀，收集沉淀，注射水复溶；加入蛋白酶酶解，超滤蛋白酶解液；加入十六烷基三甲基溴化铵和NaCl，该NaCl的质量百分比终浓度为0.2％-0.3％，离心，收集上清液；加入十六烷基三甲基溴化铵和NaCl，该NaCl的质量百分比终浓度为0.1％-0.15％，离心，收集沉淀，溶解沉淀；加入乙醇沉淀，收集沉淀，注射水复溶；超滤，膜过滤。本发明的纯化方法荚膜多糖回收率高，蛋白质及核酸含量低，去除了传统提纯中利用有毒有机试剂的步骤，简化了纯化步骤，节省了时间和成本。

摘要： 本发明公开了一种分别定量细菌荚膜多糖和脂多糖的方法，属于生物技术领域。该方法包括利用物理方法将细菌样品的菌体外膜上的脂多糖释放出来，离心分别收集第一上清液和第一沉淀；将第一上清液去除蛋白和脂质杂质后，加入沉淀剂，得到脂多糖干粉，复溶得到脂多糖溶液，利用硫酸‑苯酚法定量脂多糖；将第一沉淀用清洗液洗涤后加入表面活性剂处理，离心收集第二上清液；将第二上清液去除蛋白和脂质杂质后，加入沉淀剂，得到荚膜多糖干粉；将荚膜多糖干粉加入低浓度盐酸复溶，室温孵育后，得到荚膜多糖溶液，利用糖醛酸内酯测定法定量荚膜多糖。该方法实现在不裂解细菌菌体的情况下同时分离并定量脂多糖和荚膜多糖，提高了纯度和准确度。

摘要： 本发明提供了一种检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中游离多糖含量的测定方法，所述方案包括以下步骤：分别向肺炎链球菌荚膜多糖和肺炎链球菌荚膜多糖对应的结合物加入脱氧胆酸钠溶液，并调节pH至2‑6，离心收集上清液；向肺炎链球菌荚膜多糖上清液中加入显色试剂，进行显色反应；向肺炎链球菌荚膜多糖对应的结合物上清液中加入显色试剂，进行显色反应；测定吸光度，计算游离多糖含量。本发明开发了一种分析成本低、操作简单的定量检测肺炎多糖结合物中游离多糖方法。

摘要： 本发明提供了一种检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中游离多糖含量的测定方法，所述方案包括以下步骤：分别向肺炎链球菌荚膜多糖和肺炎链球菌荚膜多糖对应的结合物加入脱氧胆酸钠溶液，并调节pH至2‑6，离心收集上清液；向肺炎链球菌荚膜多糖上清液中加入显色试剂，进行显色反应；向肺炎链球菌荚膜多糖对应的结合物上清液中加入显色试剂，进行显色反应；测定吸光度，计算游离多糖含量。本发明开发了一种分析成本低、操作简单的定量检测肺炎多糖结合物中游离多糖方法。

摘要： 本发明提供了在非病原性、非侵入性革兰氏阳性细菌中异源表达、产生和/或分泌复合荚膜多糖的方法和手段。特别地，本发明提供了能够表达和/或分泌来自病原性菌种的异源复合多糖的非病原性、非侵入性革兰氏阳性细菌。这样的细菌和其中产生的多糖可用于本发明以提供用于接种疫苗的组合物，以治疗和预防感染性细菌疾病。

摘要： 本发明一种肺炎链球菌荚膜多糖结合物中游离多糖含量的测定方法，属于生物技术领域，其步骤为取肺炎链球菌荚膜多糖结合物为样1，另取等量肺炎链球菌荚膜多糖结合物，加入无水乙醇和氯化钠，置－20°C70～90小时，离心去上清液；用适当溶剂充分洗涤沉淀，离心收集上清液，上清液经超滤脱盐和乙醇后为样2；以蒽酮法测定样1、样2的多糖含量，计算出肺炎链球菌荚膜多糖结合物中的游离多糖含量。本发明可准确、简便地测定出肺炎链球菌荚膜多糖结合物中游离多糖的含量。