磷脂酶D

摘要： 磷脂酶D(phospholipase D,PLD)可以催化磷脂的磷酸二酯键水解和转磷脂酰基反应,目前已广泛应用于化工和医药等行业。该研究利用交联酶聚集体(cross-linked enzyme aggregates, CLEAs)技术开发了一种新型的PLD交联聚集体固定化酶(PLD-CLEAs)。以酶活性回收率为指标,确定了PLD-CLEAs的最佳制备条件:饱和度60%的硫酸铵为沉淀剂,质量分数0.125%的戊二醛为交联剂,交联反应时间为1.5 h,此时PLD-CLEAs的酶活力回收率为118.8%。与游离酶相比,PLD-CLEAs最适pH值向中性偏移,由8.0变为7.0;且PLD-CLEAs在较宽的温度和pH范围内均保持较高的酶活性,在高温(50°C)下的热稳定性明显提高。另外,在重复使用10次后,PLD-CLEAs仍能保持50.4%的酶活性。研究结果表明,PLD-CLEAs具有比游离酶更优异的热稳定性、pH耐受性和重复使用稳定性,有良好的工业应用前景。

摘要： 为解决磷脂酶D酶活测定试验重复性差、成本高等问题,研究并改良测定磷脂酶D水解活性的方法。将反应体系分为解离和显色两个过程,通过对反应底物、反应条件的优化试验,确定最佳底物为蛋黄来源的卵磷脂,底物溶剂为80%乙醇,其中解离过程的最佳反应条件为温度37°C、pH5.5、时间10 min,金属离子助剂为10 mmol/L的CaCl2。

摘要： 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是一种新资源食品,在自然界中含量稀少,提取困难。磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)是生物酶法制备磷脂酰丝氨酸的关键合成酶。本文主要介绍了PLD的分子结构特点、催化机理及酶活特性,并总结了目前PS的制备方法,重点对PLD酶催化制备磷脂酰丝氨酸的研究进展及反应体系进行了论述,并对催化制备PS反应体系的选择进行了分析和展望,以期为深化酶法技术制备PS的研究提供参考,以此推动新资源食品PS的工业化生产和应用。

摘要： 该研究构建产磷脂酶D(phospholipase D,PLD)的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌,比较4个单启动子(P_(HpaⅡ)、_(Pylb(F4))、P_(2069m)、P_(43))对PLD酶活的影响,摇瓶发酵表明启动子P_(HpaⅡ)酶活最高,为0.32 U/mL。进一步以此工程菌作为发酵菌株,通过单因素试验和响应面试验,对该菌株产PLD的发酵条件进行优化。结果表明最佳产酶条件为接种量2.5 mL/dL、发酵温度37°C、硫酸铵质量浓度0.8 g/dL、甘油质量浓度1.94 g/dL、酵母粉质量浓度1.93 g/dL,在此发酵条件下发酵12.5 h,PLD的酶活达到0.85 U/mL,比出发菌株提高62.5%。同时,以环戊基甲醚作为有机相,柠檬酸-柠檬酸钠为水相,利用双相反应体系合成磷脂酰葡萄糖苷(phosphatidyl-glucose,PtdGlc)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)和磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol,PG),转化率分别为94.8%、94.0%和87.1%。结果表明,该研究构建的枯草芽孢杆菌工程菌经过发酵条件优化后,制备的PLD具有较好的转酯活性,显示出良好的应用潜力。

摘要： 实验室前期构建了重组链霉菌菌株S-pMS02用于高效分泌表达磷脂酶D(phospholipase D,PLD),但是其PLD产量依然难以满足大规模生产需求。为了进一步提高PLD产量,该研究对S-pMS02的最佳产酶条件进行了探索,并改进了制备工艺。结果显示,该菌株最适发酵产酶碳源为可溶性淀粉、氮源为硫酸铵酪蛋白氨基酸复合物,此外1.5 g/L的Mg^(2+)能显著提高PLD的产量。在接种孢子浓度为1×10^(5)个/mL,发酵温度为32°C,发酵6 d时PLD酶活力达到最高,为25.56 U/mL。通过在发酵制备过程中使用剪切搅散和保温装置,进一步将PLD产量提升至33 U/mL,为最初的2倍。该研究的结果为促进PLD的生产以及工业化应用奠定了基础。

摘要： 为了提升磷脂酰-N-乙酰氨基葡萄糖苷(PtdGlcNAc)的合成效率,选取不同的咪唑类离子液体,通过以磷脂酶D(phospholipase D,PLD)催化磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)与N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-acetyl-beta-D-glucosamine,GlcNAc)的转酯反应,探究离子液体预处理对酶催化性能的影响。结果表明,经过1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIm][PF_(6)])预处理后,PLD的活性明显高于其他离子液体组和空白组。因此,采用[BMIm][PF_(6)]作为PLD预处理的孵育溶液,通过优化实验,得到最佳反应条件为:1 U的加酶量,底物PC与GlcNAc的物质的量比为1:60,环戊基甲醚作为有机相,离子液体与水体积比为4:1,反应时间12 h,产率为79.7%,与未处理组的产率相比提升了56.9%。将合成的PtdGlcNAc制备成纳米脂质体,并对其结构进行了初步表征。该研究丰富了PLD反应体系的相关研究,为其他新型磷脂酰化合物的合成和应用提供了参考。

摘要： 磷脂酶D是一类酯键水解酶,能够生物转化卵磷脂生成磷酯酰丝氨酸,在食品及医药领域有重要应用.为高效获得磷脂酶D,实现生物转化生产磷酯酰丝氨酸,以前期获得的1株具有磷脂酶D活性的蜡状芽孢杆菌ZY12为发酵菌株,通过单因素试验,确定影响蜡状芽孢杆菌产生磷脂酶D的条件因素.结果表明,20 g/L蛋黄、2 mmol/L MgSO4·7H2 O、培养温度30°C、pH为7、培养时间36 h,磷脂酶D活性最高为82 mU/mL.同时研究发现,除蛋黄外,大豆卵磷脂、花生卵磷脂、葵花卵磷脂、水溶性卵磷脂均可诱导菌株ZY12产生磷脂酶D,葡萄糖、果糖、麦芽糖则会抑制磷脂酶D的产生.

摘要： 本研究探讨了(His)6-tag位置和N/C-末端截短对重组副溶血弧菌磷脂酶D(VpPLD)酶学特性的影响.研究发现:(His)6-tag位置对于VpPLD的活性有较大影响,其中(His)6-tag位于N-末端时测得酶活力最高,而位于C-末端时最低,且活性差异不依赖于水解底物.此外,(His)6-tag位于C-末端导致VpPLD的最适反应pH从7.0变为8.0;删除VpPLD成熟蛋白N-末端前34个氨基酸能显著增强VpPLD对1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰-L-丝氨酸(DMPS)的水解活性,但对于其他磷脂的水解活性并没有明显改变;删除VpPLD成熟蛋白C-末端肽段(469～487)会显著降低其对磷脂底物的催化活性;与(His)6-VpPLD-WT和(His)6-VpPLD-Δ469-487相比,(His)6-VpPLD-Δ451-487对1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(DPPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰-(l'-rac-甘油)(DMPG)和1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(DMPE)的选择性均显著降低,该结果表明C-末端肽段(451-469)对VpPLD的底物选择性发挥重要影响作用.以上结果表明,(His)6-tag的位置以及N/C-末端肽段对于重组副溶血弧菌磷脂酶D的催化活性和底物选择性具有重要影响作用.

摘要： 磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)是催化磷酸二脂键水解和碱基交换反应的一类酶的总称.生产中利用PLD的转酯作用来制备功能性磷脂.本文介绍了磷脂酶的分子结构、催化机理及功能,以及磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)的生产方法,包括物理萃取法、化学合成法和酶促合成法,酶促合成法是目前制备功能性磷脂最主要的方法.此外,对今后功能性磷脂的研究做了展望,期望可以通过改进技术条件、工艺体系来提高PLD的催化性能,为稀有磷脂的工业化生产提供理论及相关技术支持.

摘要： 为了探究磷脂酶D在辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)致病过程中的作用,从辣椒疫霉菌株LT1534中克隆到1个磷脂酶D基因,命名为PcPLD8.PcPLD8基因开放阅读框(ORF)长1596 bp,编码一个含531个氨基酸的蛋白质,相对分子质量为60689,理论pI为4.85,具有两个保守的HKD基序,不含信号肽,无跨膜区,亚细胞定位于细胞质,属于PLD-like磷脂酶D蛋白.定量PCR结果表明,PcPLD8在辣椒疫霉菌的萌发孢时期表达量最大,且侵染辣椒48和72 h时表达量显著升高.此外,异源表达PcPLD8明显增强辣椒疫霉菌对本氏烟的侵染.这些结果显示PcPLD8可能在辣椒疫霉菌的致病过程中发挥重要作用.

摘要： 磷脂酶D(PLD)同工酶PLD1和PLD2是多种细胞表面受体下游信号活化磷脂酸(PA)产生的主要来源之一,包括G蛋白偶联受体(GPCRs)、受体酪氨酸激酶(RTKs)和整合素.近年来在同工酶选择性PLD抑制剂和分子遗传学方面的研究进展表明,哺乳动物细胞和病原生物体中的PLD同工酶可能是治疗多种人类疾病的有价值的靶点.同工酶选择性抑制剂揭示了PtdOH生物合成途径与PA在病理生理学中的作用之间复杂的相互关系.PLD酶曾被认为是不可用药的,因为PA在细胞信号中无处不在,并且担心抑制剂对人类的毒性太大.然而，最近有前景的研究发现表明，小分子同工酶选择性抑制剂可能为治疗癌症的独特方法提供新的化合物。我将谈谈PLD在结直肠癌中的作用。我们的发现表明，PLD1介导多个主要信号通路之间的相互作用，以促进结肠癌细胞的生存和恶性行为，因此可能是治疗靶向的理想信号节点。

摘要： 磷脂酶D(PLD)同工酶PLD1和PLD2是多种细胞表面受体下游信号活化磷脂酸(PA)产生的主要来源之一,包括G蛋白偶联受体(GPCRs)、受体酪氨酸激酶(RTKs)和整合素.近年来在同工酶选择性PLD抑制剂和分子遗传学方面的研究进展表明,哺乳动物细胞和病原生物体中的PLD同工酶可能是治疗多种人类疾病的有价值的靶点.同工酶选择性抑制剂揭示了PtdOH生物合成途径与PA在病理生理学中的作用之间复杂的相互关系.PLD酶曾被认为是不可用药的,因为PA在细胞信号中无处不在,并且担心抑制剂对人类的毒性太大.然而，最近有前景的研究发现表明，小分子同工酶选择性抑制剂可能为治疗癌症的独特方法提供新的化合物。我将谈谈PLD在结直肠癌中的作用。我们的发现表明，PLD1介导多个主要信号通路之间的相互作用，以促进结肠癌细胞的生存和恶性行为，因此可能是治疗靶向的理想信号节点。

摘要： 磷脂酶D(PLD)同工酶PLD1和PLD2是多种细胞表面受体下游信号活化磷脂酸(PA)产生的主要来源之一,包括G蛋白偶联受体(GPCRs)、受体酪氨酸激酶(RTKs)和整合素.近年来在同工酶选择性PLD抑制剂和分子遗传学方面的研究进展表明,哺乳动物细胞和病原生物体中的PLD同工酶可能是治疗多种人类疾病的有价值的靶点.同工酶选择性抑制剂揭示了PtdOH生物合成途径与PA在病理生理学中的作用之间复杂的相互关系.PLD酶曾被认为是不可用药的,因为PA在细胞信号中无处不在,并且担心抑制剂对人类的毒性太大.然而，最近有前景的研究发现表明，小分子同工酶选择性抑制剂可能为治疗癌症的独特方法提供新的化合物。我将谈谈PLD在结直肠癌中的作用。我们的发现表明，PLD1介导多个主要信号通路之间的相互作用，以促进结肠癌细胞的生存和恶性行为，因此可能是治疗靶向的理想信号节点。

摘要： 磷脂酶D(PLD)同工酶PLD1和PLD2是多种细胞表面受体下游信号活化磷脂酸(PA)产生的主要来源之一,包括G蛋白偶联受体(GPCRs)、受体酪氨酸激酶(RTKs)和整合素.近年来在同工酶选择性PLD抑制剂和分子遗传学方面的研究进展表明,哺乳动物细胞和病原生物体中的PLD同工酶可能是治疗多种人类疾病的有价值的靶点.同工酶选择性抑制剂揭示了PtdOH生物合成途径与PA在病理生理学中的作用之间复杂的相互关系.PLD酶曾被认为是不可用药的,因为PA在细胞信号中无处不在,并且担心抑制剂对人类的毒性太大.然而，最近有前景的研究发现表明，小分子同工酶选择性抑制剂可能为治疗癌症的独特方法提供新的化合物。我将谈谈PLD在结直肠癌中的作用。我们的发现表明，PLD1介导多个主要信号通路之间的相互作用，以促进结肠癌细胞的生存和恶性行为，因此可能是治疗靶向的理想信号节点。

摘要： 在前期研究中,筛选到一株可以发酵产磷脂酶D的苍白杆菌-Ochrobactrum sp.ASAG-PL1,本文以其为出发菌株,在单因素实验的基础上,采用正交实验优化其发酵产磷脂酶D的条件,结果表明,发酵温度为30°C、培养基初始pH值为7.0、接种量为107、发酵84h后,粗酶液的酶活最高、可达7.35U,不同因素对Ochrobactrum sp.ASAG-PL1发酵产磷脂酶D的影响大小不同,顺序依次为:培养基初始pH值＞接种量＞温度＞发酵时间.

摘要： 在前期研究中,筛选到一株可以发酵产磷脂酶D的苍白杆菌-Ochrobactrum sp.ASAG-PL1,本文以其为出发菌株,在单因素实验的基础上,采用正交实验优化其发酵产磷脂酶D的条件,结果表明,发酵温度为30°C、培养基初始pH值为7.0、接种量为107、发酵84h后,粗酶液的酶活最高、可达7.35U,不同因素对Ochrobactrum sp.ASAG-PL1发酵产磷脂酶D的影响大小不同,顺序依次为:培养基初始pH值＞接种量＞温度＞发酵时间.

摘要： 在前期研究中,筛选到一株可以发酵产磷脂酶D的苍白杆菌-Ochrobactrum sp.ASAG-PL1,本文以其为出发菌株,在单因素实验的基础上,采用正交实验优化其发酵产磷脂酶D的条件,结果表明,发酵温度为30°C、培养基初始pH值为7.0、接种量为107、发酵84h后,粗酶液的酶活最高、可达7.35U,不同因素对Ochrobactrum sp.ASAG-PL1发酵产磷脂酶D的影响大小不同,顺序依次为:培养基初始pH值＞接种量＞温度＞发酵时间.

摘要： 在前期研究中,筛选到一株可以发酵产磷脂酶D的苍白杆菌-Ochrobactrum sp.ASAG-PL1,本文以其为出发菌株,在单因素实验的基础上,采用正交实验优化其发酵产磷脂酶D的条件,结果表明,发酵温度为30°C、培养基初始pH值为7.0、接种量为107、发酵84h后,粗酶液的酶活最高、可达7.35U,不同因素对Ochrobactrum sp.ASAG-PL1发酵产磷脂酶D的影响大小不同,顺序依次为:培养基初始pH值＞接种量＞温度＞发酵时间.

摘要： 为获取酶活力较高的磷脂酶D产品,以色褐链霉菌为出发菌株,采用摇瓶培养方式对其进行发酵,以接种量、装液量、培养时间为试验因素,从酶活力及菌体浓度两方面对磷脂酶D产量进行考察,通过单因素实验和正交实验,对该菌株发酵产磷脂酶D的条件进行优化,来提高产酶量进而提高酶活性.结果表明最佳产酶条件为接种量2.5％,装液量30％,培养时间5d.在最佳发酵条件下,酶活力达到0.685U/mL,是单因素培养确定最佳条件的1.60倍,优化成果明显提升.

摘要： 为获取酶活力较高的磷脂酶D产品,以色褐链霉菌为出发菌株,采用摇瓶培养方式对其进行发酵,以接种量、装液量、培养时间为试验因素,从酶活力及菌体浓度两方面对磷脂酶D产量进行考察,通过单因素实验和正交实验,对该菌株发酵产磷脂酶D的条件进行优化,来提高产酶量进而提高酶活性.结果表明最佳产酶条件为接种量2.5％,装液量30％,培养时间5d.在最佳发酵条件下,酶活力达到0.685U/mL,是单因素培养确定最佳条件的1.60倍,优化成果明显提升.

摘要： 本发明提供了具有磷脂酶活性的新型多肽，编码它们的核酸和与它们结合的抗体，所述磷脂酶活性包括，例如，磷脂酶A、B、C和D活性，马铃薯块茎蛋白活性，磷脂酸磷酸酶(PAP)和/或脂酰水解酶(LAH)活性。也提供包括应用这些磷脂酶的工业方法，如，油脱胶，以及包括应用这些磷脂酶的产品。

摘要： 本发明提供了一株表达磷脂酶C的菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8499。利用本发明所提供菌株和制备方法制备所得的磷脂酶C可以用于油脂精炼，脱胶效果良好，可以广泛应用于油脂精炼、添加剂、医药等领域。

摘要： 本发明提供了一种分离的表达磷脂酶C的地衣芽孢杆菌菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.7878。利用本发明所提供菌株和制备方法制备所得的磷脂酶C可以用于油脂精炼，脱胶效果良好，可以广泛应用于油脂精炼、添加剂、医药等领域。

摘要： 本发明提供了一种分离的表达磷脂酶C的短小芽孢杆菌菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.7879。利用本发明所提供菌株和制备方法制备所得的磷脂酶C可以用于油脂精炼，脱胶效果良好，可以广泛应用于油脂精炼、添加剂、医药等领域。

摘要： 本发明提供分离的、合成的或重组的核酸，由所述核酸编码的多肽，以及它们的应用。所述核酸包括本发明所述的核酸序列，编码具有磷脂酶活性的多肽。所述磷脂酶活性包括磷脂酶A、B、C和D活性，马铃薯块茎储藏蛋白活性，以及脂酰水解酶活性。一方面，所述核酸编码缺少天然前导(信号)序列的磷脂酶。另一方面，所述核酸还包括异源核苷酸序列。该异源核苷酸序列编码前导(信号)序列或催化结构域。所述前导(信号)序列或催化结构域包括磷脂酶前导(信号)序列或催化结构域，或非磷脂酶前导(信号)序列或催化结构，或酵母前导(信号)序列。

摘要： 本发明提供了具有磷脂酶活性的新型多肽，编码它们的核酸和与它们结合的抗体，所述磷脂酶活性包括，例如，磷脂酶A、B、C和D活性，马铃薯块茎蛋白活性，磷脂酸磷酸酶(PAP)和/或脂酰水解酶(LAH)活性。也提供包括应用这些磷脂酶的工业方法，如，油脱胶，以及包括应用这些磷脂酶的产品。

摘要： 本发明提供具有磷脂酶活性，包括，例如，磷脂酶A、B、C和D活性，马铃薯块茎储藏蛋白活性，脂酰水解酶(LAH)活性的新型多肽，编码它们的核酸和结合它们的抗体。也提供包括应用这些磷脂酶的工业方法，如，油脱胶，以及包括应用这些磷脂酶的产品。

摘要： 本发明提供了一种具有溶血磷脂酶和/或磷脂酶活力的蛋白。本发明提供的蛋白具有与SEQ ID NO：3、4、5、6或19所示序列，或与SEQ ID NO：3、4、5、6或19所示序列具有至少90％同源性，且所述蛋白源自黑曲霉。本发明的蛋白不仅可以作为磷脂酶和/或溶血磷脂酶，而且，还可以用于同时需要磷脂酶和溶血磷脂酶的应用，例如，可以应用于L‑α‑甘油磷酸胆碱的制备。

摘要： 本发明公开了一种肉桂链霉菌产磷脂酶D的方法及磷脂酶D活性测定方法，属于食品生物技术领域。本发明通过筛选获得一株高产磷脂酶D的链霉菌，分类命名为肉桂链霉菌SP.005，保藏编号为CCTCC M 2019558。通过对该肉桂链霉菌进行斜面、种子、发酵三级培养，并在此条件下，生产磷脂酶D酶，经酶活测定方法，其酶活可达15.66U/mL以上，最后将发酵液经分离纯化制得磷脂酶D酶粉。该生产工艺不仅有效地提高了产量，且所生产出的磷脂酶D具有较高的磷酰基转移活性，可用于进行磷脂酰丝氨酸的高效生产。

摘要： 本发明公开了一种磷脂酶D的生产工艺以及磷脂酶D制品，涉及酶制剂领域。本发明提供的磷脂酶D的生产工艺采用含有葡萄糖4.5‑5.5g/L、蛋白胨4.5‑5.5g/L、酵母浸粉4.5‑5.5g/L、柠檬酸三钠4.5‑5.5g/L、KH2PO4 1.8‑2.2g/L以及MgSO4 0.48‑0.52g/L，pH6.8‑7.2的发酵培养液对链霉菌属菌株进行发酵培养生产磷脂酶D，该生产工艺通过发酵环节的液体发酵培养基和发酵参数进行优化配置，得到链霉菌属菌株发酵的最佳条件，该生产工艺不仅有效地提高了产量，且所生产出的磷脂酶D具有较高的酶活性。