肿瘤相关成纤维细胞

摘要： 背景:肿瘤相关成纤维细胞系是构成肿瘤微环境的重要细胞成分,但是在原代培养过程中极易老化和表型丢失,进而显著降低肿瘤相关成纤维细胞功能相关研究的实验重复性.目的:旨在建立一种永生化的口腔癌相关成纤维细胞系,为探索口腔癌中肿瘤相关成纤维细胞功能提供稳定的细胞实验材料.方法:采用酶消化法分离、纯化人口腔癌组织来源肿瘤相关成纤维细胞,利用包装有人端粒酶反转录酶(pBABE-hygro-hTERT)的慢病毒感染原代肿瘤相关成纤维细胞,鉴定其形态及其标志物,然后进行细胞增殖、衰老功能检测,对原代和永生化肿瘤相关成纤维细胞进行染色体核型分析、细胞系身份鉴定.结果 与结论:①成纤维细胞永生化后,其标志物α-SMA、PDGFRβ以及FSP-1表达没有发现显著改变;②即使在传代15代后,永生化成纤维细胞的增殖速率明显优于非永生化成纤维细胞;③β-半乳糖苷酶染色结果显示:随着细胞代数增加,与非永生化成纤维细胞相比,永生化成纤维细胞未见明显衰老;④永生化成纤维细胞染色体核型仍保留正常细胞的基本特征,而未发生恶性转化;⑤短串联重复序列鉴定结果显示,永生化成纤维细胞为原代细胞,与已知细胞数据库信息均无重合;⑥以上结果说明,成功建立了口腔癌来源的永生化成纤维细胞系,为口腔癌肿瘤微环境研究提供进一步的实验基础.

摘要： 目的研究喉癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)外泌体miR-34c-5p对喉癌细胞体外干细胞样生物学特性的调控作用。方法喉癌CAFs外泌体中的miR-34c-5p为低表达,将其过表达后收集不同miR-34c-5p表达水平CAFs培养液上清中的外泌体,制备不同外泌体条件培养基(CM)母液,将不同培养基母液加入到喉癌细胞培养液中,观察其对喉癌细胞体外增殖、侵袭、无血清球体形成及平板克隆形成等干细胞样生物学特性的影响,并进一步检测肿瘤干细胞相关基因表达水平的变化。结果喉癌CAFs外泌体CM能够明显增强喉癌细胞的体外增殖、侵袭、无血清球体形成及平板克隆形成能力,同时上调肿瘤干细胞相关基因表达水平;而将CAFs的miR-34c-5p过表达后,其外泌体CM促进喉癌细胞以上干细胞样生物学特性的作用明显减弱。结论喉癌CAFs外泌体miR-34c-5p表达下调对于喉癌细胞体外干细胞样生物学特性的维持至关重要,可作为潜在的阻断治疗靶点。

摘要： 目的:探讨烟酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)在肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中的表达。方法:分别采用条件培养基(CM)和Transwell小室两种共培养模式建立CAFs体外诱导模型,将人胚肺成纤维细胞MRC-5与鼻咽癌细胞系5-8F共培养48 h,显微镜下观察细胞形态学变化。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测NNMT及CAFs相关标志物[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)及波形蛋白(Vimentin)]基因表达,CCK-8法检测细胞增殖能力。分离纯化头颈肿瘤来源CAFs,RT-qPCR和Western blotting法检测CAFs相关标志物及NNMT的表达。结果:两种共培养模式均能成功诱导并上调MRC-5细胞中NNMT、α-SMA、FAP、FSP-1、Vimentin基因表达(P<0.05),其中Transwell小室共培养模式诱导效果较好。鼻咽癌细胞系5-8F-CM亦能促进MRC-5细胞生长;头颈肿瘤来源的CAFs中FAP、FSP-1、Vimentin、IL-6、NNMT表达量均升高(均P<0.05)。结论:Transwell小室共培养模式是体外诱导CAFs形成的良好建模方式,NNMT在CAFs中的表达上调。

摘要： 乳腺癌是一种具有异质性的全身性疾病。已知肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)是肿瘤微环境中最重要的异质细胞群,其与乳腺癌的进展呈正相关。CAFs存在多种表型和功能性群体,这可能与其自身高度的异质性有关。作为肿瘤微环境的重要组成部分,CAFs在乳腺癌进展中起主导作用。CAFs通过分泌多种细胞因子及外泌体参与上皮-间充质转化及细胞外基质重构,也可通过激活多种相关信号通路促进乳腺癌细胞的代谢、生长、侵袭、进展、转移和耐药等,因此以CAFs为靶标进行抗肿瘤治疗具有良好的应用前景。

摘要： 肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)和肿瘤浸润性免疫细胞是肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中重要的组成成分。二者在肿瘤微环境中相互通信,在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用。CAFs具有很大的异质性,不同的CAFs亚群存在着不同的功能。同时其又可以通过分泌多种细胞因子、趋化因子等方式实现对肿瘤浸润性免疫细胞的调节,从而进一步影响肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等生物学行为。本文对国内外近年来有关CAFs在TME中对浸润性免疫细胞调节作用的研究现状作一综述。

摘要： 目的:探究胃癌外泌体miR-221对肿瘤相关成纤维细胞的影响及机制。方法:提取并鉴定人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌MGC-803、MKN45细胞分泌的外泌体(GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo),qRT-PCR检测miR-221在GES-1、MGC-803、MKN45及其外泌体中的表达,将10μg/mL GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo以及等体积的PBS与人成纤维细胞(HKF)共孵育后,qRT-PCR检测HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达,ELISA检测细胞上清中IL-1β、IL-6的浓度。双荧光素酶报告基因实验检测miR-221与PTEN的靶向关系,将10μg/mL miR-NC exo和miR-221 exo与HKF共孵育,将miR-221 exo与HKF共孵育后转染PTEN质粒(miR-221 exo+PTEN),然后检测上述HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达以及细胞上清中IL-1β、IL-6的浓度。结果:本研究所提取的外泌体符合其结构和生物学特征,miR-221在MGC-803、MKN45和MGC-803 exo、MKN45 exo中高表达。与PBS组比较,MGC-803 exo组和MKN45 exo组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著上调(均P<0.001),细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著增加(均P<0.001),双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-221的靶基因。与miR-NC exo组比较,miR-221 exo组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著上调(均P<0.001),细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著增加(均P<0.001);与miR-221 exo组比较,miR-221 exo+PTEN组HKF细胞中MMP-9、α-SMA、Fibronectin、Vimentin、IL-1β、IL-6表达显著下调(均P<0.001),细胞上清中IL-1β和IL-6的浓度显著降低(P<0.001)。结论:胃癌外泌体miR-221抑制PTEN表达而促进肿瘤相关成纤维细胞的生成。

摘要： 目的探讨干扰素-γ消除肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)介导的非小细胞肺癌细胞辐射抵抗的效果。方法从2020年12月至2021年6月温州市中心医院胸外科行根治性切除的15例肺癌患者临床标本中提取CAFs,通过流式细胞术、HE染色、免疫组化对分离出的CAFs进行鉴定。将肺腺癌细胞A549和肺鳞癌细胞H460置于直线加速器中辐射。采用Transwell和CAFs细胞上清液培养两种方法对CAFs与辐射后的A549和H460共培养,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡占比,CCK-8法检测肿瘤细胞活性;高效液相色谱法检测CAFs细胞上清液中谷胱甘肽(GSH)、半胱氨酸、胱氨酸水平;Western blot检测CAFs细胞内胱氨酸转运蛋白xCT、肿瘤细胞内DNA损伤修复蛋白γH2AX、信号传导及转录激活蛋白1(STAT1)表达情况。结果CAFs与辐射后肿瘤细胞共培养后,辐射后肿瘤细胞凋亡占比下降,细胞活性增加;CAFs提高了肿瘤细胞内GSH水平,而干扰素-γ降低CAFs细胞上清液中GSH、半胱氨酸水平,提高胱氨酸水平,进而减少肿瘤细胞活性;干扰素-γ下调xCT在CAFs中表达,干扰素-γ作用后CAFs组的肿瘤细胞中γH2AX表达相应增加,CAFs细胞内STAT1获得激活并使其成为磷酸化STAT1。结论CAFs通过释放GSH来诱导非小细胞肺癌细胞对辐射抵抗,而干扰素-γ则下调xCT在CAFs中表达,进而消除其介导的辐射抵抗。

摘要： 胃癌是世界范围内发病率及死亡率位居前五的恶性肿瘤,是影响人类生命健康的主要癌症之一。胃癌的发生发展离不开其所处的肿瘤微环境。肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤微环境中重要的组成部分,与肿瘤的发生、发展及治疗均有密切联系。本研究介绍了肿瘤相关成纤维细胞在胃癌中的来源和异质性,回顾了其在胃癌发生发展及治疗中的作用及最新研究进展,以期为胃癌发生发展机制研究及治疗提供新思路。

摘要： 肾细胞癌(RCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤,远处转移是晚期肾癌患者死亡的主要原因。靶向药物的问世大大改善了晚期肾癌患者的预后,但几乎所有患者最终都会产生耐药。近年来,随着免疫检查点抑制剂的问世,基于肿瘤微环境(TME)的免疫治疗展示出了广阔的应用前景。同时,人们对TME认识的深入让晚期肾癌生物治疗方式发生了转变,使得靶向治疗联合免疫治疗的策略在晚期肾癌治疗领域显示出强大的生命力。因此,本文对肾癌TME的特点以及基于TME的潜在预测性生物标志物和治疗靶点进行综述。

摘要： 目的应用生物信息学分析鉴定膀胱癌免疫治疗中起关键作用的肿瘤微环境(TME)组成特征,初步分析这些组分在人膀胱癌组织和BBN(N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine)诱导的自发小鼠膀胱肿瘤中表型的相似性。方法分析晚期膀胱癌PD-L1阻断治疗IMvigor210数据集,利用DESeq2筛选与疗效相关的差异基因,通过GO和KEGG通路富集分析找出差异富集的通路;采用IOBR分析TME中的细胞浸润特征。通过TCGA数据库分析差异浸润细胞基因集与膀胱癌预后和分期的关系,在我院32例膀胱癌组织标本中进行免疫组化验证。建立BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤模型,通过H&E染色和免疫组化对BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤和人膀胱癌进展相似性及其TME主要组分进行比较。结果在IMvigor210数据集中存在521个与免疫治疗疗效相关的差异基因,其中44个差异基因富集在含胶原细胞外基质上,提示成纤维细胞与免疫治疗疗效相关。TME分析发现细胞周期、组蛋白等肿瘤细胞基因集与NK细胞、CD8^(+)T细胞基因集在膀胱癌免疫治疗有效组中富集,而炎症性肿瘤相关成纤维细胞基因集在免疫治疗无效组中富集。TCGA分析显示:NK细胞和CD8^(+)T细胞基因集与膀胱癌患者总体生存时间呈正相关,CD56表达与膀胱癌病理分期呈正相关;PDGFRB表达与膀胱癌病理分期呈正相关。相比于低分期膀胱癌,PDGFRB^(+)成纤维细胞在高分期膀胱癌中数量更多。在BBN小鼠模型中,BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤发生率随着诱导时间逐渐升高,最终发展为肌层浸润性膀胱癌。免疫组化染色显示:小鼠和人膀胱肿瘤的TME中NK细胞和CD8^(+)T细胞以及成纤维细胞的浸润特征相似。结论本研究结合生信分析和免疫组化评分发现:膀胱癌中NK细胞、CD8^(+)T细胞和成纤维细胞与免疫治疗疗效和预后具有相关性;这些细胞在BBN诱导的自发小鼠膀胱肿瘤与人膀胱癌组织中的浸润表型相似。这些结果可为研究膀胱癌免疫治疗的机制提供理论依据和动物模型。

摘要： 研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响,初步探讨CAFs在口腔鳞癌发生发展中的作用.

摘要： 近年来,发现肿瘤微环境在肿瘤发生发展过程中发挥着,而肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为间质最主要的成分,在肿瘤生长、扩散、转移中起到了不可忽视的作用.CAF通过分泌大量生长因子促进肿瘤的生长和血管形成,促进肿瘤细胞的浸润和转移.反过来,肿瘤细胞也能够通过反馈调节促进成纤维细胞的活化.另外,CAFs成为肿瘤靶向治疗的新目标,为临床肿瘤综合治疗提供了新的思路.

摘要： 肿瘤所处的微环境(Tumor Microenvironment,TME)包含了各种细胞、细胞因子和细胞外基质成分.TME是机体与肿瘤相互作用的主要场所,不仅反映了肿瘤的特性,同时也深刻地影响了肿瘤的发生和发展.对TME的组成及各种成分的作用进行研究,有望找到通过TME干预肿瘤的新方法.

摘要： 肿瘤所处的微环境(Tumor Microenvironment,TME)包含了各种细胞、细胞因子和细胞外基质成分.TME是机体与肿瘤相互作用的主要场所,不仅反映了肿瘤的特性,同时也深刻地影响了肿瘤的发生和发展.对TME的组成及各种成分的作用进行研究,有望找到通过TME干预肿瘤的新方法.

摘要： 肿瘤所处的微环境(Tumor Microenvironment,TME)包含了各种细胞、细胞因子和细胞外基质成分.TME是机体与肿瘤相互作用的主要场所,不仅反映了肿瘤的特性,同时也深刻地影响了肿瘤的发生和发展.对TME的组成及各种成分的作用进行研究,有望找到通过TME干预肿瘤的新方法.

摘要： 肿瘤所处的微环境(Tumor Microenvironment,TME)包含了各种细胞、细胞因子和细胞外基质成分.TME是机体与肿瘤相互作用的主要场所,不仅反映了肿瘤的特性,同时也深刻地影响了肿瘤的发生和发展.对TME的组成及各种成分的作用进行研究,有望找到通过TME干预肿瘤的新方法.

摘要： 肿瘤所处的微环境(Tumor Microenvironment,TME)包含了各种细胞、细胞因子和细胞外基质成分.TME是机体与肿瘤相互作用的主要场所,不仅反映了肿瘤的特性,同时也深刻地影响了肿瘤的发生和发展.对TME的组成及各种成分的作用进行研究,有望找到通过TME干预肿瘤的新方法.

摘要： 肿瘤所处的微环境(Tumor Microenvironment,TME)包含了各种细胞、细胞因子和细胞外基质成分.TME是机体与肿瘤相互作用的主要场所,不仅反映了肿瘤的特性,同时也深刻地影响了肿瘤的发生和发展.对TME的组成及各种成分的作用进行研究,有望找到通过TME干预肿瘤的新方法.

摘要： 本发明公开了一种淋巴结来源淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞株，来源于人淋巴瘤细胞裸鼠移植瘤模型中的淋巴结微环境，其细胞名称为小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF‑KLN，保藏编号为CCTCC NO：C2021107，保藏日期为2021年12月09日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。该细胞株为国内外首次建立的淋巴结来源淋巴瘤相关小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株，可在构建小鼠成纤维细胞肿瘤动物模型、恶性淋巴结微环境模型、3D肿瘤培养体系和类器官体系模型、淋巴结微环境与淋巴瘤进展和耐药的关系模型中应用。

摘要： 本发明公开了一种小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF‑KT及其应用，该细胞株来源于人淋巴瘤细胞裸鼠移植瘤模型中的瘤体组织微环境，其细胞名称为小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF‑KT，保藏编号为CCTCC NO：C2021105，保藏日期：2021年12月09日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。该细胞株为国内外首次建立的源自移植瘤体的淋巴瘤相关小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株，可在构建小鼠成纤维细胞肿瘤动物模型、淋巴瘤微环境模型、3D肿瘤培养体系和类器官体系模型以及淋巴瘤细胞所导致的成纤维细胞肿瘤化生的机制模型等的应用。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 本发明公开了一种使用电磁射线治疗各种皮肤病的方法。尤其优选窄带、多色电磁射线发射器，该发射器的主发射波长对应于被对准治疗的哺乳动物组织的峰值吸收波长。还公开了一种局部成分，用于对被对准的组织进行预处理以改变该组织的峰值吸收波长。

摘要： 本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种具有肿瘤细胞和肿瘤相关成纤维细胞双靶向功能的药物载体、制备方法及应用。本发明提供的具有肿瘤细胞和肿瘤相关成纤维细胞双靶向功能的药物载体含有通过酰基相连的透明质酸和Z‑甘氨酸‑脯氨酸，其中透明质酸能够靶向肿瘤细胞表面的CD44受体，当所述药物载体装载抗肿瘤组分时，能够促进抗肿瘤组分向肿瘤中心的快速迁移；而双肽Z‑甘氨酸‑脯氨酸能够靶向肿瘤相关成纤维细胞表面的FAPα受体，使得当肿瘤组织纤维化后，肿瘤细胞被成纤维细胞阻碍时，药物载体仍然能够精准靶向肿瘤中心。

摘要： 本发明提供靶向肿瘤相关成纤维细胞的两亲性葡聚糖衍生物载体及其药学组合物的制备和应用，包括亲水性葡聚糖羧基修饰后的衍生物骨架、FAP‑α响应的肽段连接臂和疏水基分子。该两亲性衍生物在水性溶液自组装形成纳米粒，并可以物理装载具有药理活性的分子用于肿瘤治疗。其主要特征在于：1）纳米粒到达病灶部位后，特定的肽段连接臂可被肿瘤相关成纤维细胞表面特异性高表达的FAP‑α酶切，从而使纳米粒被快速降解；2）通过物理装载的药理活性分子从解体的纳米粒中快速释放，能够有效杀死或抑制肿瘤相关成纤维细胞功能，从而削弱肿瘤基质物理屏障，和其他抗肿瘤制剂联用，有助于促进抗肿瘤制剂的渗透，从而有效提高抗肿瘤制剂的治疗效果。

摘要： 本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种具有肿瘤细胞和肿瘤相关成纤维细胞双靶向功能的药物载体、制备方法及应用。本发明提供的具有肿瘤细胞和肿瘤相关成纤维细胞双靶向功能的药物载体含有通过酰基相连的透明质酸和Z‑甘氨酸‑脯氨酸，其中透明质酸能够靶向肿瘤细胞表面的CD44受体，当所述药物载体装载抗肿瘤组分时，能够促进抗肿瘤组分向肿瘤中心的快速迁移；而双肽Z‑甘氨酸‑脯氨酸能够靶向肿瘤相关成纤维细胞表面的FAPα受体，使得当肿瘤组织纤维化后，肿瘤细胞被成纤维细胞阻碍时，药物载体仍然能够精准靶向肿瘤中心。

摘要： 本发明属生物医学领域，涉及一种基于肿瘤细胞与肿瘤相关成纤维细胞的3D共培养模型。本发明将肿瘤细胞使用绿色荧光蛋白标记，肿瘤相关成纤维细胞使用红色荧光蛋白标记，将两种细胞通过使用制备的甲基纤维素凝胶培养基构建3D共培养模型。本发明制备的3D模型模拟了体内肿瘤的缺氧环境，并通过将肿瘤细胞与肿瘤相关成纤维细胞共培养构建了体内肿瘤微环境内两种细胞之间相互促进的效果本发明的肿瘤细胞与肿瘤相关成纤维细胞构成的3D共培养模型不仅模拟了体内肿瘤缺氧的环境，提供了与体内肿瘤微环境类似效果，具有基础研究以及临床药物应用前景。

摘要： 本发明属于核医学领域，涉及靶向肿瘤相关成纤维细胞激活蛋白的化合物及其制备方法和应用与靶向FAP的肿瘤显影剂。所述靶向肿瘤相关成纤维细胞激活蛋白的化合物化学结构式如式I所示。本发明提供的Al18F标记的靶向FAP的肿瘤显影剂，是正电子核素18F标记的放射性示踪剂Al18F‑NOTA‑FAPI，体内外稳定性好，FAP特异性高，显像效果好，可将其作为广谱肿瘤显影剂，用于临床PET/CT及PET/MRI显像，以对肿瘤患者进行诊断和肿瘤治疗效果评价。

摘要： 本发明属于生物医学技术领域，具体公开了一种靶向肿瘤相关成纤维细胞的核酸适配体及其应用。所述核酸适配体序列为5’‑AGCGTGGAGGATAATTAGGCATCCGTTCCGCCTAGGAAATTATTCAATCTACGC‑3’。本发明所述核酸适配体对肿瘤相关成纤维细胞具有高特异性、高亲和力，可将其作为分子探针用于肿瘤相关成纤维细胞的成像，可将其作为药物载体，参与靶向给药系统中的药物的靶向运输和定点释放，可进行肿瘤相关成纤维细胞特异性靶分子的鉴定及功能研究。本发明所述核酸适配体在4°C，37°C均能保持良好活性，在进行肿瘤相关成纤维细胞的研究和检测中，具有操作简便、成本低、周期短、准确性高等优点。