胚胎发生

摘要： 芸薹属蔬菜种质资源丰富,是中国蔬菜产业的重要组成部分。游离小孢子培养是创造单倍体和双单倍体的重要途径,对提高芸薹属蔬菜的育种效率具有重要意义。为了研究芸薹属蔬菜游离小孢子的高效培养体系,归纳了植物材料、预处理方式、培养基成分、培养密度、高温热激、植株再生、植株的倍性鉴定与加倍等多个因素对小孢子培养的影响,提出了可通过优化培养体系、遗传转化和共培养等方式提高芸薹属蔬菜小孢子培养效率的观点。

摘要： 为了建立栓皮栎体胚遗传转化体系,以未成熟合子胚诱导的体胚为转化受体,采用带有pCAMBIA1301质粒的根癌农杆菌菌株EHA105,其中含有hptⅡ和GUS基因,研究不同因子对遗传转化的影响.结果表明:选择培养中适宜的抗生素浓度为300 mg/L头孢霉素和30 mg/L潮霉素.预培养时间为15 d时,转化率达91.7％;菌液浓度为OD600=0.5,乙酰丁香酮浓度为200μmol/L时,转化率可达100％.在添加潮霉素的选择培养基中培养4周后,组织化学染色和PCR检测证实,GUS报告基因已经转入到体胚中并正常表达.

摘要： 一、发生学方法的基本意蕴(一)发生学方法是一个移植型的方法,需要改造完善发生学方法源于生物学关于胚胎发生、物种起源的探索,尤其是诸如遗传、繁殖等问题的研究,后来,逐步被运用到自然科学其他领域,成为一种追根溯源的普遍性研究方法。随着科学主义、理性主义、实证主义思潮的兴起和发展,人文社会科学研究大量借鉴自然科学的研究方法,发生学方法逐步被移植到人文社会科学研究领域。在这种移植的过程中,研究对象的性质发生根本改变,因此,发生学方法的内涵和形态也随之改变。尤其是当研究对象从“物性”事物转变为“人性”事物时,发生学方法的复杂性、系统性就会更加凸显,必须进行因地制宜的改造,否则,就会因机械套用造成物性化偏差。

摘要： 游离小孢子培养技术是快速创制连州菜心双单倍体纯系的一条有效途径,为建立高效的连州菜心小孢子培养体系,应用于优势杂交育种实践,以引进的3个广东省连州市地方菜心品种迟熟连州菜心(17AY007)、连州尺寸心(17AY008)和连州尖叶迟菜心(17AY009)为试材进行小孢子培养,研究不同基因型和植物生长调节剂(芸薹素内酯,BR及噻苯隆,TDZ)对小孢子胚胎发生及植株再生的影响,并对获得的连州菜心小孢子再生植株进行倍性鉴定.结果表明:3个不同基因型连州菜心的小孢子胚胎发生率无显著差异;在NLN-13培养基中添加适宜浓度的BR或TDZ可显著提高连州菜心小孢子胚胎发生率和直接成苗率,其中,当BR浓度为0.04mg·L-1时,17AY007和17AY009的胚诱导率和直接成苗率均达到最高(2.38胚·蕾-1,72.82％;2.83胚·蕾-1,54.62％);当TDZ浓度为0.1mg·L-1和0.2mg·L-1时,17AY007的胚诱导率和直接成苗率分别达到最高(2.67胚·蕾-1,57.76％);TDZ浓度为0.3mg·L-1时,17AY009的胚诱导率和直接成苗率均达到最高(2.42胚·蕾-1,57.36％);3种连州菜心再生植株的双单倍体率均在56％以上,其中,17AY007双单倍体率最高,为64.29％.综上,创制了双单倍体植株42株,为连州菜心优势杂交育种奠定了材料基础.

摘要： 为拓展可再生陆地棉的基因型,利用转基因技术直接改良已有的优良早熟棉品种,设置不同浓度的2,4-D和激动素(KT)4种组合进行诱导,成功获得体细胞胚和再生植株,构建早熟棉品种‘中棉所16’再生体系.研究表明:诱导初生愈伤组织以添加0.1 mg/L 2,4-D、0.1 mg/L KT的组合诱导培养基效果最佳,愈伤组织形态较好,有利于撤除激素的胚胎发生和植株再生;‘中棉所16'胚胎发生状态只有1种,在去掉2,4D和KT的第一次继代便开始分化出白灰色粗颗粒胚性愈伤组织,继代1～2次后有胚状体出现和植株再生,整个再生过程需要6～8个月.经过2次组培获得再生系,其不同株系胚胎发生率均有不同程度的明显提高.随后获得后代种子100％可再生纯合系材料,经过进一步自交扩繁,其后代种子用于转化受体,提高了转化和再生效率,并利用该体系将EDT1基因成功导入‘中棉所16’基因组.以9个月为限统计,其遗传转化胚胎发生率高达40％以上.

摘要： 为研究辣椒小孢子胚胎发生机理,以甜椒品种晋椒203为试验材料进行小孢子培养,制作培养0,3,7,15 d的花药石蜡切片,利用番红-固绿、碘-碘化钾和考马斯亮蓝3种染色液分别对小孢子的细胞质、淀粉粒和蛋白质染色.结果表明:高温诱导3d后,小孢子体积明显膨大,细胞核移向中央.少数小孢子分裂产生大小、结构特征相等的两个细胞,进而增殖形成多细胞结构.起初具有胚性的小孢子内积累了大量淀粉,随着分裂的进行,有些多细胞结构内会沉积较多的淀粉,也有些多细胞结构没有淀粉积累,不被碘-碘化钾染色.具有胚胎发生能力的小孢子中蛋白质含量减少.这些变化必然影响辣椒小孢子胚状体的产生.

摘要： 为进一步优化不结球白菜游离小孢子培养技术体系,本研究以20个不同基因型的不结球白菜为试验材料,研究不同基因型、4°C低温胁迫处理时间和头孢噻胯浓度对游离小孢子胚胎发生的影响,并对小孢子胚胎发育和再生过程进行观察和倍性鉴定。结果表明,当花瓣/花药(P/A)长度比值为0.85～1.10时,不结球白菜小孢子主要处于单核晚期;共有10个基因型不结球白菜出胚,其中出胚率最大的为H20,平均出胚率为7.75胚·10蕾^(-1);4°C低温胁迫处理1 d时不结球白菜出胚率最高;头孢噻胯对不结球白菜出胚率的影响与基因型密切相关;从胚状体到再生幼苗阶段,不结球白菜基因型不同,其胚胎再生频率也不同;倍性鉴定共检测出21个双单倍体和2个单倍体,自然加倍率为91.3%,不结球白菜植株形态表现出明显的多样性。本研究结果为不结球白菜游离小孢子高效培养体系的优化提供了一定的技术支撑。

摘要： [目的]本文旨在研究不结球白菜BcSERK1基因及其在胚胎发生中的作用。[方法]采用同源克隆的方法从不结球白菜‘二桩白’中克隆到BcSERK1基因全长序列,利用生物信息学分析其结构特征,并与其他物种进行氨基酸序列比对和进化分析,同时利用基因枪介导的方法进行亚细胞定位;利用小孢子培养技术研究不结球白菜‘二桩白’和‘四九菜心’小孢子培养出胚情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析BcSERK1基因在2个品种不同组织和在小孢子胚胎发生早期的表达特征。[结果]BcSERK1含有1个1 878 bp开放阅读框,编码625个氨基酸。与其他物种的氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示:BcSERK1在进化过程中保守程度较高,与甘蓝型油菜亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示:BcSERK1蛋白定位于细胞膜上。游离小孢子培养结果显示:‘二桩白’出胚率较高,每蕾6.67个胚,而‘四九菜心’不出胚。RT-qPCR结果表明:BcSERK1在2个品种不同组织中均有表达,除根外‘四九菜心’的组织中其表达量均低于‘二桩白’;在小孢子胚胎发生早期,BcSERK1基因在‘二桩白’不同培养时间的表达量均高于‘四九菜心’。[结论]BcSERK1蛋白在进化过程中保守性较高,定位于细胞膜上;SERK1基因在2个不结球白菜品种中的差异表达表明该基因对胚胎发生具有重要作用。

摘要： 为提高芜菁游离小孢子的出胚率,以新疆柯坪县当地农家品种阿恰芜菁为供试材料,在已确定花蕾大小与小孢子发育时期的特定关系之后,选取处于单核靠边期的花蕾(2.00～3.00 mm)进行游离小孢子培养,研究不同处理方法对芜菁游离小孢子出胚率及胚质量的影响.结果表明:芜菁游离小孢子在NLN-13培养基中加入0.2 mg/LNAA,经33°C热激处理24 h后出胚率最高,为8.6胚/蕾,其中形成的子叶形胚比率最高,达72.1％.在添加激素的培养基中,胚胎的发育并不完全,且产生较多的畸形胚,很多胚状体停滞在鱼雷形胚与球形胚阶段不再继续生长.将小孢子胚接种于B5+0.2 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA固体培养基上,胚状体逐渐转绿并开始萌发,胚状体萌发后形成较多幼芽.然后将幼芽转入B5+ 0.2 mg/L NAA生根培养基上可以生根,形成完整植株.

摘要： 为了进行体细胞杂交和基因工程改造的尝试,采用10mL酶解液处理12h,1g鲜重叶片游离出4.5~5.9×106个原生质体,生活率达78%~85%.原生质体分别用3种培养基进行培养,以软化菊苣种子无菌苗的叶片为起始材料进行了叶肉原生质体分离、培养和植株分化的研究,并建立高频率的植株再生系统.结果表明:最适合培养基为改良K M P,原生质体的分裂率和植板率分别达到48.0%和27.5%.同时对原生质体培养的时间长度与愈伤组织的胚胎发生能力及植株分化频率进行了试验比较,培养时间28~41 d为最佳时间,愈伤组织的胚性(81.2%)和分化率(70.9%)最高;培养时间42~55 d,胚性愈伤及植株分化的比例分别为55.0%和45.2%;培养时间56~69 d,愈伤组织的胚性(22.5%)和分化率(16.5%)较差.原生质体再生植株在不含激素的1/2M S培养基上,部分植株直接生根,未生根植株转至1/2M S+IBA 0.3 mg·L-1+0.1%活性碳可以生根.

摘要： 游离小孢子培养即小孢子在外界胁迫诱导的条件下,从其配子体发育途径转向孢子体发育途径,从而诱导小孢子胚胎发生的过程.采用多种染色方法对结球甘蓝小孢子游离培养中的小孢子发育过程及特征进行了观察,并对其体内配子体发育途径和体外孢子体发育途径进行了比较分析.结果表明,小孢子正常发育方向是通过不对称核分裂后发育成三核花粉,而单核靠边期小孢子在体外经32.5°C热激胁迫24h后,小孢子绝大部分死亡,培养3d后小孢子死亡率达到90％左右.结球甘蓝游离小孢子培养胚胎发生途径以B途径为主:第一次分裂为对称分裂,其后两个核进行反复分裂形成多细胞团,多细胞团从孢子壁中被释放出来,依次经历球形胚、心形胚、鱼雷胚,直至子叶胚的形成.除了以上典型B途径外,培养过程中还同时存在多种发育途径:第一次不对称分裂后,生殖核继续分裂即为A-G途径;营养核和生殖核两者同时继续分裂的A-VG途径.首次对结球甘蓝小孢子培养中的细胞死亡及胚胎发育途径进行研究.

摘要： 通过游离小孢子培养能快速获取DH系，可应用于常规育种、进行遗传结构分析、同时还可以开展突变体的诱导和筛选、遗传转化等方面的研究。但是影响青花菜小孢子培养胚胎发生的因子很多，到目前为止,在青花菜上还没有建立起一套高效、稳定、实用的技术体系，从而限制了该技术的广泛应用。本文以前人的研究与自己的实际为基础，着重从供体植株(基因型、生理状况、花粉发育时期)、预处理(低温、高温等)、培养基(培养基种类、碳源、激素等)等方面对影响青花菜游离小孢子胚胎发生的因子进行探讨，以期为建立高效的青花菜小孢子培养技术提供参考依据。

摘要： 本文结合具体实验分析探讨了‘龙泉1号’、‘大五星’及‘早钟6号’枇杷小孢子发育时期对花药愈伤组织诱导及胚胎发生的影响。

摘要： 植物体细胞胚胎发生体系,是研究植物细胞全能性的机制、基因的表达和胚胎的发育的理想实验系统。在总结近年来分离鉴定的植物体细胞胚胎发生相关基因及其表达的调控机制研究进展的基础上,初步搭建了一个植物体胚发生的基因网络框架,以期为今后的植物体胚发生研究提供参考。

摘要： 本文对影响芸薹属作物游离小孢子培养胚胎发生的主要因素、影响小孢子植株再生的因素、小孢子植株倍性鉴定以及该技术的应用情况进行了总结,对今后的研究方向进行了展望,以期对芸薹属作物游离小孢子培养提供帮助.

摘要： 研究了大白菜—结球甘蓝8个单体异附加系(AA+C1～AA+C8)、60Co-γ辐射处理的单体异附加系(AA+C3和AA+C4)及二体异附加系(AA+C1D)自交后代单株游离小孢子培养胚胎发生和植株再生情况.结果表明:8个大白菜—结球甘蓝单体异附加系均获得了小孢子胚状体,其中单体异附加系AA+C3、AA+C4、AA+C5、AA+C7和AA+C8获得了再生植株,不同附加系小孢子出胚率和植株再生率存在显著差异,且显著低于大白菜亲本‘85-1’.利用60Co-γ辐射处理单体异附加系AA+C3和AA+C4植株,2个异附加系小孢子出胚率均随着辐射剂量的增加而降低,但对辐射剂量的耐受能力不同,AA+C3植株再生率受不同辐射剂量影响差异不明显,而AA+C4植株再生率随辐射剂量增加显著降低.大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系自交后代单株的游离小孢子培养结果也表明,不同单株之间小孢子出胚率和植株再生率存在明显不同.研究结果初步揭示了结球甘蓝不同染色体和不同染色体片段的附加不仅对大白菜游离小孢子培养效果有明显的影响,而且影响着植株对60Co-γ射线辐射处理剂量的耐受能力.

摘要： 本文综述了萝卜单倍体培养中试验材料、预处理、培养基、培养条件等影响胚胎发生的关键因素,以及植株再生等方面的研究进展,并分析了目前萝卜单倍体培养所存在的问题及解决方法.

摘要： 本文综述了影响结球甘蓝游离小孢子胚胎发生及植株再生的重要因素，提出了结球甘蓝小孢子培养中存在和需要解决的问题，并展望了这项技术在研究和生产实践中的应用前景。

摘要： 本研究以低能氮离子束为诱变源,通过对同源四倍体水稻品系"IR36-4X"进行离子注入后在其第二代群体内发现了1株具有多胚苗性状特征的突变株("IR36-双").对该突变株及后代(多胚苗突变系,"IR36-双")的主要农艺性状及多胚遗传规律进行了系统调查,并利用激光扫描共聚焦显微镜技术对其胚囊的异常情况、发生频率及其胚胎发生(不定胚起源)进行了观察.结果表明,多胚苗植株与其对照相比,其株高、穗长、千粒重及结实率都有所下降,其下降的百分比分别为35.41％、5.08％、15.72％和12.39％;其多胚苗特性具有一定的遗传性,多胚苗频率在各世代也相对稳定;在多胚苗突变系IR36-双中异常胚囊频率比对照增加了41.53％;其多胚(不定胚)的来源可能主要有四种情况:双套胚囊形成多胚;反足细胞团发育形成不定胚;胚乳细胞形成不定胚(胚乳细胞胚状体),多卵卵器中的卵细胞和类卵细胞分别受精形成多胚.本项研究在一定程度上证实了离子注入技术在创造多倍体水稻新种质中的实用性,这将为水稻无融合生殖种质材料的寻找提供一条新途径.

摘要： 供体细胞在体细胞核移植中发挥着非常重要的作用.本试验主要通过比较供体成纤维细胞的不同血清饥饿培养天数、传代次数、冻存复苏等方面试验条件对重组胚发育的影响因素进行了深入的研究.研究结果表明:供体细胞血清饥饿0d、1～3d、4～6d、7～9d之间重组胚卵裂率没有显著差异(P＞.05),但囊胚率以饥饿1～3d的最高,与其它组别差异显著(P＜0.05);以传代0、1～3、4～6、7～9代的细胞作为供体细胞,卵裂率没有显著差异(P＞O.05),桑椹胚率以传1～3代最高,差异显著(P＜0.05);以2、4、6、8代冷冻解冻后细胞为供体,卵裂率并无明显差异,而8代细胞的桑椹胚率比其它组别低.本试验为提高供体成纤维细胞在卵母细胞中重新程序化及后续重组胚发育等相关研究提供重要的理论依据和技术保障.

摘要： 本发明公开了一种冰灯玉露体细胞胚胎发生及植株再生方法，该方法为：通过消毒清洗、叶片胚性愈伤组织诱导、胚性愈伤组织成熟与分化、分化芽生根诱导和移栽驯化获得冰灯玉露，本发明以上部分叶为外植体，胚性愈伤诱导的适宜培养基为MS+6‑BA（1.0‑2.0mg·L‑1）+NAA（0.1mg·L‑1）+2,4‑D（0.2mg·L‑1）+琼脂（6g·L‑1）+蔗糖（30mg·L‑1）；体细胞胚胎成熟分化培养基为MS+6‑BA（1.0mg·L‑1）+NAA（0.1mg·L‑1）+琼脂（6g·L‑1）+蔗糖（30g·L‑1），1/2MS培养基中添加IBA1.0g·L‑1、琼脂6g·L‑1和蔗糖30g·L‑1对体胚分化苗进行生根诱导，诱导率最高为76%，培养基中添加活性炭不利于生根诱导。

摘要： 本发明提供一种普通油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的方法，所述方法包括以下步骤：取7月中旬普通油茶幼胚于4°C保存，消毒后切块接种至愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导培养；挑选生长良好的愈伤组织继代至分化培养基进行胚状体分化；将出现胚状体的外植体转入胚状体发育及植株再生培养基，进行胚状体发育和植株再生；将具有明显子叶的胚状体转至生根培养基，进行生根培养；最后将获得的完整植株驯化移栽至至营养钵内继续生长。通过本发明所提供的方法，普通油茶能够在6个月内通过体细胞胚胎发生方式获得再生植，为普通油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株提供了一种方便、快捷和有效的方法，具有较好的社会效益和经济效益。

摘要： 本发明公开了一种提升乌菜小孢子胚胎发生率的方法，属于蔬菜化控领域，所述方法还包括在获取乌菜小孢子前对其长至6‑7片真叶的幼苗喷施油菜素内酯，培养基中添加的油菜素内酯的浓度为0.3mg/L，对乌菜幼苗喷施的油菜素内酯的浓度为50mg/L，对乌菜幼苗的喷施部位为叶片背面，且直至叶片表面滴水；本发明提供的方法可有效提高乌菜小孢子胚胎的发生率。

摘要： 本发明公开了一种樟树体细胞胚胎发生与组织培养的方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括以下步骤：采集未成熟的果实作为外植体，经消毒后，切开果实，取出未成熟的合子胚；经体细胞胚和胚性愈伤组织的诱导培养，体细胞胚和胚性愈伤组织的增殖、成熟与萌发、体胚苗的繁育培养和生根培养得到种苗；体细胞胚和胚性愈伤组织的增殖、成熟与萌发是通过体胚增殖、成熟和萌发通用培养基在同一阶段实现樟树体细胞胚和胚性愈伤组织转化生成体胚苗。本发明提供的体胚增殖、成熟和萌发通用培养基可在3‑4个月实现樟树胚性愈伤组织转化生成体胚苗，约6个月便可获得大量生根樟树体胚苗，具有操作工序节省、效率高、使用简便的优点。

摘要： 本发明公开了一种栾树体细胞胚胎发生及植株再生的培养方法；所述方法包括：(1)以栾树种子为外植体进行培养获得栾树无菌苗；(2)将栾树无菌苗的叶片及茎段接种到愈伤诱导培养基中培养获得胚性愈伤组织；(3)将胚性愈伤组织在体细胞胚发育培养基中进行体细胞胚的分化培养获得栾树体细胞子叶胚；(4)将栾树体细胞子叶胚在成熟发育培养基中进行子叶胚的成熟发育培养；(5)将发育成熟的子叶胚在种子发芽培养基中进行发芽培养获得完整植株；(6)完整植株茎杆的片段接种至生根培养基进行生根培养。本发明培养方法的栾树体胚发生率高、产生的体胚数量多、提高了栾树的再生植株数量，本发明为栾树无性繁殖培养和分子辅助育种等提供了基础。

摘要： 本发明公开了一种普通油茶成熟胚通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的方法，包括：取10月中旬普通油茶成熟胚消毒作为外植体；将所述外植体进行预培养，后继代于分化培养基上进行分化培养，获得胚性愈伤组织；其中，所述分化培养基添加了0.05～0.15mg/L 2,4‑D+0.05～0.15mg/L KT；将所述胚性愈伤组织转至胚状体发育及植株再生培养基上进行再生培养，获得具有明显子叶的胚状体；将所述具有明显子叶的胚状体转至生根培养基进行生根培养，形成生根的完整植株，后炼苗和驯化后移栽至栽培基质中培养。胚性愈伤组织及胚状体分化率达25％以上，再生植株率达到40％以上，6个月内获得完整再生植株。

摘要： 本申请公开了一种调控植物体细胞胚胎发生的方法，以植物未成熟合子胚为外植体，通过控制茎尖分生组织干细胞调控因子miR394和WUS的共同表达，诱导体胚发生。本申请的试验结果显示WUS促进体胚发生具有剂量效应和阶段效应，并且miR394不仅可以促进WUS调控茎尖分生组织发育，同时也可以提高WUS对体胚发生的诱导效率，进而将不易体胚发生的Ler拟南芥转化为可高效进行体细胞胚胎发生的植物。本申请不仅可以有效调控植物体胚发生，而且对重要经济植物的快速育种具有重要意义。

摘要： 本申请公开了一种调控植物体细胞胚胎发生的方法，以植物未成熟合子胚为外植体，通过控制茎尖分生组织干细胞调控因子miR394和WUS的共同表达，诱导体胚发生。本申请的试验结果显示WUS促进体胚发生具有剂量效应和阶段效应，并且miR394不仅可以促进WUS调控茎尖分生组织发育，同时也可以提高WUS对体胚发生的诱导效率，进而将不易体胚发生的Ler拟南芥转化为可高效进行体细胞胚胎发生的植物。本申请不仅可以有效调控植物体胚发生，而且对重要经济植物的快速育种具有重要意义。

摘要： 本发明适用于植株培育技术领域，提供了一种栀子体细胞胚胎发生及植株再生方法，包括以下步骤：步骤S1：外植体选择与预处理；步骤S2：胚性愈伤组织的诱导；步骤S3：体细胞胚胎分化及增殖培养；步骤S4：体细胞胚胎萌发培养。本发明使用植物材料少，不受季节限制，可以在较短时间内达到繁殖系数的最大化，不仅能够提高育苗效率，节约生产成本，而且操作简单易行，可重复性强，适宜于周年试验或生产；确保了苗木的移栽成活率，保证了苗木质量；实现了绿色生产，优化了栀子苗木生产流程，值得推广和应用。

摘要： 本发明公开了一种提高萝卜小孢子胚胎发生率的方法，专用于提高迟钝基因型萝卜游离小孢子胚胎发生率的方法，具体方法为：(1)活跃基因型萝卜花蕾个数：迟钝基因型萝卜花蕾个数＝1：2，将选取的花蕾置于4°C下预处理10～12h，接着置于6°C下预处理8～10h；(2)消毒后的花蕾加入pH5.8的B5提取液中进行提纯，获得提纯后的小孢子；(3)将提纯后的小孢子悬浮在pH5.8的1/2NLN‑13(添加0.30mg/L 6‑BA)培养基中，32.5°C下热激处理6～8h后，室温下静置暗培养，得到肉眼可见的胚状体；(4)将胚状体振荡培养，获得子叶型胚。本发明明显提高了迟钝基因型圆白萝卜小孢子胚胎发生率由0增加到5胚/蕾，本发明解决了现有技术存在的问题。