表面标志

摘要： 目的研究脐血单个核细胞来源NK细胞的培养方法及其对不同类型肿瘤细胞的杀伤活性。方法自脐静脉消毒后全封闭采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞,用NK细胞培养基培养14 d,流式细胞仪检测其表面标志,并使用RTCA实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖曲线,观察NK效应细胞按效靶比1:1、5:1与10:1对肿瘤细胞的杀伤作用。结果培养14 d的脐血单个核细胞,细胞总数扩增294倍,其中NK细胞扩增5580倍。NK细胞CD3^(-)CD56^(+)阳性率为97.93%,与杀伤功能相关的重要分子CD16、NKG2D、NKp30、NKp44的表达阳性率均在95%以上。对A549肺癌细胞株作用6 h的杀伤活性,在1:1~10:1效靶比范围内,随着效靶比增加,杀伤活性从(78.16±2.41)%逐渐增强到(95.71±3.21)%;并且在效靶比1:1的情况下,随着作用时间从6 h延长到24 h,杀伤活性也从(78.16±2.41)%逐渐增强到(96.33±2.15)%。结论建立了无需分选细胞、无需滋养层细胞、操作简单、通用性强的脐血NK细胞培养方法,获得的NK细胞纯度高,对肿瘤细胞的杀伤作用强。

摘要： 目的 探寻可供临床和教学参考的八髎穴骨度折量定位方法.方法 对南京医科大学附属南京医院2016年1月至6月的100例俯卧位盆腔CT片进行回顾性分析,以5 mm 层厚连续横断面扫描,建立3D 图像.测量 L5棘突下至尾骨尖、L5棘突下至骶管裂孔、L5棘突下至髂后上棘、L5棘突下至八髎穴、后正中线至八髎穴、后正中线至髂后上棘等距离.结果 ①设立骶部骨度表,得到4个骶部折量寸:即 L5棘突下至尾骨尖约6寸,L5棘突下至骶管裂孔约3寸,L5棘突下至髂后上棘的垂直距离约1寸,髂后上棘至后正中线约2寸.②根据骶部骨度分寸,八髎穴可定位如下:上髎位于后正中线旁开1.1寸,L5棘突下1寸;次髎位于后正中线旁开1寸,L5棘突下1.7寸;中髎位于后正中线旁开0.9寸,L5棘突下2.5寸;下髎位于后正中线旁开0.9寸,L5棘突下3.5寸.③根据骶部体表标志,八髎穴可定位如下:从骶部纵向距离观察,上髎穴约平髂后上棘,次髎穴约平 L5棘突下和骶管裂孔连线的中点,中髎穴约平 L5棘突下和尾骨尖连线的中点,下髎穴约平骶管裂孔;从骶部横向距离观察,次髎穴位于髂后上棘至后正中线距离的一半,八髎穴呈"倒八字"型排列,其连线与后正中线的夹角约25°.结论 以表面标志为基础,用比例关系和骨度分寸来定位八髎穴,具有临床参考价值.%OBJECTIVE To explore Baliao points location method by proportional bone measurement and provide reference for clinic and teaching.METHODS 100 prone pelvic CT images performed from January 2016 to June in Nanjing Hospital Af-filiated to Nanjing Medical University was analyzed retrospectively.Three-D images were established by continuous cross sec-tion scanning with 5 mm layer thickness.The distances of L5 spinous process to coccyx tip,L5 spinous process to sacral hia-tus,L5 spinous process to the posterior superior iliac spine,L5 spinous process to Baliao points,posterior midline to Baliao points and posterior midline to the posterior superior iliac spine were measured.RESULTS ①Four sacral bone measurements were obtained through establishing sacral bone scale,they were about 6 cun from L5 spinous process to coccyx tip,3 cun from L5 spinous process to sacral hiatus,about 1 cun from L5 spinous process to the posterior superior iliac spine vertically,about 2 cun from posterior superior iliac spine to posterior midline.②Baliao points could be located as follows on the basis of sacral bone scale:Shangliao(BL 3 1)was located in 1.1 cun next to posterior midline,1 cun below L5 spinous process;Ciliao(BL 32)was located in 1 cun next to posterior midline,1.7 cun below L5 spinous process;Zhongliao(BL 33)was located in 0.9 cun next to posterior midline,2.5 cun below L5 spinous process;Xialiao(BL 34)was located in 0.9 cun next to posterior mid-line,3.5 cun below L5 spinous process.③Baliao points could be located as follows according to body surface signs of partes sacralis:from the longitudinal distance of partes sacralis,Shangliao(BL 3 1)was parallel with the posterior superior iliac spine;Ciliao(BL 32)was parallel with the midpoint of L5 spinous process and sacral hiatus;Zhongliao(BL 33)was parallel with the midpoint of L5 spinous process and coccygeal tip;Xialiao(BL 34)was parallel with the sacral hiatu.From the trans-verse distance of partes sacralis,Ciliao(BL 32)was located in the midpoint of the posterior superior iliac spine and posterior midline.Baliao points were lined as reversal"八",and the angle between the connection of Baliao points and the posterior mid-line was 25 degrees.But the body surface signs and bone standard could only provide the most likely location for Baliao,so Baliao points location could be confirmed through combining point identification and touching the hollow.CONCLUSIONS On the basis of body surface signs,transforming"measurement"to"standard",and locating Baliao points according to proportion-al relationship and bone degree,which are worthy of clinical reference.

摘要： 为建立高效简便的人尿源干细胞(Human urine-derived stem cells,hUSCs)培养和鉴定体系,在无菌条件下收集青年志愿者的尿液分离培养人尿源干细胞,然后用克隆计数、形态观察、核型分析、生长曲线测定、表面标志物检测、成骨和成脂分化等方法对hUSCs进行鉴定.人尿源干细胞克隆具有纤维样、鹅卵石样和丝连样三种形态.第二代hUSCs高表达抗原CD44、CD73和CD90,阳性率均高于99.6％;而低表达抗原CD34和CD45,阳性率均低于0.3％.第六代hUSCs高表达抗原CD44和CD73,阳性率均高于99.5％;而低表达抗原CD34和CD45,阳性率均低于0.5％.第六代hUSCs仍然具有很强的增殖能力和稳定的核型,并经诱导可分化为骨细胞和脂肪细胞.该研究建立了高效简便的hUSCs培养和鉴定体系.

摘要： 成体间充质干细胞的多向分化潜能为再生医学领域的组织修复提供了新的希望.但是,间充质干细胞表面标志的表达存在一定差异,这些表面标志影响间充质干细胞的分化能力和分化方向.因此,研究成体间充质干细胞的表面标志,选择表面标志的合理搭配,有利于促进组织的修复.%The multipotential of adult mesenchymal stem cell (MSC) provides a promising therapeutic modality for tissue repair in regenerative medicine.However,MSCs are heterogeneous in expression of surface marker which has an effect on differentiative capacity and differentation direction of MSC.It is worthwhile to study the role of surface marker on adult MSC and select appropriate cells for better tissue regeneration.

摘要： 癌干细胞是目前癌症研究的热点之一。肺癌干细胞与正常肺干细胞有许多共同之处，包括自我更新能力和多分化潜能。许多癌干细胞分子标志为肺癌干细胞所共有，如CD133、CD44、乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase, ALDH）以及ATP结合转运蛋白G超家族成员2（ATP-binding cassette sub-family G member 2, ABCG2）。肺癌干细胞的扩增与作用不仅受胚胎干细胞途径如Notch、Hedgehog和Wnt调控，也受肿瘤信号途径如表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）、信号传导转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3, STAT3）和磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K）等的调控。由于癌干细胞在肿瘤复发、转移和耐药性等方面发挥着重要作用，揭示肺癌干细胞与正常干细胞的区别，鉴定并靶向癌干细胞特异性表面标志物及其介导的信号通路，将有望改善肺癌治疗效果和提高患者生存率。%Cancer stem cells (CSCs) are emerging as a hot topic for cancer research. Lung CSCs share many char-acteristics with normal lung stem cells (SCs), including self-renewal and multi-potency for differentiation. Many molecular markers expressed in various types of CSCs were also found in lung CSCs, such as CD133, CD44, aldehyde dehydrogenase (ALDH) and ATP-binding cassette sub-family G member 2 (ABCG2). Similarly, proliferation and expansion of lung CSCs are regulated not only by signal transduction pathways functioning in normal lung SCs, such as Notch, Hedgehog and Wnt path-ways, but also by those acting in tumor cells, such as epidermal growth factor receptor (EGFR), signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) and phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) pathways. As CSC plays an critical role in tumor recur-rence, metastasis and drug-resistance, understanding the difference between lung CSCs and normal lung SCs, identifying and targeting CSC markers or related signaling pathways may increase the effcacy of therapy on lung cancer and improved survival of lung cancer patients.

摘要： BACKGROUND:Hair folicle stem cels have been confirmed to have stronger proliferative ability than interfolicular epidermal stem cels, which have been an issue of concern in seed cel research. OBJECTIVE:To compare the biological characteristics of rat hair folicle stem cels cultured by tissue explant method and enzymatic digestion method. METHODS: Under stereomicroscope, hair folicles were isolated from the rat whiskers, and then tissue explant method and two-step enzymatic digestion method were employed to culture hair folicle stem cels. Cels were purified using repeated differential adhesion method, and cel growth and morphology were observed periodicaly. Flow cytometry was used to detect the expression of CD34 and β1 integrin in passage 3 hair folicle stem cels. RESULTS AND CONCLUSION:Cels cultured by two-step enzymatic digestion method grew faster with more amount than those cultured by tissue explants method. Flow cytometry showed that the expressions of PE-CD34 and FITC-β1 were (39.52±19.57)% and (93.46±4.73)% for the two-step enzymatic digestion group, and (19.20±11.53)% and (363.57±14.42)% for the tissue explant method, respectively. There was a significant difference between the two methods. In conclusion, these two methods are able to culture high-activity hair folicle stem cels, which can be chosen according to different experimental requirements.%背景：研究证实毛囊干细胞比毛囊间表皮干细胞更有增生能力，近年来受到广泛关注，成为种子细胞的研究热点。目的：比较组织块法和两步酶法培养大鼠毛囊干细胞的生物学特性。方法：体式显微镜下分离大鼠触须部的毛囊，分别用组织块法和两步酶法培养毛囊干细胞，利用反复差速贴壁法纯化细胞，定期观察细胞生长状况及形态，流式细胞仪检测第3代毛囊干细胞CD34、β1整合素的表达。结果与结论：两步酶法获得的细胞生长速度快，获得的细胞量多，而组织块法获得的细胞生长速度较慢，获得的细胞量也少。流式细胞仪分析显示酶消化法培养组 PE-CD34、FITC-β1整合素的表达分别为(39.52±19.57)%和(93.46±4.73)%，组织块法培养组相应为(19.20±11.53)%和(363.57±14.42)%，两组间差异有显著性意义(P <0.05)。总的来说，两种方法均能培养出实验所需毛囊干细胞，可根据不同实验需求选择恰当的培养方法。

摘要： 背景：研究证实毛囊干细胞比毛囊间表皮干细胞更有增生能力,近年来受到广泛关注,成为种子细胞的研究热点。目的：比较组织块法和两步酶法培养大鼠毛囊干细胞的生物学特性。方法：体式显微镜下分离大鼠触须部的毛囊,分别用组织块法和两步酶法培养毛囊干细胞,利用反复差速贴壁法纯化细胞,定期观察细胞生长状况及形态,流式细胞仪检测第3代毛囊干细胞CD34、β1整合素的表达。结果与结论：两步酶法获得的细胞生长速度快,获得的细胞量多,而组织块法获得的细胞生长速度较慢,获得的细胞量也少。流式细胞仪分析显示酶消化法培养组PE-CD34、FITC-β1整合素的表达分别为（39.52±19.57）%和（93.46±4.73）%,组织块法培养组相应为（19.20±11.53）%和（363.57±14.42）%,两组间差异有显著性意义（P〈0.05）。总的来说,两种方法均能培养出实验所需毛囊干细胞,可根据不同实验需求选择恰当的培养方法。

摘要： 卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一，其初次治疗疗效好，但后期易复发，目前研究表明这与卵巢癌干细胞有着密切关系，卵巢癌干细胞可耐受常规化疗，在肿瘤实体被消灭后能形成新的肿瘤，引起复发，不同表面标记的卵巢癌干细胞表现出不同的特性，本文着重对卵巢癌干细胞的治疗进行综述。

摘要： 目的:研究人肺癌干细胞的表面特征.方法:将肺癌细胞株制成单细胞悬液,接种到96孔板,每孔只有一个细胞,观察每孔细胞的存活,增殖以及分裂情况,将接种后能够持续分裂增殖的肿瘤细胞(实验组)和常规培养的肿瘤细胞(对照组)分别进行CD133细胞免疫组化,比较两组细胞的阳性表达率,将两组细胞按不同浓度梯度接种裸鼠,分析两组细胞的成瘤能力.结果:(1)仅有4.11％的肿瘤细胞具有增殖形成细胞克隆的能力.(2)单细胞体外培养具有增殖能力的细胞CD133阳性率明显高于常规培养的肿瘤细胞.(3)体外能够持续分裂的细胞成瘤能力强于常规培养的肿瘤细胞.结论:CD133可能是人肺癌干细胞的表面标志.

摘要： 目的：通过改变细胞分离液的比重,旨在提高分离骨髓造血干细胞效果的方法。rn 方法：选用雌性乳猪,自髂骨处抽取骨體血,分别用淋巴细胞分离液和改进的干细胞分离液分离猪骨髓干细胞,观察其分离的干细胞数量、表面标志、细胞活力及细胞集落形成能力。rn 结果：干细胞分离液所得骨髓细胞数比淋巴细胞分离液多5倍,而CD34+细胞比例增加13.6倍。并将其用于人的骨髓干细胞分离,也获得了相似的结果。rn 结论：增加细胞分离液的比重能更有效地分离和富集骨髓血中的造血干细胞。

摘要： 目的:对急性髓系白血病骨髓单个核细胞进行体外培养,获得白血病干细胞并研究其生物学特性。方法:体外培养急性髓系白血病人的骨髓单个核细胞,观察其形态学特征、长期存活及增殖特性,采用染色体分析和流式分析技术研究其核型和细胞表面标志,应用RT-PCR技术分析其Nucleostemin、Bmi-1及ING4等基因的表达。结果:所培养的白血病细胞能够在体外12个月以上存活并保持其增殖特性,呈集落样悬浮生长。染色体核型呈亚四倍体。表达Nucleostemin、Bmi-1,不表达ING4。细胞表达CD38、CD29、CD44和HLA-DR等抗原,不表达CD34、CDl3、CD2等抗原。结论:经长期培养获得的白血病细胞,具备肿瘤干细胞的一些特征,可能是白血病干细胞。

摘要： 一种改进的供公路标志用的类橡胶带，其中的上层变形成楔与脊一类的突起部，且最好设置有暴露的后向反射的微球覆盖层，此上层已交联硫化而具有记忆能力，即可在车辆行驶过压下时恢复其原形，此带尚有具冷流特性之未硫化底层，用来附着于公路上并在车辆驶过时仿随路面形状而无记忆能力。

摘要： 本发明公开了一种用于非疾病诊断目的的肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射检测试剂盒及其制备方法与应用。该试剂盒包括SERS检测芯片，第一、二试剂。SERS检测芯片为表面修饰有发夹型DNA单链H1的银纳米棒阵列基片，第一试剂为发夹型DNA单链H2，第二试剂为SERS探针，在SERS检测芯片上同时加入第一、二试剂后，第二试剂上的探针单链P与H1‑H2双链的粘性末端杂交，将SERS探针捕获至SERS检测芯片上（核酸探针的碱基序列可调），通过测试SERS检测芯片上SERS探针的拉曼信号，实现对于胃癌微小核酸标志物的检测，并且可实现在血清等复杂环境中多种核酸生物标志物的一体化检测，有效提升检测的特异性与准确性。

摘要： 本发明提供了一种基于像素化超表面的特异性免疫标志物太赫兹即时检测装置，涉及生物医学检测领域，包括：基座，具有四个检测区，每个检测区中设有实验窗和对照窗；样品池，置于基座表面，用于承载待测物质，样品池中设有太赫兹传感增强超构结构，以增强太赫兹波与待测物质之间的相互作用；端盖，设于样品池上侧，以便将样品池固定在基座上；其中，每个检测区对应一个样品池，各个样品池中的太赫兹传感器增强结构分别增强特异性免疫标志物的光谱响应。该检测装置结构简单可靠，操作便捷，依靠太赫兹传感增强超构结构结合太赫兹检测技术提高检测效率。

摘要： 本发明公开了检测巨核细胞或血小板表面标志分子的产品在制备检测感染的产品中的用途，所述表面标志分子的组合物为选自CD48、CD53、CD44、CD305、CD52、CD62L、CD162、CD230、CD114、CD18、CD28、CD87、CD88、CD45、CD217、CD284、CD14或CD50中的一种或几种。本发明所鉴定的表面标志分子在与感染相关的巨核细胞或血小板亚群中特异性高表达，有助于巨核细胞和血小板免疫亚群的标记和分离。本发明筛选出的巨核细胞和血小板免疫亚群的特征性表面标志分子，为在生理病理条件下监测巨核细胞和血小板免疫亚群的动态变化提供了工具，并为相关疾病的临床治疗提供了新的理论依据。

摘要： 本发明公开了一种肿瘤细胞表面标志分子PD‑L1的检测方法，包括如下步骤：A、提供捕获筛，所述捕获筛包括网状基体及孵育形成在所述网状基体上的EpCAM抗体；B、使分离自体液的有核细胞流过所述捕获筛，以使有核细胞中的肿瘤细胞结合至所述捕获筛上；C、用甲醛将捕获的肿瘤细胞固定在所述捕获筛上；D、依次采用PD‑L1一抗溶液、标记有荧光基团AlexaFluor 647的PD‑L1二抗溶液、pan‑CK‑AlexaFluor488一抗溶液、CD45一抗溶液及标记有荧光基团AlexaFluor 568的CD45二抗溶液对所述捕获筛上固定的细胞进行孵育，然后用细胞核荧光染料标记出所述捕获筛上的所有细胞。本发明的检测方法与现有方法相比可以提高检测准确性并且操作更为简便。

摘要： 本发明公开了一种细胞表面标志物抗体Fab段修饰的小分子药物/治疗基因递送系统及其制备方法和应用，所述递送系统包括脂质双分子膜和药物载体，所述脂质双分子膜经在接触胎盘组织间液高表达的酶的作用下靶向崩解的酶底物多肽‑PEG修饰，所述药物载体以胎盘滋养细胞表面特异性高表达的标志物抗体修饰，药物载体中负载超顺磁性四氧化三铁SPIO纳米粒子、调控胎盘滋养细胞功能的小分子药物、治疗基因或其组合。本发明的递送系统可有效避免母体胎盘外其他器官和胎儿非特异性药物吸收，进而实现对胎盘内滋养细胞特异性药物的递送和功能调控。

摘要： 本发明公开了一种粒径与表面标志物联合分析的方法。所述方法包括：1)从单外泌体尺度对外泌体蛋白标志物与粒径进行关联分析；2)统计不同外泌体蛋白标志物所对应的不同亚型的外泌体的数量及粒径分布；3)按照特定的粒径范围将外泌体分为不同的亚群，分别统计亚群中特异性表达某种标志物的外泌体比例；4)结合算法分析不同分型的外泌体亚型。利用本发明能够提高外泌体粒径检测的灵敏度并对外泌体的粒径以及膜蛋白进行检测；更重要的，能够对外泌体内部存在的亚群进行粒径与蛋白表达的关联性分析，提高不同类型癌症判别的准确度。

摘要： 本发明的课题在于提供一种消除在T细胞转移疗法等中成为问题的T细胞的耗竭、提高T细胞活性的技术。通过在(a)基质细胞的细胞培养上清液或(b)CXCL12的存在下培养活化的T细胞，可制备具有CD45RA+和CCR7+的细胞表面标志物的T细胞。

摘要： 本发明公开了一种用于检测乳腺癌患者循环肿瘤细胞的细胞表面标志物及应用，细胞表面标志物，包括TSPAN1、FAIM2、KCNJ4、GABRD、PDK1L2、OR1OK1、UPK1B和OR51M1；采用细胞表面标志物对应的抗体进行免疫捕获乳腺癌CTC；本发明利用得到的乳腺癌患者循环肿瘤细胞的表面标志物，得到了用于免疫富集筛选的最佳抗体组合，提高了乳腺癌CTC的富集捕获效率，有效提高了CTC捕获特异性及敏感性，具有高效捕获乳腺癌CTC的效果。克服了现有乳腺癌CTC富集标志物种类不足、检出率低、纯度低的问题。

摘要： 本发明公开一种检测肿瘤细胞表面标志分子HER‑2的免疫荧光试剂盒，包括A液、B液、C液和D液，所述A液包括有多聚甲醛，所述B液包括有牛血清白蛋白和曲拉通X‑100，所述C液包括有牛血清白蛋白、曲拉通X‑100、抗细胞角蛋白荧光抗体、抗HER‑2荧光抗体，所述D液包括有抗荧光淬灭封片液。本发明采集患者少量血液样本，通过抗体筛选和优化，对两个靶蛋白CK和HER‑2均采用直接标记荧光抗体，从而简化操作，重点定位HER‑2表达强度的检测，对HER‑2抗体进行筛选与优化，可以有效区分HER‑2高、中、低表达水平，采用了两种CK抗体，抗CK19抗体和抗广谱CK抗体，有效区分CTCs和正常血液细胞。