酶促反应

摘要： 槲皮素广泛存在于自然界中,具有抗氧化,抗炎,抗菌,抗病毒等多种生物活性,但由于水溶性差,生物利用度低问题,制约了槲皮素的应用。槲皮素糖苷化可以增大水溶性,提高其生物代谢稳定性,改善其治疗效果,成为了国内外的研究热点。近年来通过化学合成,生物合成方法合成槲皮素糖苷衍生物取得了巨大进展,本文将以槲皮素糖苷的化学合成为主,对近年来国内外合成槲皮素糖苷衍生物的研究做一个简要综述。

摘要： 本文概述活化能化学概念的由来及对其物理含义理解的发展,解释活化能大小对化学反应速率的影响以及酶降低反应活化能的机制。

摘要： 目的:探讨常见化疗药物对标记酶免疫分析技术的影响.方法:将干扰药物烷化剂(环磷酰胺),抗代谢药(阿糖胞苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、地西他滨),抗肿瘤抗生素(依托泊苷),抗肿瘤植物成分药(长春新碱、紫杉醇、多西他赛),其他抗肿瘤药(顺铂、奥沙利铂、卡铂、奈达铂、伊立替康),抗肿瘤靶向药(硼替佐米、郝赛汀、培美曲塞二钠)分别加入辣根过氧化物酶(HRP)+四甲基联苯胺(TMB)反应体系中,用酶标仪测光密度值;同时加入碱性磷酸酶(ALP)+3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷(AMPPD)反应体系中,用化学发光仪测相对发光强度值.结果:在HRP酶标反应体系中,与对照组相比,吉西他滨、硼替佐米、多西他赛、紫杉醇、氟尿嘧啶、依托泊苷均显示了不同程度的负向干扰(P<0.05或P<0.01),其中,吉西他滨、多西他赛、紫杉醇、氟尿嘧啶、依托泊苷的干扰效应均呈剂量依赖性.在ALP酶标反应体系中,与对照组相比,硼替佐米、多西他赛、紫杉醇、依托泊苷、伊立替康、地西他滨、培美曲塞二钠均显示了不同程度的负向干扰(P<0.05或P<0.01),其中,多西他赛、紫杉醇、伊立替康、地西他滨、培美曲塞二钠的干扰效应均呈剂量依赖性.在两种酶反应体系中,多西他赛和紫杉醇在人体血样药物峰浓度时对HRP和ALP酶活性仍具有明显抑制作用.结论:多西他赛、紫杉醇两种化疗药物对HRP和ALP免疫酶促反应体系存在明显干扰作用.

摘要： 以丙烯酰胺(AM)、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸、N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)和2,4-二羟基苯磺酸钠(DHBS)为单体,辣根过氧化酶(HRP)为催化剂,采用酶促反应方法,合成了一种主链含有芳香嵌段的降滤失剂PAAND,基于相同反应条件合成了未含有芳香嵌段的降滤失剂PAAN.采用核磁共振光谱(1H NMR)对PAAN和PAAND的分子结构进行了表征,并对其在钻井液中的流变性能和滤失性能进行了评价.实验结果表明,200°C老化16h后,加入0.8％PAAND的实验浆的表观粘度(AV)、塑性粘度(PV)、动切力(YP)、API失水量(FLAPI)和高温高压失水量(FLHTHP)分别为9.0mPa·s、7.5mPa·s、2.0Pa、11.2mL和30.0mL,性能明显优于加入PAAN的实验浆,且具有更为优越的抗温抗盐能力.通过吸附性能评价和泥饼微观形貌分析,揭示了主链含芳香嵌段降滤失剂的作用机理.

摘要： "温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响"是生化实验中让学生了解酶特性的一个常规实验,笔者在长期的实验课教学中发现该实验有些方面存在不足,需进一步改进.本文从实验试剂、反应条件、实验步骤等多方面进行了探索,取得了良好的实验效果.

摘要： 酶型时间温度指示剂因其安全环保、成本较低成为智能包装领域研究的热点。本研究利用漆酶催化愈创木酚氧化分解产生随时间温度累积的颜色变化特性制备漆酶型TTI。首先测定巴氏杀菌乳储存过程中酸度值,计算其变质活化能为27.14kJ/mol。改变漆酶浓度和愈创木酚浓度,使TTI体系中酶促反应的活化能与巴氏杀菌奶变质活化能匹配,利用柠檬酸与壳聚糖间发生交联反应以及冻融过程中冰晶融化产生的孔洞实现漆酶的固定化,最后确定TTI的制备工艺。实验结果表示当酶浓度为2mg/mL、愈创木酚浓度为40mmol/L时,TTI体系活化能为32.82kJ/mol,最接近巴氏杀菌乳的变质活化能,可用于指示巴氏杀菌乳的新鲜度。

摘要： 通过转录组测序得到牛樟芝(Antrodia cinnamomea)cDNA序列,用合适的开放阅读框(open reading frame,ORF)进行BLAST得到羊毛甾醇合酶基因AcLSS的蛋白质编码区(sequence coding for amino acids in protein,CDS)序列,根据CDS序列设计引物进行PCR扩增,将AcLSS基因通过T4 DNA连接酶连接到载体pET28a上,通过原核表达得到重组蛋白,采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测体外酶促反应产物,验证其生物活性,并探讨AcLSS基因对不同环境因子的响应.结果 表明:在2205 bp处有一条带,与CDS序列大小相符;编码734个氨基酸,相对分子质量大小约为80740,重组蛋白为可溶性蛋白质,能催化2,3-氧化角鲨烯生成羊毛甾醇,具有羊毛甾醇合酶的催化功能;与对照组(麸皮)相比,葡萄糖、蔗糖为碳源时,三萜含量降低,且组间差异均具有统计学意义,基因相对表达量组间差异均无统计学意义;与对照组(酵母提取物)相比,氮源为蛋白胨、硫酸铵时,三萜含量和基因相对表达量均降低,且组间差异均具有统计学意义;与对照组相比,添加金属离子时,三萜含量和基因相对表达量均下降,且组间差异均具有统计学意义;与对照组相比,茉莉酸甲酯、油酸、α-松油醇的添加均导致三萜含量下降,且组间差异均具有统计学意义,而油酸、α-松油醇的添加导致基因相对表达量增加,组间差异均具有统计学意义.

摘要： 电场处理是一种利用高电流或高电压实现快速传热或传质的新型食品加工技术,在酶促反应领域具有"绿色、高效、连续化"等生产属性。目前,电场主要用于钝化食品中酶活力,从而延长食品的保藏期。实际上,电场处理亦可通过电化学反应和极化效应提高酶活力。本文从现有电场技术原理和优缺点出发,概述电场技术在酶促反应领域的研究现状,指出电场改变酶活力的作用机理,探讨电场钝化和改善酶活力的关键影响因子,展望电场在酶促反应领域的应用前景。

摘要： 分析了非线性回归参数初始值的敏感性问题。以酶促反应回归函数的参数估计为例,给出了未知参数初始值的3种赋值方法及其SAS实现。为非线性回归分析的应用者提供依据与参考。

摘要： 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是一种在生物神经传导中起关键作用的酶.它在农药上是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的作用靶标,在医药上AChE抑制剂可用于治疗各种疾病如阿尔茨海默症、重症肌无力和青光眼等.因此关于AChE的活性测试方法在临床诊断和新药研发中就显得尤其重要,传统的测量方法一般是光谱法或者电化学法,近年来发展了一种研究反应热信号的方法,即等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,ITC),它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续、准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线,原位、在线和无损伤地同时提供热力学和动力学信息.本文中运用这种方法来研究AChE的酶促反应动力学.实验结果不仅与反应的温度有关，还与酶的浓度，底物的浓度有关；更令人可喜的是在0.016μM AChE，1mM ATC，T=25°C时与0.002μM AChE，2mM ATC，T=30°C得到的Km值在一个数量级上，而且与紫外可见方法测得的Km值相当。由于ITC方法追溯到了反应的本质，测量反应本身的热量变化，与其它活性测试方法相比有明显的优越性。用ITC方法研究AChE的酶促反应动力学时，可以得到米氏常数Km等动力学参数，但需要对其条件进行摸索，不断的改进和优化，由此也说明了ITC法可以作为一种测定AChE酶促反应动力学参数的一种方法，在酶催化反应研究尤其是热力学研究中可以发挥更大的潜力。

摘要： 近年来酶促反应越来越多的覆盖到生产生活当中,而游离酶的最大弊端就是稳定性差且难以回收,将酶固定化能有效解决难题,其中固定化载体是关键.本文综述了介孔材料在酶固定化方向的研究进展,重点介绍了有序介孔材料的种类及其在油脂改性中的应用,并对介孔固定化酶的发展前景进行了展望.

摘要： 在农药降解研究领域中，微生物的降解作用引起了广泛关注。对于微生物降解农药的研究主要集中于细菌，细菌降解农药的本质是酶促反应。本文以实验室保存的一株具有高效降解烟嘧磺隆活性的枯草芽孢杆菌YB1(Bacillus subtilis)为研究对象,通过单因素试验对YB1菌株降解烟嘧磺隆产酶条件进行了优化.结果显示:YB1菌株在好氧条件下能以烟嘧磺隆作为唯一碳源生长,其降解酶为胞外酶,可通过烟嘧磺隆诱导表达;YB1菌株在LB液体培养基中,当烟嘧磺隆浓度为40mg/L,接种量为4.5×109CFU/ml,培养时间96h,初始pH值为8.0,温度30°C,酶比活最高,为89.34U/mg.

摘要： 将毛细管电泳-电化学检测技术引入免疫分析中，将辣根过氧化物酶(HRP)催化过氧化氢(H2O2)氧化邻氨基酚的酶促反应与其氧化产物的电极还原相偶合，利用毛细管电泳电化学检测技术间接检测邻氨基酚-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)体系中的HRP 含量。用此方法检测人血清甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原(PSA)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)、血清总甲状腺素(T4)，并同时检测了血样中的PSA、HCG、CEA。根据不同链长DNA的电泳迁移率不同，利用毛细管分离技术实现了多种靶DNA的同时检测。利用生物素-亲合素相互作用，在探针DNA上标记辣根过氧化物酶，不同碱基长度的ssDNA 探针与其互补的靶DNA 杂交，形成dsDNA。通过毛细管电泳分离所生成的dsDNA 及未反应的ssDNA，HRP催化H2O2氧化邻氨基酚（OAP）生成3-氨基吩噁嗪（AP），通过电化学检测标记HRP的活性，可同时检测21-、39-、80-碱基序列的三种DNA 片段。

摘要： 目的：以睾酮为探针药物采用高效液相色谱法测定CYP450 3A4的活性。方法：采用大鼠肝微粒体体外代谢模型，以有机溶剂乙腈终止反应并沉淀蛋白，上清液进高效液相色谱分析，根据Lineweaver-Burk(双倒数作图法)方程式计算酶动力学参数。结果：在酶浓度为1.0mg·mL-1，反应时间为5min时酶促反应近似直线进行，测得酶动力学参数Km值为38.84μmol·L-1，Vmax值为1.83μmol·L-1·mgin-1·mg-1protein。结论：本方法简便、有效，适合实验室用于测定CYP450 3A4的活性，为进一步研究药物相互作用奠定了基础。

摘要： 葡萄酒中大多数活性物质的生成和降解都有不同来源的酶参与其中,所以认识葡萄酒酿造过程中相关酶的作用(如果胶酶、氧化酶、糖苷酶、蛋白酶等),可为酿酒厂提供有效的控制酶促反应的方法,优化工艺流程,并最终酿制出组分合理、感官特征优良的高级葡萄酒.

摘要： 目的：综述近年来国内外固定化酶载体材料的选择、固定化方法、及其在医药工业方面的应用。rn 方法：比较了固定化酶载体材料的优缺点，包括无机材料、高分子材料等。固定化方法主要包括:吸附法、共价结合法、包埋法、微囊化和交联法。rn 结果:固定化酶技术是指将生物酶固定在固定载体上，用于溶液中的酶促反应，反应完成后通过简单过滤即可与反应体系分离，并可以多次重复使用。rn 结论:固定化酶载体在医药工业中有着较广泛地应用，在未来会有更广阔的发展空间。

摘要： 通过表达多种重组立体选择性氧化还原酶,分析其催化不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的性质,从而构建酶促合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)的反应体系.基于已有立体选择性氧化还原酶重组大肠杆菌,通过Ni离子亲和层析法纯化得到重组氧化还原酶,以DKTP为底物,考察不同重组氧化还原酶对DKTP的催化活性和选择性,进一步对高选择性酶促合成(S)-DHTP的重组酶CR2进行性质分析,并考察其在最适条件下不对称还原DKTP的过程.筛选获得产物构型为(S)-型的催化活性最高的酶为CR2,该酶米氏常数Km为0.135mmol/L,Kcat/Km为3.689L/(mmol·s),最适pH8.4(0.1mol/L三乙醇胺缓冲液),最适反应温度为35°C,在10-45°C条件下和pH7.5-8.5较为稳定,Zn2+离子对酶活有促进作用.CR2催化DKTP不对称还原反应6h后,DHTP的产率达92.1％、光学纯度达99.9％.基于活性和选择性分析,获得不对称还原DKTP的目标酶CR2,其催化特性有利于高立体选择性还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,从而为进一步提高酶促不对称还原DKTP的转化效率提供研究基础.

摘要： 通过表达多种重组立体选择性氧化还原酶,分析其催化不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的性质,从而构建酶促合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)的反应体系.基于已有立体选择性氧化还原酶重组大肠杆菌,通过Ni离子亲和层析法纯化得到重组氧化还原酶,以DKTP为底物,考察不同重组氧化还原酶对DKTP的催化活性和选择性,进一步对高选择性酶促合成(S)-DHTP的重组酶CR2进行性质分析,并考察其在最适条件下不对称还原DKTP的过程.筛选获得产物构型为(S)-型的催化活性最高的酶为CR2,该酶米氏常数Km为0.135mmol/L,Kcat/Km为3.689L/(mmol·s),最适pH8.4(0.1mol/L三乙醇胺缓冲液),最适反应温度为35°C,在10-45°C条件下和pH7.5-8.5较为稳定,Zn2+离子对酶活有促进作用.CR2催化DKTP不对称还原反应6h后,DHTP的产率达92.1％、光学纯度达99.9％.基于活性和选择性分析,获得不对称还原DKTP的目标酶CR2,其催化特性有利于高立体选择性还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,从而为进一步提高酶促不对称还原DKTP的转化效率提供研究基础.

摘要： 通过表达多种重组立体选择性氧化还原酶,分析其催化不对称还原N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的性质,从而构建酶促合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)的反应体系.基于已有立体选择性氧化还原酶重组大肠杆菌,通过Ni离子亲和层析法纯化得到重组氧化还原酶,以DKTP为底物,考察不同重组氧化还原酶对DKTP的催化活性和选择性,进一步对高选择性酶促合成(S)-DHTP的重组酶CR2进行性质分析,并考察其在最适条件下不对称还原DKTP的过程.筛选获得产物构型为(S)-型的催化活性最高的酶为CR2,该酶米氏常数Km为0.135mmol/L,Kcat/Km为3.689L/(mmol·s),最适pH8.4(0.1mol/L三乙醇胺缓冲液),最适反应温度为35°C,在10-45°C条件下和pH7.5-8.5较为稳定,Zn2+离子对酶活有促进作用.CR2催化DKTP不对称还原反应6h后,DHTP的产率达92.1％、光学纯度达99.9％.基于活性和选择性分析,获得不对称还原DKTP的目标酶CR2,其催化特性有利于高立体选择性还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,从而为进一步提高酶促不对称还原DKTP的转化效率提供研究基础.

摘要： 本发明涉及鞘酯的酶促合成和包含获自溶性鞘脂的鞘脂和羧酸酯的组合物，还涉及包含所述鞘酯或组合物的化妆品、皮肤病学或药物配制物。

摘要： 本发明涉及鞘酯的酶促合成和包含获自溶性鞘脂的鞘脂和羧酸酯的组合物，还涉及包含所述鞘酯或组合物的化妆品、皮肤病学或药物配制物。

摘要： 本发明涉及鞘酯的酶促合成和包含获自溶性鞘脂的鞘脂和羧酸酯的组合物，还涉及包含所述鞘酯或组合物的化妆品、皮肤病学或药物配制物。

摘要： 本发明公开了一种水凝胶固定化漆酶‑介体酶促反应器，其是由以下方法获得：（1）将β‑双酮溶于漆酶溶液A中，得到溶液C；（b）向三口烧瓶中加入烯类共聚单体、交联剂和溶液C；（c）向三口烧瓶中通入惰性气体反应10‑20min，后置于15°C~65°C恒温水浴30‑90min，获得水凝胶；（d）将水凝胶水洗4‑8遍，置于‑50°C~‑80°C冷冻干燥至恒重，即获得水凝胶固化漆酶‑介体酶促反应器；本发明获得的水凝胶固化漆酶‑介体酶促反应器，具有吸附与降解功能，可促进水体中的污染物与酶促反应体系的接触，提高降解效率，且避免了因漆酶被动适应载体所导致的酶构型变化甚至活性的降低，漆酶固载率高于90%，酶活回收率达11.2%。

摘要： 本发明公开了一种提高酶促反应过程中脂肪酶使用效率的方法，属于食品加工技术领域。本发明利用蒸馏法或吸附法来降低酶法合成结构脂所需原料的过氧化值后，再和脂肪酶发生催化反应合成结构脂，由此维持脂肪酶活性，增加酶的重复利用率，其中，蒸馏法包括脱臭、分子蒸馏中的一种或两种。本发明提供了一种高效率、低成本酶法合成结构脂方法，避免了传统工业化生产中酶法合成结构脂过程酶消耗大、酶成本昂贵且酶利用效率低等弊端，具有一定发展潜力和实际意义。

摘要： 本发明公开了一种需氧型酶促反应中酶活性的检测方法，包括如下步骤：S1、在空气环境中，将酶溶液置于容器中，加入底物混匀，然后密封容器，反应Tmin，得到反应液，检测反应液中目标产物的浓度C；其中，酶溶液的体积V＝2‑6mL，容器体积和酶溶液体积的比值≥2；S2、酶活计算公式＝1000*C*V/(M*T*m)，其中，C的单位为mg/mL；V为酶溶液的体积，单位为mL；M为目标产物的相对分子量，单位为g/mol；T的单位为min；m为酶的重量，单位为g。本发明还公开了一种判断重组大肠杆菌发酵培养终点的方法。本发明对需氧型酶促反应的酶活性检测结果准确度高，重复性好。

摘要： 本发明属于生物酶应用装置领域，公开了连续式“多酶多级联用”智能控制高效酶促反应装置，克服了现有加工过程中“多酶多级”酶解技术的短板和繁琐工艺以及酶促反应的效率低下，酶解不完全，部分酶解产物转移困难等问题，利用该酶促反应装置，可以提高酶解反应效率和酶解产物的产量，上述装置用于牛乳过敏源的降解，多级酶解反应多角度整体降低牛乳过敏源的含量，减少了单一酶解的繁琐工艺，为牛乳生产提高极大的便利。

摘要： 本发明公开了一种基于双水相体系的载酶海藻酸钙微球强化级联酶促反应方法，包括以下步骤：步骤1：分别配置质量浓度为8%的PEG水溶液和质量浓度8%的Dex水溶液；充分混合后分相，上相为PEG溶液，下相为Dex溶液；步骤2：Dex溶液中加入海藻酸钠和目标酶溶液，形成含目标酶的Dex‑海藻酸钠溶液，其中海藻酸钠的质量浓度为0.5%；步骤3：以步骤1制备得到的PEG溶液为外水相，以步骤2得到的含目标酶的Dex‑海藻酸钠溶液为内水相，通过同轴毛细管在其锥尖处形成双水相海藻酸钠液滴；步骤4：将双水相海藻酸钠液滴导入PEG‑氯化钙水溶液中即生成载酶海藻酸钙微球，通过自发“排液”分区，使得酶促反应在海藻酸钙微球界面进行，缩短了中间产物的传质距离，强化了级联酶促反应。本发明构建了一种制备方法简单、生物相容性高且高效的级联酶促反应强化体系。

摘要： 本发明公开了一种检测硝基还原酶的荧光探针及其制备方法与酶促反应的应用，属于工业分析检测技术领域。所述荧光探针为3‑(4‑(2‑(4'‑(二苯胺基)‑3‑((4‑硝基苄基)氧基)‑[1,1'‑联苯基]‑4‑基)乙烯基)喹啉‑1‑溴)丙烷‑1‑磺酸盐。本发明的探针化合物通过引入亲水性基团磺酸根和喹啉盐类增强其亲水性，在硝基还原酶（NTR）的催化下发生1,6‑重排和消除反应，生成羟基，通过分子内电荷转移效应（ICT）引发的荧光变化来实现对酶促反应中NTR的检测分析。该方法具有制备简便、产率较高、且适用于检测酶促反应中高浓度酶含量等优点，在化工领域中的酶促反应体系酶检测领域显示了极大的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种水凝胶固化漆酶-介体酶促反应器，其是由以下方法获得：（1）将β-双酮溶于漆酶溶液A中，得到溶液C；（b）向三口烧瓶中加入烯类共聚单体、交联剂和溶液C；（c）向三口烧瓶中通入惰性气体反应10-20min，后置于15°C~65°C恒温水浴30-90min，获得水凝胶；（d）将水凝胶水洗4-8遍，置于-50°C~-80°C冷冻干燥至恒重，即获得水凝胶固化漆酶-介体酶促反应器；本发明获得的水凝胶固化漆酶-介体酶促反应器，具有吸附与降解功能，可促进水体中的污染物与酶促反应体系的接触，提高降解效率，且避免了因漆酶被动适应载体所导致的酶构型变化甚至活性的降低，漆酶固载率高于90%，酶活回收率达11.2%。