酶谱

摘要： 本试验旨在研究外源非淀粉多糖酶的最适配比及其对体外发酵参数的影响。通过反刍动物瘤胃体外发酵模型进行体外消化试验,采用单因素完全随机试验设计,在断奶育肥羔羊饲粮中分别添加7种不同水平的4种酶(纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶),每个水平设3个重复。以产气量(GP)及干物质降解率(DMD)为评价指标,确定单酶的最佳添加量;在此基础上,利用正交设计4因子3水平L_(9)(3~4)试验,对4种酶进行复配组合,确定最适配比;以在基础饲粮中添加最适配比外源复合非淀粉多糖酶的试验饲粮(试验组)与基础饲粮(对照组)进行体外发酵对比,分别测定在不同发酵时间(2、4、6、8、12、24、48 h)的GP、DMD及发酵参数。结果表明:以断奶育肥羔羊饲粮为底物优选出4种酶,最佳添加量为纤维素酶750 U/g、木聚糖酶125 U/g、β-葡聚糖酶750 U/g、甘露聚糖酶125 U/g;由此催化反应的GP和DMD最适配比为纤维素酶∶木聚糖酶∶β-葡聚糖酶∶甘露聚糖酶=1 000∶250∶500∶50(U/g,干物质基础);最适配比外源复合非淀粉多糖酶在瘤胃体外发酵中的应用结果显示,培养48 h后,各组发酵液pH均处于正常水平;试验组平均GP、DMD、氨态氮(NH_(3)-N)浓度极显著高于对照组(P0.05);试验组与对照组的丙酸、丁酸、总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度与乙丙比(A/P)差异极显著(P<0.01)。由此可见,添加适宜配比[纤维素酶∶木聚糖酶∶β-葡聚糖酶∶甘露聚糖酶=1 000∶250∶500∶50(U/g,干物质基础)]的外源复合非淀粉多糖酶可增加体外发酵GP、DMD,改善瘤胃发酵,具有促进饲粮中营养物质消化的潜力。

摘要： 本研究从杭州西溪湿地采集到一株白腐真菌的子实体,并分离其菌丝,编号为H-1.结合形态学特征、ITS序列分析和进化树分析,菌株H-1与Trametes sanguinea的同源性最高,鉴定为血红栓菌Trametes sanguinea H-1.进一步研究在液态发酵条件下碳源、氮源、诱导剂和摇瓶装液量对Tsanguinea H-1胞外漆酶产量的影响,结果表明,以小麦淀粉为碳源,酒石酸铵为氮源,硫酸铜为诱导剂,250 mL的摇瓶装液量为100mL,血红栓菌H-1产漆酶的酶活力最高,其酶活力达到3527.8 U/L.native-PAGE分析,其漆酶可能大小约为45 kDa的单一蛋白.血红栓菌H-1漆酶对刚果红脱色率达到65.4％,对孔雀石绿脱色率达到47.5％,对亚甲基蓝的脱色率达到31.3％.本研究可为血红栓菌H-1在染料废水脱色的应用奠定基础.

摘要： 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对黑龙江省主栽的2个黑木耳品种采集的10个不同地区引种的栽培菌株,进行了酯酶同工酶酶谱多样性比较研究.结果表明,10个菌株酯酶同工酶谱共有8条谱带,相似酶带较多,相似系数在0.81～1.00.在相似水平为0.81时,可将10个菌株分为3个组群.第1组群包括:8个菌株;第2、第3组群各1个菌株,同一品种不同来源引种的菌株酶谱差异显著,而不同品种的酶谱却无差异,表明用种市场菌种名称较为混乱.

摘要： 脂肪酶生产成本较高,它的应用受到一定限制,因此利用生物工程技术使得脂肪酶的生产水平得到提升是亟需解决的难题.认识微生物脂肪酶基因表达调控规律,有助于通过基因工程技术,高水平表达生产脂肪酶,而微生物脂肪酶基因表达调控蛋白研究技术的进步决定着其成果的先进性.纵览近年微生物脂肪酶基因表达调控蛋白的研究技术,主要有电泳技术、圆二色谱、酶谱、DNA宏观阵列技术、质谱、分子对接等,并分析应用此类研究技术的发展方向.发现与微生物细胞表达脂肪酶蛋白调控相关蛋白,就可以对微生物细胞表达脂肪酶的生产过程进行调控操作,使得细胞的代谢过程向着有利于脂肪酶的生产的方向进行.

摘要： 以黄芩单细胞克隆愈伤组织为试材,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法,通过分析酯酶同工酶(EST)和过氧化物同工酶(POD)的酶带,研究黄芩单细胞克隆愈伤组织与亲本愈伤组织的遗传特性与品系差异.结果表明:黄芩不同品系单细胞克隆愈伤组织EST谱带间具3个带区特征,最多谱带数品系为4条,最少谱带数品系为3条,其中1号、2号、3号谱带为黄芩单细胞克隆愈伤组织的特征谱带;POD谱带间具4个带区特征,其中1号、3号和7号酶带为特征谱带,EST和POD谱带的有无、宽窄、颜色深浅,相对迁移率大小均不尽相同.黄芩单细胞克隆愈伤组织与亲本细胞愈伤组织既具有亲缘特征又具有品系差异,以期为单细胞克隆品系的遗传特性和品系鉴别提供理论参考.

摘要： 以‘杏鲍菇1号’和‘杏鲍菇2号’为试验菌株,在24°C条件下分别培养5、7、9、11、13、15 d,分析2个菌株酯酶同工酶酶带变化情况.结果表明:‘杏鲍菇1号’和‘杏鲍菇2号’均在培养13 d时酶带最多并且最为清晰,说明13 d为杏鲍菇酯酶同工酶最佳的培养时间.

摘要： 以8个广泛种植的番茄品种为材料,对番茄苗期叶和茎过氧化物酶同工酶酶活、酶谱进行分析.结果表明,中杂9号叶酶活性最高,中杂11号叶酶活性最弱,叶酶活均高于茎酶活；叶片共出现4条酶带,不同品种酶带数为2～4条,不同品种茎的酶带数均出现2条.根据酶谱距离进行聚类分析发现,8个番茄品种亲缘关系较近.

摘要： 通过对前期筛选到的一株嗜热真菌Talaromyces thermophilus WYN9进行产木聚糖酶的诱导和非诱导培养。诱导培养的上清液中可以检测到木聚糖酶酶活。在非变性胶和变性胶SDS-PAGE中，诱导和非诱导的酶谱条带差异明显。以非诱导酶谱为对照，将诱导酶谱中与其有显著差异的条带切下，回收蛋白，测定酶活。将有木聚糖酶酶活的蛋白通过SDS-PAGE进一步分离纯化，切胶后使用胶内酶切法进行预处理，使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）进行分析。结果表明该蛋白与拟青霉属Paecilomyces sp. J18的内切木聚糖酶高度同源。根据质谱分析结果设计兼并引物，通过交错式热不对称PCR（thermal asymmetric interlaced PCR，TAIL-PCR）扩增，获得了TtXynA基因全长。根据Kimura双参数模型用临近相邻法构建了TtXynA及其同源蛋白的进化树。%A thermophilic fungus with xylanase activity, Talaromyces thermophilus WYN9, isolated in our previous study was cultured by the induced and non-induced mode. The xylanase activity was detected in liquid supernatant of induced culture model. The significant differences were observed between induced and non-induced zymogram bands both in non-denaturing gel and denaturing gel SDS-PAGE. The different bands were cut and the xylanase activities were detected. The recovered protein with xylanase activity was analyzed by MALDI-TOF. The result showed that the identified protein has high homology with an endo-xylanse from Paecilomyces sp. J18. Degenerate primers were designed according to the analysis results of mass spectrum and the full-length of TtXynA was obtained by TAIL-PCR amplification. NJ tree of TtXynA homologous proteins was constructed based on Kimura two-parameter distance.

摘要： 采用铁氢化钾染色法对珙桐和光叶珙桐进行CAT酶谱分析；用碘量法进行CAT酶活性的研究。研究结果：珙桐有酶带两条，Rf值分别为0.74和0.9，CAT酶活性为0.40824 mg.g-1·min-1；光叶珙桐也有两条酶带，Rf值分别为0.76和0.93，CAT酶活性为1.3608 mg·g-1.min-1；表明珙桐和光叶珙桐在遗传特性、生物进化等方面存在差异性；光叶珙桐代谢比珙桐旺盛，光叶珙桐是珙桐的变种，抗逆性更强。为珙桐种质生化分析、植物学分类及品种选育奠定了理论基础。

摘要： 本试验利用超声波破碎仪对特异腐质霉Humicola insolens (YH-8)进行细胞壁破碎,确定该菌所产的纤维素酶为微生物细胞外酶;其所产的粗酶液经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,确定其粗酶液为多组分酶,其组分不少于5个。

摘要： 选取临床健康、体重15±1kg的杜长大三元杂交猪150头,随机分成3组,每组50头,其中Ⅰ组饲喂基础日粮+0.8％复方绞股蓝粉剂,Ⅱ组饲喂基础日粮+0.5％复方绞股蓝粉剂,Ⅲ组为对照组,只饲喂基础日粮.试验结束后,空腹耳静脉采血,分离血清,测定血清中9种血清酶的活性,并进行乳酸脱氢酶(LD)同工酶电泳分离鉴定.试验结果表明:Ⅰ、Ⅱ组胆碱脂酶(CHE)活性显著低于Ⅲ组(P＜0.05),其他各种血清酶活性差异均不显著(P＞0.05);LD同工酶各条酶带相对迁移率(Rf值)Ⅰ、Ⅱ组与Ⅲ组差异均极显著(P＜0.01).

摘要： 鸡(土丛)菌(Termitomyces albuminosus(Berk.)Heim)隶属于蚁巢伞属的一个种,与土栖白蚁共生,因其肉质鲜美,营养价值高而闻名中外,在《本草纲目》中,有"益胃清神"药效的记载.作者在研究了鸡(土丛)菌的营养生长条件和生态因子的基础上,对鸡(土丛)菌酯酶同工酶的遗传表型及其活性与多糖含量变化关系等特性进行了探讨.结果表明,鸡(土丛)菌斜面培养的菌落和深层培养的菌苔具有相同的酶谱表型,呈现EST-1、EST-2、EST-3和EST-4四条稳定的酶带;深层培养的菌球则有相对独立的酶谱表型,仅呈现EST-2和EST-3两条酶带.鸡(土丛)菌EST活性及多糖含量均因生长发育阶段不同而表现出规律性的变化,并在菌丝体生长的第三天达到高峰.有EST酶谱分析的同时,对所分析的各样品菌体进行系统的形态结构观察.结果表明,鸡(土丛)菌菌体的形态结构组成可随生长条件的变化而改变,其固体斜面菌落和液体培养表面菌苔均由菌丝、分生孢子和球状胞三部分组成,其EST酶谱表现为EST-1、EST-2、EST-3和EST-4四条酶带,而培养液内形成的菌球则主要由菌丝组成,其酶谱区带为EST-2和EST-3.有时在菌球中发现混入少量分生孢子和球状胞,则酶带相应的增至四条,出现微弱的EST-1和EST-4.

摘要： 本发明公开了一种温和还原剂酶解组织样本的酶解方法及其质谱检测方法。本发明提供了一种裂解液，其包括：终浓度为质量分数1‑4％的去污剂；所述的去污剂为脱氧胆酸钠和/或碳酸氢铵；终浓度为5‑20μM的3‑(2‑羧基)膦盐酸盐；终浓度为20‑60mM的5‑氯‑邻氨基苯甲酸；终浓度为50‑200mM的三(羟甲基)氨基甲烷‑盐酸；终浓度为0.1‑2mM的苯甲基磺酰氟；和水。组织样本经本发明的裂解液裂解后，能高得率得到组织蛋白和肽段。

摘要： 一种测定水生植物根际磷酸酶活性二维空间分布的酶谱方法,其包括酶谱成像系统的搭建、酶谱校准曲线的绘制以及实际测定沉积物中水生植物根际酸、碱磷酸酶活性的二维分布，本发明保持了磷酸酶在沉积物中的原始状态，能够更真实地反映沉积物中水生植物磷酸酶酶原位活性，使用聚丙烯酰胺凝胶作为扩散层，可以通过减小膜的厚度降低底物以及荧光标记物在凝胶中的横向扩散，提高了空间分辨率。

摘要： 本发明是一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，属于土壤酶谱法技术领域。本发明的目的在于提供一种以琼脂糖、明胶、β‑环状糊精和PBS（磷酸盐缓冲溶液）为实验原料制备的原位凝胶技术，可用于根际土壤中蛋白酶分布的测定，也可广泛用于蛋白酶酶谱法实验材料。这种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备技术填补了相关凝胶制备技术的缺失，通过制备高质量的原位凝胶对实验土壤进行孵育，绘制成酶谱图，为土壤中酶活性计算提供便利。

摘要： 本发明公开了一种蛋白酶谱电泳检测方法在快速鉴定蛋白酶种类上的应用，包括以下步骤：a.制备不含蛋白酶底物的SDS聚丙烯酸胺凝胶；b.蛋白酶样品与不含β‑巯基乙醇的加样缓冲液混匀后加样，且加样时样品不在沸水浴中加热；c.电泳；d.洗胶；e.将胶在含有不同蛋白酶抑制剂的底物溶液中浸泡；f.反应显色。本发明方法能对不同蛋白酶进行定性，比传统方法在耗时上明显缩短；省去了分离纯化蛋白酶的繁琐步骤；重复性好，灵敏度高，活性条带测定准确，非常有利于后续的蛋白酶鉴定及有目的的纯化工作；可以用于各种蛋白酶类型的检测，有广阔的应用空间。

摘要： 本发明公开了一种用于筛选微生物胞外胶原酶的酶谱方法，以利用胶原酶对胶原蛋白的特异性降解作用对胶原酶进行酶谱分析。电泳过程中所采用的凝胶为在10％SDS-PAGE凝胶中添加质量体积比浓度为0.1％的Ⅰ型胶原蛋白。凝胶的处理过程为：电泳结束后先将凝胶用洗脱液振荡洗脱，随后用漂洗液振荡漂洗，最后将凝胶用孵育液在37°C下静置孵育12h；孵育结束后将凝胶先经考马斯亮蓝R-250染色液染色1h，再经脱色液室温振荡脱色直至透明条带清晰。该方法将Ⅰ型胶原蛋白配制到SDS-PAGE凝胶中,凝胶中Ⅰ型胶原蛋白的终浓度为0.1％，在该底物浓度下，胶原酶负染条带以及标准蛋白质标准条带能够同时在凝胶上显色，填补了胶原酶酶谱检测领域的技术空白。

摘要： 一种测定水生植物根际磷酸酶活性二维空间分布的酶谱方法,其包括酶谱成像系统的搭建、酶谱校准曲线的绘制以及实际测定沉积物中水生植物根际酸、碱磷酸酶活性的二维分布，本发明保持了磷酸酶在沉积物中的原始状态，能够更真实地反映沉积物中水生植物磷酸酶酶原位活性，使用聚丙烯酰胺凝胶作为扩散层，可以通过减小膜的厚度降低底物以及荧光标记物在凝胶中的横向扩散，提高了空间分辨率。

摘要： 本发明提供了一种检测角蛋白酶活力的酶谱方法，在角蛋白底物处理、制胶、电泳及水解条带显色步骤做了改进，包括(A)将10g角蛋白底物和500ml有机溶剂加入回流冷凝装置中，于80‑100°C消煮60‑100min；用两倍体积经4°C预冷的丙酮沉淀角蛋白；离心收集角蛋白沉淀，清洗后于4°C晾干；(B)在制备分离胶时，加入由(A)处理所得角蛋白底物，使得其质量百分含量为0.1％，然后于室温下以100r/min的速度搅拌1h，离心取上清，进行配置质量浓度为12％的分离胶。本发明克服了传统酶谱方法底物特异性低、水解条带区分度低、灵敏度低等局限，提供了一种准确、灵敏的检测角蛋白酶活力的酶谱方法。

摘要： 本发明是一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，属于土壤酶谱法技术领域。本发明的目的在于提供一种以琼脂糖、明胶、β‑环状糊精和PBS（磷酸盐缓冲溶液）为实验原料制备的原位凝胶技术，可用于根际土壤中蛋白酶分布的测定，也可广泛用于蛋白酶酶谱法实验材料。这种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备技术填补了相关凝胶制备技术的缺失，通过制备高质量的原位凝胶对实验土壤进行孵育，绘制成酶谱图，为土壤中酶活性计算提供便利。

摘要： 本发明公开了一种用于筛选微生物胞外胶原酶的酶谱方法，以利用胶原酶对胶原蛋白的特异性降解作用对胶原酶进行酶谱分析。电泳过程中所采用的凝胶为在10％SDS-PAGE凝胶中添加质量体积比浓度为0.1％的Ⅰ型胶原蛋白。凝胶的处理过程为：电泳结束后先将凝胶用洗脱液振荡洗脱，随后用漂洗液振荡漂洗，最后将凝胶用孵育液在37°C下静置孵育12h；孵育结束后将凝胶先经考马斯亮蓝R-250染色液染色1h，再经脱色液室温振荡脱色直至透明条带清晰。该方法将Ⅰ型胶原蛋白配制到SDS-PAGE凝胶中,凝胶中Ⅰ型胶原蛋白的终浓度为0.1％，在该底物浓度下，胶原酶负染条带以及标准蛋白质标准条带能够同时在凝胶上显色，填补了胶原酶酶谱检测领域的技术空白。

摘要： 本发明公开了一种蛋白酶谱电泳检测方法在快速鉴定蛋白酶种类上的应用，包括以下步骤：a.制备不含蛋白酶底物的SDS聚丙烯酸胺凝胶；b.蛋白酶样品与不含β-巯基乙醇的加样缓冲液混匀后加样，且加样时样品不在沸水浴中加热；c.电泳；d.洗胶；e.将胶在含有不同蛋白酶抑制剂的底物溶液中浸泡；f.反应显色。本发明方法能对不同蛋白酶进行定性，比传统方法在耗时上明显缩短；省去了分离纯化蛋白酶的繁琐步骤；重复性好，灵敏度高，活性条带测定准确，非常有利于后续的蛋白酶鉴定及有目的的纯化工作；可以用于各种蛋白酶类型的检测，有广阔的应用空间。