集落形成

摘要： 目的探讨维生素K1(VK1)联合X射线对非小细胞肺癌细胞存活能力的影响。方法选取人非小细胞肺癌细胞A549进行低密度培养,应用不同浓度(0、6.25、12.50、25.00μg/ml)的VK1处理细胞,分别作为对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组,1天后进行X射线照射(每个VK1剂量组均设未照射对照组),照射剂量为2 Gy,照射后第8天,应用瑞氏-姬姆萨染液进行染色,对≥50个细胞的集落进行计数,计算集落形成效率及存活分数。通过计算药物相互作用系数(CDI)判断VK1和X射线之间的相互作用。结果高浓度组细胞集落数量低于中浓度组、低浓度组、对照组,且中浓度组细胞集落数量低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。对于未照射X射线的A549细胞,中浓度组和高浓度组细胞存活分数均低于对照组和低浓度组,高浓度组细胞存活分数低于中浓度组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。对于照射X射线的A549细胞,低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞存活分数均低于对照组,中浓度组和高浓度组细胞存活分数均低于低浓度组,高浓度组细胞存活分数低于中浓度组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。照射X射线的各组细胞存活分数均低于未照射X射线的各组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。低浓度、中浓度、高浓度VK1与X射线联合作用的CDI分别为0.57、0.33和0.07,均明显小于0.7。结论VK1对非小细胞肺癌细胞具有剂量依赖性抑制作用,其与X射线联合使用对非小细胞肺癌细胞具有协同抑制作用。

摘要： 目的探讨大蒜素(allicin)对人卵巢癌普通型HO-8910和高侵袭型HO-8910PM细胞株增殖的影响及诱导细胞凋亡机制、作用效果比较。方法不同浓度的大蒜素作用于人卵巢癌HO-8910和HO-8910PM细胞株不同时间,采用MTT法观察细胞活力;集落形成实验计算克隆形成率;PI/Hochest 33342荧光染色,检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3和PARP蛋白表达。结果大蒜素能显著抑制HO-8910和HO-8910PM细胞的增殖和集落形成,影响caspase-3的活性和PARP蛋白裂解(P<0.05),呈时间和剂量依赖性;HO-8910PM细胞对大蒜素的敏感度均强于HO-8910细胞。结论大蒜素可显著抑制卵巢癌细胞增殖,可能通过调节caspase-3和PARP诱导细胞凋亡,且高侵袭性卵巢癌细胞更敏感。

摘要： 目的探讨微小RNA-196b(miR-196b)靶向同源盒(HOX)A9对胶质瘤细胞集落形成及凋亡的影响。方法实验分为正常组、mimic对照组、miR-196b mimic组、inhibitor对照组、miR-196b inhibitor组。除正常组外,其余各组参照Lipofectamine 2000说明书分别转染miR-196b mimic NC、miR-196b mimic、miR-196b inhibitor NC、miR-196b inhibitor。CCK-8检测细胞增殖情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-196b、HOXA9 mRNA水平;集落形成实验检测细胞克隆能力;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞中HOXA9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平;双荧光素酶鉴定miR-196b与HOXA9的靶向关系。结果与正常组、mimic对照组相比,miR-196b mimic组细胞培养12、24、36、48 h OD450,miR-196b、HOXA9 mRNA和蛋白,细胞集落形成率,Bcl-2蛋白水平均明显升高(P<0.05);细胞凋亡率,Bax蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与正常组、inhibitor对照组相比,miR-196b inhibitor组细胞培养12、24、36、48 h OD450,miR-196b、HOXA9 mRNA和蛋白,细胞集落形成率,Bcl-2蛋白水平均明显下降(P<0.05);细胞凋亡率,Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论降低miR-196b可通过靶向抑制HOXA9表达,从而减少胶质瘤细胞集落形成、促进细胞凋亡,实现对胶质瘤细胞的保护。

摘要： 目的 探索无翅型MMTV整合位点家族成员5B(wingless-type MMTV integration site family member 5B,WNT5B)对胃癌细胞的集落形成、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 采用蛋白质免疫印迹法检测WNT5B在癌旁非肿瘤胃组织和胃肿瘤组织、人正常胃粘膜细胞(GES-1)以及胃癌细胞(MGC-803、SGC-790、AGS和MKN-45)中的表达情况;采用shRNA法干扰SGC-790和AGS细胞中WNT5B的表达后,分别采用集落形成法、划痕法和Transwell小室法检测胃癌细胞的集落形成率、迁移和侵袭;采用免疫荧光法和蛋白质免疫印迹法检测β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平.结果 WNT5B在胃肿瘤组织和胃癌细胞中高表达.干扰WNT5B可抑制胃癌细胞的集落形成、迁移和侵袭并下调β-catenin、c-Myc和cyclinD1表达水平.结论 干扰WNT5B可能通过降低β-catenin信号通路活性抑制胃癌细胞的集落形成、侵袭和迁移.

摘要： 目的 探讨转录因子N R4 A2对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响.方法 培养人正常乳腺上皮细胞MCF 10A和乳腺癌细胞系HBL101、MDA-MD-435、MCF-7及HS598T,观察NR4A2在各细胞株中的表达;选择NR4A2表达最低的MCF-7细胞株分别转染oe-NC(oe-NC组)、转染si-NC(si-NC组)、转染NR4A2过表达质粒(oe-NR4A2组)和转染si NR4A2干扰序列(si-NR4A2组);采用qRT-PCR检测NR4A2、PCNA、Bcl-2和Bax mRNA表达水平,Western Blot检测NR4A2、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖能力,集落形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 与人正常乳腺上皮细胞MCF 10A比较,HBL101、MDA-MD-435、MCF-7和HS598T细胞中NR4A2 mRNA表达降低,其中MCF-7细胞系中表达量最低(P<0.05);与oe-NC组比较,oe-NR4A2细胞中NR4A2和Bax mRNA和蛋白表达量升高,PCNA和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力和集落形成能力降低,凋亡率升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-NR4A2组细胞中NR4A2和Bax mRNA和蛋白表达量降低,PCNA和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力和集落形成能力升高,凋亡率降低(P<0.05).结论 过表达转录因子NR4A2可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进其凋亡.

摘要： 目的探讨转录因子NR4A2对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法培养人正常乳腺上皮细胞MCF 10A和乳腺癌细胞系HBL101、MDA-MD-435、MCF-7及HS598T,观察NR4A2在各细胞株中的表达;选择NR4A2表达最低的MCF-7细胞株分别转染oe-NC(oe-NC组)、转染si-NC(si-NC组)、转染NR4A2过表达质粒(oe-NR4A2组)和转染si NR4A2干扰序列(si-NR4A2组);采用qRT-PCR检测NR4A2、PCNA、Bcl-2和Bax mRNA表达水平,Western Blot检测NR4A2、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖能力,集落形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与人正常乳腺上皮细胞MCF 10A比较,HBL101、MDA-MD-435、MCF-7和HS598T细胞中NR4A2 mRNA表达降低,其中MCF-7细胞系中表达量最低(P<0.05);与oe-NC组比较,oe-NR4A2细胞中NR 4 A 2和Bax mRNA和蛋白表达量升高,PCNA和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力和集落形成能力降低,凋亡率升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-NR4A2组细胞中NR 4 A 2和Bax mRNA和蛋白表达量降低,PCNA和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力和集落形成能力升高,凋亡率降低(P<0.05)。结论过表达转录因子NR4A2可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进其凋亡。

摘要： 目的 观察环状RNA BTG2(CircBTG2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达变化,以及过表达Cir-cBTG2对ESCC细胞增殖、迁移、侵袭、集落形成等生物学行为的影响及其分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR法检测ESCC组织(33例份)及正常食管黏膜组织(13例份)中CircBTG2相对表达量.将人ESCC细胞系KYSE150分为三组,CircBTG2过表达组转染CircBTG2过表达载体,空载体组转染空白载体,对照组不进行转染,作用6 h.采用CCK-8法检测三组细胞培养24、48、72、96 h的细胞增殖能力(以OD450表示),细胞划痕实验、细胞侵袭实验和集落形成实验记录三组细胞的迁移距离、侵袭细胞数、集落形成数.双荧光素酶报告基因实验检测CircBTG2与miR-92b-3p结合情况.结果 正常食管黏膜组织、ESCC组织中CircBTG2相对表达量分别为4.75±1.15、3.21±1.25,两者比较P0.05;培养72、96 h,过表达组OD450明显低于对照组和空载体组(P均0.05.双荧光素酶报告基因实验结果显示,共转染野生型CircBTG2和miR-92b-3p模拟物的KYSE150细胞荧光素酶活性降低(P<0.01).结论 ESCC组织中CircBTG2表达降低,过表达CircBTG2可能通过与miR-92b-3p结合而抑制ESCC细胞增殖、迁移、侵袭及集落形成等生物学行为.

摘要： 目的:探究DIS3表达调控对人骨髓瘤细胞集落形成及内皮细胞成管能力的影响及相关机制.方法:选取人骨髓瘤细胞株NCI-H929、RPMI-8226和U266为研究对象,分别设计并构建DIS3基因过表达载体和DIS3-siRNA.3种细胞实验均分成5组:对照(control)组、siRNA阴性对照(siRNA-NC)组、siRNA-DIS3组、空载体(empty vector)组以及DIS3过表达(over-DIS3)组.平板集落形成实验检测各组细胞的集落形成能力;Western blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和HIF-3α 蛋白表达的变化;RT-qPCR及Western blot检测血管形成相关基因Ang1、Ang2及VEGF-A在mRNA和蛋白水平上的表达;Matrigel法检测各组细胞培养上清液对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)管形结构生成能力的影响.结果:下述检测指标的变化趋势在NCI-H929、RPMI-8226和U2663种细胞中存在相似性:与空载体组比较,DIS3过表达组的细胞集落形成能力被显著抑制(P<0.05);而与siRNA-NC组比较,siRNA-DIS3显著增强细胞的集落形成能力(P<0.01).DIS3过表达降低了HIF-1α 和HIF-3α 蛋白的表达(P<0.05),敲减DIS3表达则显著促进了HIF-1α 和HIF-3α 蛋白的表达(P<0.05).此外,DIS3过表达显著降低了Ang1和Ang2及VEGF-A的mRNA和蛋白水平(P<0.05),而siRNA-DIS3则显著促进了Ang1和Ang2及VEGF-A的表达(P<0.05).与空载体组比较,DIS3过表达组细胞培养上清液显著抑制了HUVECs的成管能力(P<0.01);而与siRNA-NC组比较,siRNA-DIS3组细胞培养上清液则显著提高了HUVECs的成管能力(P<0.05).结论:DIS3过表达能显著抑制人骨髓瘤细胞的集落形成能力及HUVECs的成管能力,这可能与其对HIF-1α 和HIF-3α 蛋白表达的调控密切相关.

摘要： 目的:观察Bmi-1基因沉默对白血病K562细胞体内外增殖能力的影响并初步探究二者之间的分子机制是否与PTEN/pAKT通路有关.方法:将Bmi-1小干扰RNA(siRNA)序列转染到K562细胞中降低其Bmi-1的表达;应用MTT比色法和软琼脂集落形成实验检测Bmi-1-siRNA时K562细胞体外增殖的影响;裸鼠皮下接种各组细胞,观察Bmi-1-siRNA对K562细胞在裸鼠体内的致瘤能力的影响;应用Western blot检测Bmi-1、PTEN、p-AKT等蛋白的表达.结果:Bmi-1-siRNA有效沉默了Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达;沉默Bmi-1基因的表达能够抑制K562细胞的增殖活性、集落形成及裸鼠成瘤能力;Bmi-1基因沉默后,干扰组PTEN表达明显升高,而p-AKT活性明显下降;p-AKT抑制剂LY294002处理K562细胞后,p-A KT表达降低,集落形成及裸鼠成瘤能力相比未处理K562细胞降低;PTEN抑制剂Bpv处理K562-S1细胞后,PTEN的表达降低,而p-AKT、集落形成及裸鼠成瘤能力得以重塑.结论:Bmi-1基因有可能参与了对白血病细胞K562的体内外增殖能力的调控,PTEN/pAKT信号通路可能是介导这一调控过程的分子机制之一.

摘要： 目的：检测藏红花素对骨髓造血干/祖细胞集落形成的影响.方法：提取骨髓单个核细胞进行集落培养,分为空白对照组及藏红花素组,藏红花素浓度分别为250ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、2000ng/ml,培养14天进行集落计数.结果：藏红花素浓度≤1000ng/ml时随藏红花素浓度增加集落计数增加,1000ng/ml时增加最显著;藏红花素浓度增加至2000ng/ml时集落计数减少;增加至4000ng/ml时不形成集落.结论：适宜浓度的藏红花素(500-1000ng/ml)可提高骨髓造血干/祖细胞集落形成.

摘要： 骨髓中成纤维细胞集落形成单位(Colony forming unit-fibroblastic,CFU-F)的数量是研究骨髓基质细胞增殖与分化的一项重要参数.本文通过计数在体外培养条件下定量接种骨髓的CFU-F克隆数量观察了新西兰白兔胫骨、股骨、坐骨上三个穿刺点抽取的骨髓中CFU-F在下述情况中的数量差异:同一部位分别抽取不同量骨髓(0.2ml,2ml,2ml,1ml);同一部位前后两次(间隔一周)抽取同量骨髓(2ml);不同性别:不同年龄(4～6个月,1～1.5岁,2.5～3岁).结果显示:与首次抽取骨髓(0.2ml)比较,各穿刺点第二次抽取的骨髓(2ml)CFU-F数量虽略有下降,但变化不明显,继续抽取骨髓(分别为2ml,1ml),其CFU-F值均比前一次抽取的骨髓明显下降.通过检测股骨上穿刺点每次抽取前的骨髓像变化证实这种现象是穿刺部位骨髓被外周血稀释的结果;胫骨骨髓中CFU-F数量略低于股骨和坐骨骨髓;同一部位后次抽取的骨髓CFU-F数量明显低于前次;雄性兔骨髓CFU-F数量略低于雌性兔,但差异无显著性;上述三个年龄组骨髓中CFU-F数量无明显差异.提示在研究兔骨髓基质细胞时,若实验要求应用较为纯净的骨髓,抽取骨髓量应在2ml以内为宜或多处取材,避免短期内在同一部位重复取材.

摘要： 本文研究目的:探讨糖尿病对兔骨髓内皮祖细胞和循环晚期内皮祖细胞集落形成能力以及增殖和黏附功能的影响. 研究方法:四氧嘧啶诱导兔糖尿病模型后培养糖尿病组(n=6)和对照组(n=6)动物骨髓内皮祖细胞和循环晚期内皮祖细胞;观察两组动物内皮祖细胞集落形成数;MTT法检测两组动物两种内皮祖细胞增殖能力的差异;观察两组动物两种细胞对纤维连接蛋白的黏附能力的差异. 研究结果:糖尿病和正常兔BM-EPC的集落形成能力以及细胞增殖、黏附能力无差别;糖尿病减少Late EPC集落形成数量,抑制细胞增殖和黏附. 研究结论:糖尿病对BM-EPC和Late EPC功能的影响存在差异,对BM-EPC的数量和增殖、黏附无影响,但抑制BM-EPC动员进入血循环.糖尿病抑制Late EPC的增殖和黏附.

摘要： 本实验以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，采用无血清悬浮培养法培养肿瘤干细胞球，进一步分析其生物学特性，指出胰腺癌肿瘤细胞中有肿瘤干细胞的存在;能使用无血清培养法分离畜集干细胞，为后续的研究提供基础。

摘要： 本实验以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，采用无血清悬浮培养法培养肿瘤干细胞球，进一步分析其生物学特性，指出胰腺癌肿瘤细胞中有肿瘤干细胞的存在;能使用无血清培养法分离畜集干细胞，为后续的研究提供基础。

摘要： 本实验以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，采用无血清悬浮培养法培养肿瘤干细胞球，进一步分析其生物学特性，指出胰腺癌肿瘤细胞中有肿瘤干细胞的存在;能使用无血清培养法分离畜集干细胞，为后续的研究提供基础。

摘要： 本实验以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，采用无血清悬浮培养法培养肿瘤干细胞球，进一步分析其生物学特性，指出胰腺癌肿瘤细胞中有肿瘤干细胞的存在;能使用无血清培养法分离畜集干细胞，为后续的研究提供基础。

摘要： 本实验以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象，采用无血清悬浮培养法培养肿瘤干细胞球，进一步分析其生物学特性，指出胰腺癌肿瘤细胞中有肿瘤干细胞的存在;能使用无血清培养法分离畜集干细胞，为后续的研究提供基础。

摘要： 本公开内容通常涉及可用于细胞和组织生物学和治疗学的方法和组合物。特别地，提供了一种用于将多能干细胞分化成KDR

摘要： 本发明涉及一种用于检测分化的造血细胞的方法，其包括以下步骤：a)在支持物上以1‑1000个细胞的组分离未分化的造血干细胞，b)通过提供包含生长因子的细胞培养基使分离的细胞增殖以形成分化的造血细胞的细胞集落，c)使所述细胞集落与一种或多种标记缀合物接触，所述标记缀合物包含至少一个检测部分和至少一个针对CD14、CD235a和CD15的抗原识别部分，d)检测用所述标记缀合物标记的细胞集落中分化的造血干细胞的相对量。

摘要： 本发明涉及一种用于产生间充质干细胞(MSC)的方法，所述方法包括在含氧量正常的条件下在包含LiCl和FGF2但不包含PDGF的间充质集落形成培养基(M‑CFM)中培养原始中胚层细胞持续足以形成间充质集落的时间，和贴壁培养所述间充质集落以产生所述MSC，其中相对于不在所述M‑CFM中产生的MSC，所述MSC具有卓越的T细胞免疫抑制特性。本发明还涉及通过所述方法产生的MSC，通过所述方法产生的MSC的群体，包含通过所述方法产生的MSC的治疗性组合物，M‑CFM和浓缩形式的M‑CFM，以及所述MSC或群体在治疗疾病中的方法和用途。

摘要： 本公开一般涉及可用于细胞和组织生物学和治疗的组合物和方法。具体地，提供了用于将多潜能细胞分化成内皮集落形成细胞‑状细胞(ECFC‑状细胞)的体外方法。提供了纯化的NRP‑1+CD31+ECFC‑状细胞的人细胞群，其中群中的至少一些细胞具有高增殖潜力。提供了使用本公开的细胞群治疗和测试试剂筛选方法。

摘要： 本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及的是一种解冻后脐带血造血干细胞活率和集落形成能力的检测方法。本发明通过添加脐带血造血干细胞稀释液提高解冻后脐带血造血干细胞活率和集落形成能力，该脐带血造血干细胞稀释液由右旋糖苷‑40和人血白蛋白按体积比4：1组成。同时，本发明还提供了一种解冻后脐带血造血干细胞活率和集落形成能力的检测方法，该方法可以稳定检测过程中细胞的生理状态，从而获得更加准确可靠的干细胞活率和集落形成能力检测结果。

摘要： 本发明涉及一种用于产生间充质干细胞(MSC)的方法，所述方法包括在含氧量正常的条件下在包含LiCl和FGF2但不包含PDGF的间充质集落形成培养基(M‑CFM)中培养原始中胚层细胞持续足以形成间充质集落的时间，和贴壁培养所述间充质集落以产生所述MSC，其中相对于不在所述M‑CFM中产生的MSC，所述MSC具有卓越的T细胞免疫抑制特性。本发明还涉及通过所述方法产生的MSC，通过所述方法产生的MSC的群体，包含通过所述方法产生的MSC的治疗性组合物，M‑CFM和浓缩形式的M‑CFM，以及所述MSC或群体在治疗疾病中的方法和用途。

摘要： 本公开一般涉及可用于细胞和组织生物学和治疗的组合物和方法。具体地，提供了用于将多潜能细胞分化成内皮集落形成细胞‑状细胞(ECFC‑状细胞)的体外方法。提供了纯化的NRP‑1+CD31+ECFC‑状细胞的人细胞群，其中群中的至少一些细胞具有高增殖潜力。提供了使用本公开的细胞群治疗和测试试剂筛选方法。

摘要： 公开了体外产生和扩增人血管瘤集落形成细胞的方法，以及扩增和利用所述细胞的方法。所述方法允许大量生产血管瘤集落形成细胞及其衍生细胞，例如造血细胞和内皮细胞。通过所述公开方法获得的细胞可用于各种研究、临床和治疗用途。

摘要： 公开了体外产生和扩增人类血管瘤集落形成细胞和非移植血管瘤细胞的方法，以及扩增和利用所述细胞的方法。所述方法允许大量生产血管瘤集落形成细胞、非移植血管瘤细胞及其衍生细胞，例如造血细胞和内皮细胞。通过所述公开方法获得的细胞可用于各种研究、临床和治疗用途。人类非移植血管瘤细胞是一种与成血管细胞和人类血管瘤集落形成细胞相关但是不同的新的祖细胞群。本发明还提供了含有血管瘤集落形成细胞、非移植血管瘤细胞或其分化形式的组合物、制剂和溶液。所述组合物、制剂和溶液包括冷藏制剂和基本上纯化的制剂、以及与相关的能够移植入骨髓的成血管细胞祖细胞类型相组合而配制的混合组合物。

摘要： 本实用新型提供了一种应用于克隆集落形成实验的图像记录装置，包括刚性主体和拍摄组件，所述刚性主体内设有竖向光通道，所述光通道的底部嵌有光源，所述光通道的顶部覆盖有光半透膜，所述拍摄组件位于刚性主体的上方，所述拍摄组件的成像平面与刚性主体的顶部平面平行，所述拍摄组件包括拍摄镜头，所述拍摄镜头位于拍摄组件的靠近所述光半透膜的一侧，所述拍摄镜头方向向下，与刚性主体的顶部平面垂直。本实用新型通过将拍摄组件固定在刚性主体的上方，无需手持，固定稳定，拍摄效果好。