亲和色谱

摘要： 利用抗冻蛋白AFP的冰结合特性和Mxe GyrA内含肽的可控自切割特性,构建一种以冰为纯化介质,能够可控自切割的纯化标签。以谷胱甘肽硫转移酶(GST)为对象研究其可行性,采用重叠延伸PCR技术和酶切连接技术构建表达载体pET 24a-GST-Mxe GyrA-linker-AFP,在大肠杆菌中成功可溶表达后,利用冰作为吸附介质从细胞破碎上清液中一步分离出融合蛋白GST-Mxe GyrA-linker-AFP。冰融化后,加入终浓度40 mmol/L二硫苏糖醇缓冲液,诱导内含肽N端发生断裂反应形成Mxe GyrA-linker-AFP标签和GST的混合物,再次利用冰吸附去除标签,得到目的蛋白。

摘要： 蛋白质泛素化是真核生物最普遍、最复杂的翻译后修饰方式之一,在细胞的信号转导、生长、发育、代谢等生命过程中发挥着重要作用.泛素化过程的失调则与神经退行性疾病、炎症反应、癌症等重大疾病的发生发展密切相关.分析和研究蛋白质泛素化的结构与功能,可望为认识生命、探索疾病调控内在规律和发现新的诊断策略提供重要信息.生命体系的高度复杂性,泛素化修饰位点、结构类型的多变和多样性,时空动态变化等特点给蛋白质泛素化分析研究带来了巨大的挑战.亲和分离以其高选择性成为泛素化蛋白质结构与功能研究的有力工具.免疫亲和分离法基于抗原-抗体相互作用,是最为经典的分离分析方法,已广泛应用于泛素化蛋白质或肽段的富集分离.源于天然泛素受体的泛素结合结构域(ubiquitin binding domains,UBDs)可与泛素或多聚泛素链相互作用.

摘要： 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情的爆发给世界公共卫生安全带来前所未有的挑战.随着新型冠状病毒(SARS-CoV-2)相关研究的不断深入,众多分析检测技术相继被应用,推动了病毒检测、疫苗和创新疗法的研发,从而使疫情早日得到控制.分离技术作为生命科学、医学、药学领域的关键技术,操作简单,分离效率高,选择性强,在新型冠状病毒的分离、检测、诊疗及防疫中起到不可替代的作用.该文以SARS-CoV-2或COVID-19为关键词在ISI Web of Science中进行主题检索,归纳了2020年度新型冠状病毒相关的研究论文,简要介绍主要的研究方向,并对国际顶级学术期刊Nature,Science,Cell的论文发表情况进行了统计.通过检索影响因子较高的期刊,综述了新型冠状病毒研究中主要应用的分离技术,并从亲和色谱和尺寸排阻色谱、液相色谱、磁珠分离、离心、微纳分离以及电泳6个方面进行说明.综述统计了亲和色谱和尺寸排阻色谱纯化的病毒相关蛋白,并介绍了其在新型冠状病毒传播、感染机制以及药物筛选中的应用;介绍了液相色谱对病毒候选药物评估以及复杂基质中单一成分的鉴定;介绍了磁珠分离在细胞分离、核酸提取和免疫学检测中的应用;介绍了离心对病毒颗粒、细胞以及血清的分离;介绍了微纳分离结合其他技术以实现病毒蛋白的高灵敏检测;简要介绍了电泳在聚合酶链式反应(PCR)产物分析中的应用.该文综述了2020年度新型冠状病毒研究和防疫检测中分离技术的应用情况,分析了分离技术在新型冠状病毒检测中发挥的作用,旨在为从事分离研究的科研工作者提供一些参考.

摘要： 蛋白质糖基化是蛋白质最重要的翻译后修饰之一,糖基化过程的失调或紊乱与癌症、炎症性疾病、神经系统疾病等密切相关.分析和研究蛋白质糖基化的结构与功能,有望为探索疾病发生的分子机制、开发新的诊断依据和控制治疗用生物药物的质量提供重要信息.然而生物样品中糖基化蛋白质相对丰度低,样品基质复杂,故而适宜的分离技术必不可少.亲和技术具有良好的专一性和灵敏度,可有效实现蛋白质的分离富集,成为糖基化蛋白质结构与功能研究的有力工具,并在近期得到发展.本文介绍亲和分离技术在蛋白质糖基化修饰分析中的应用进展.

摘要： 针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液。为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化。结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性纳米抗体分离效果较好,目的蛋白产量超过1 mg/L,纯度可达到97%。同时,anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体能够与细胞表面两个抗原特异性结合,增强IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC)对胰腺癌细胞株AsPC-1的杀伤能力,为其后续体内药效学评价奠定了基础。

摘要： 抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白,在疾病治疗和检测方面应用前景广阔.目前抗体的分离纯化是其生产的瓶颈.高选择性的亲和色谱技术在抗体纯化过程中发挥着越来越重要的作用,而配基的高通量筛选和设计是亲和色谱技术应用的关键因素.短肽是一种常见的亲和配基类型.本文根据近年来国内外抗体亲和肽配基的研究情况,综述了抗体亲和肽配基的高通量筛选和理性设计方法,重点介绍其作用机理、发展现状以及目前存在的主要问题.最后展望了短肽配基仿生设计技术.

摘要： 高分子类型MONOLITH材料(也称整体柱,连续床)是近些年来发展迅速的一种新型的以高分子为基质的整体型多孔材料,由于其内部独特的三维连续相互贯通的多孔结构,在诸多应用领域越来越受到研究者的关注,尤其被认为是分离过滤领域的一个历史性突破.与硅基质MONOLITH材料相比,高分子类型的MONOLITH材料具有制备工艺简单、生物相容性好、化学稳定性高和表面化学性质易调控等特点,因此作为亲和色谱的固定相在生物大分子的分离分析上具有更大的优势.本综述重点总结了高分子类型MONOLITH材料的制备方法及其最新研究进展,并论述了近5年来其作为亲和色谱固定相用于分离生物大分子的应用进展.

摘要： 采用反相悬浮再生法制备6 g/100 mL的琼脂糖微球,采用环氧氯丙烷对琼脂糖微球进行二次交联,并进行染料配体汽巴蓝F3GA的偶联,得到一种新型活性Blue Beads 6FF微球.通过傅里叶变换红外光谱、扫描电子显微镜、压力流速曲线、溶胀率、泄漏率和孔隙率等对微球物理性能进行表征.结果发现,微球球形度较好,粒径大小均一,平均粒径为56.37 μm左右,具有较高的孔隙率、溶胀率及广范围的pH值稳定性,且耐压能力强.以黑芸豆凝集素为目标蛋白,通过Langmuir吸附等温式拟合,结果表明该填料对黑芸豆蛋白有较高的吸附量(19.7 mg/mL),微球吸附性能良好,可实现对凝集素蛋白的快速分离和纯化.

摘要： 亲和色谱是依靠键合在固定相上的配位体与生物活性目标分子间特异性的识别与可逆的亲和作用,实现生物分子选择性分离的一种液相色谱分析方法.该方法具有高选择性、高回收率等特点,可同时进行色谱分离及活性筛选,广泛应用于活性产物的筛选、分离和纯化.本文简述了生物特效亲和色谱、印迹分子亲和色谱、染料配基亲和色谱等几种常用亲和色谱技术,综述了近年来亲和色谱在手性药物拆分、天然药物中活性组分筛选、活性蛋白分离纯化及药物-蛋白相互作用研究中的应用,并对其应用前景进行了展望.%Affinity chromatography (AC)is a type of liquid chromatography that makes use of biological-like interactions for separation and specific analysis of bioactive components. It has been widely used as a high-throughput screening method for the separation,screening and purification of the target molecules from complex samples with advantages such as high selectivity and high recovery efficiency.This article summarizes the biological effects of affinity chromatography, molecular imprinting chromatography, and dye ligands affinity chromatography.The review also encompasses the application of AC in the separation of chiral drugs,screening of active components,purification of target protein,and mechanism of the drug-protein interaction.Moreover,the prospects of its applications are also discussed.

摘要： 生物活性化合物作用靶点的确认是化学生物学和药物开发中的关键问题之一.随着科技的进步与发展,许多靶点鉴别的方法和技术已经被报道.目前的靶点鉴别方法主要有两大类:亲和色谱为基础的直接法,通过检测药物与其靶点的结合来鉴别靶点;非亲和为基础的间接法,通过生理学反应或生物化学标记而推断药物的靶点或作用途径.本文主要围绕这两类靶点鉴别方法进行综述.

摘要： 本文介绍了核酸适配体亲和色谱在小分子、蛋白质和细胞的分离和分析中的应用，从固定化方法、制备效率、检测方法祸联等角度讨论各个研究的特点，对核酸适配体亲和色谱的研究现状和应用前景进行综述。

摘要： 利用喹诺酮类(QNs)单克隆抗体和磺胺类(SAs)单克隆抗体制备了可以同时分离净化J3种QNs和6种SAs的免疫亲和色谱(IAC)柱。QNs和SAs的动态柱容量分别为1402～2464ng/mL gel和1834-2398ng/mL gel。IAC柱重复使用15次后,柱容量仍能达到初始柱容量的35％～37％,回收率和样品的净化效果无明显变化,可以满足残留分析要求。建立了鸡、猪肌肉组织中13种QNs和6种SAs多类残留检测的IAC—LC-MS/MS方法。动物肌肉组织样品提取后IAC柱净化,LC-MS/MS测定。方法的平均回收率为72.6％-107.6％,日内变异系数为2.6％-11.3％,日间变异系数为3.3％-15.4％。QNs的检测限为0.1～0.9ng/g,定量限为0.5～3.0；SAs的检测限为0.3～0.6ng/g定量限为1.0-2.0ng/g。该方法可以用于动物肌肉组织中QNs和SAs的残留检测。

摘要： 对一种崭新的生物大分子分离技术——以染料为配基的亲和色谱技术做了全面的评述，介绍了染料的种类，结构以及其作为配基的机理，概括了国内外染料亲和色谱理论研究的进展，并对染料亲和色谱技术进行了展望。

摘要： 本研究旨在以比较蛋白质组学的策略从人肺腺癌细胞株中发现与耐药有关的泛素化蛋白。以亲和色谱从A549 细胞和A549/DDP 细胞裂解液中捕获、富集泛素化蛋白质后，通过 1D SDS PAGE 分离，选取45-85kDa 的差异表达条带，胰蛋白酶酶解后，进行HPLC-CHIP-MS/MS 分析，鉴定了11 种蛋白质，其中，有7 种是可能发生了单-泛素化或多-泛素化的底物蛋白质，4 种是E3 泛素蛋白连结酶相关蛋白。以Western blotting 和Confocal laser scanning microscope 进行验证的结果表明，RNF6、LRSAM1、TRIM25 三种E3 泛素蛋白连结酶在A549 细胞中的表达均明显低于在A549/DDP 细胞中的表达；顺铂（DDP）作用后，在两种细胞株中，三者的表达均明显下调，而在A549/DDP 细胞中，DDP 作用后的表达下调幅度较小。底物蛋白PKM2 在A549 细胞中的表达明显高于在A549/DDP 细胞中的表达；DDP 作用后，PKM2 在A549 细胞中的表达上调，在A549/DDP 细胞中的表达下调。研究工作从蛋白质水平提示，在人肺腺癌细胞株中，耐药与泛素化过程的改变密切有关。

摘要： 本文构建了GST-hDII1融合蛋白,利用带有GST固定相配基的AFC柱进行了目标蛋白柱上复性与同时纯化。将包涵体变性抽提液直接进样至已用100％流动相A平衡过的色谱柱中,经各种色谱条件下优化后,采用梯度洗脱目标蛋白在亲和柱上的保留。是目标峰的SDS-PAGE电泳分析,其纯度可以达到96％。

摘要： 天然产物与人类健康关系密切。从天然产物中筛选发现新型结构的活性化合物是天然产物化学研究的重点领域。新型结构的活性天然化合物仍是创新药物先导化合物的主要来源之一。天然产物研究者们正在努力寻找有效的新方法,对天然资源样品进行快速分析,在微克级水平高效、快速地鉴定具有结构多样性的天然化合物结构。LC/MS(LC/MSn)、LC/NMR、LC/NMR/MS、LC/SPE/NMR/MS等色谱一波谱联用技术,在天然产物研究中显示了巨大的威力,是对天然产物进行化学筛选的有效手段,能够达到快速识别和锁定并有针对性地分离获取新型结构化合物的目的。将亲和色谱法与色谱一波谱联用技术结合起来,即将活性筛选与化学筛选在线集成应用,可以大大提高活性天然产物发现的效率和几率,加快药物先导化合物和创新药物的研制速度。

摘要： 本研究根据含His标签重组蛋白质的结构特点,设计了一种新的蛋白质可逆的定向固定化方法,通过金属镍离子将蛋白固定化,蛋白活性保持较好,使得药物和蛋白质的测定结果更加准确,并且可以通过含有咪唑的溶液将失活后的蛋白洗脱下来,使填料再生,重新结合蛋白,进行新的实验.本研究将β2-肾上腺素受体可逆的连接在镍离子的填料上,并用相应的药物对其进行了实验.

摘要： 本研究根据含His标签重组蛋白质的结构特点,设计了一种新的蛋白质可逆的定向固定化方法,通过金属镍离子将蛋白固定化,蛋白活性保持较好,使得药物和蛋白质的测定结果更加准确,并且可以通过含有咪唑的溶液将失活后的蛋白洗脱下来,使填料再生,重新结合蛋白,进行新的实验.本研究将β2-肾上腺素受体可逆的连接在镍离子的填料上,并用相应的药物对其进行了实验.

摘要： 本研究根据含His标签重组蛋白质的结构特点,设计了一种新的蛋白质可逆的定向固定化方法,通过金属镍离子将蛋白固定化,蛋白活性保持较好,使得药物和蛋白质的测定结果更加准确,并且可以通过含有咪唑的溶液将失活后的蛋白洗脱下来,使填料再生,重新结合蛋白,进行新的实验.本研究将β2-肾上腺素受体可逆的连接在镍离子的填料上,并用相应的药物对其进行了实验.

摘要： 本研究根据含His标签重组蛋白质的结构特点,设计了一种新的蛋白质可逆的定向固定化方法,通过金属镍离子将蛋白固定化,蛋白活性保持较好,使得药物和蛋白质的测定结果更加准确,并且可以通过含有咪唑的溶液将失活后的蛋白洗脱下来,使填料再生,重新结合蛋白,进行新的实验.本研究将β2-肾上腺素受体可逆的连接在镍离子的填料上,并用相应的药物对其进行了实验.

摘要： 径向色谱柱用金属螯合亲和膜色谱介质的合成方法是利用甲基丙燃酸环氧丙酯进行自聚反应制得聚合物后与棉纤维进行接枝反应，然后与亚氨二乙酸进行开环反应，最后过渡金属离子进行螯合反应。该方法利用的原料便宜易得，反应条件简单，易控制，制得的螯合介质的结合容量大。应用该介质填充的径向色谱柱对人血清白蛋白、过氧化氢酶、尿激酶等生物大分子进行分离纯化处理，具有处理量大、流速快、纯化倍数高、便于线性放大等优点。

摘要： 本发明提供一种在固定有配体时发挥高的动态结合容量，而且，具有优异的防污性且杂质难以非特异吸附的固相载体和亲和精制用载体。一种固相载体，是具有可固定配体的官能团的固相载体，其特征在于，具有如下基团：具有亚磺酰基、硫醚基、氧基或亚氨基与羟基、硫醇基、氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或烷酰基的基团。

摘要： 本发明的课题在于提供对丝氨酸蛋白酶或者嗜热菌蛋白酶具有耐性且具有免疫球蛋白结合活性、可适合作为亲和配体使用的蛋白质。本发明的一个实施方式是具有2个以上的来源于蛋白A的E、D和A结构域的氨基酸序列中的任一个的结构域、在该结构域的至少一个氨基酸序列中包含1个以上的赖氨酸且C末端的赖氨酸缺失或者被替换的、对免疫球蛋白具有亲和性的蛋白质；或者具有2个以上的来源于蛋白A的B、C和Z结构域中的任一个的结构域、在该结构域的至少一个氨基酸序列中包含1个以上的赖氨酸且第4位的赖氨酸和C末端的赖氨酸缺失或者被替换的、对免疫球蛋白具有亲和性的蛋白质。

摘要： 径向色谱柱用金属螯合亲和膜色谱介质的合成方法是利用甲基丙燃酸环氧丙酯进行自聚反应制得聚合物后与棉纤维进行接枝反应,然后与亚氨二乙酸进行开环反应,最后过渡金属离子进行螯合反应。该方法利用的原料便宜易得,反应条件简单,易控制,制得的螯合介质的结合容量大。应用该介质填充的径向色谱柱对人血清白蛋白、过氧化氢酶、尿激酶等生物大分子进行分离纯化处理,具有处理量大、流速快、纯化倍数高、便于线性放大等优点。

摘要： 本发明公开了一种以苯硼酸修饰介孔二氧化硅为填料的硼亲和柱富集‑液相色谱‑串联质谱检测唾液酸糖基酪蛋白糖巨肽的方法，属于食品分析检测领域。本发明方法包括以下步骤：(1)样品制备；(2)硼亲和柱富集净化；(3)液相色谱‑串联质谱检测。本发明利用苯硼酸对酪蛋白糖巨肽中丝氨酸和苏氨酸残基上特殊糖基‑唾液酸的亲和特性，通过改变pH调控带有唾液酸糖基的酪蛋白糖巨肽的吸附和洗脱，结合液相色谱串联质谱的高灵敏度和精确度，能对苯丙酮尿症特殊医学用途配方食品复杂基质中的带有唾液酸糖基的酪蛋白糖巨肽进行定性和定量分析。

摘要： 本发明公开了一种固定化金属离子亲和色谱填料、色谱柱及其制备方法。将钾水玻璃、γ‑缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷和水溶解的三磷酸腺苷二钠混合搅拌，然后加入用水溶解的甲酰胺搅拌获得反应液，反应固化获得固体材料，然后洗涤，获得固定化金属离子亲和色谱柱填料。本发明通过一步反应法制备的ATP修饰的固定化金属离子亲和毛细管整体柱，制备步骤简单快速、重复性和良品率高、制备成本低。仅需将原料混合均匀后经历一次烘烤反应便可得到，其物理化学稳定性好，多次使用后具有较好的重现性。

摘要： 本发明公开了一种聚合物和色谱柱以及进行亲和色谱法或手性色谱法的方法，该聚合物具有采用以下方法得到的侧基：(i)通过可逆加成-断裂链转移聚合、过渡金属调节的活性自由基聚合和/或原子转移自由基聚合，将烯属烃不饱和单体聚合以生成聚合物中间体，该烯属烃不饱和单体为用(a)由保护基任选保护的叠氮基、或(b)由保护基任选保护的炔基官能化的；(ii)在存在保护基时，从所述聚合物中间体上除去全部数量的保护基的至少一部分；以及(iii)将所述聚合物中间体与分别用(a)炔基或(b)叠氮基官能化的至少一个侧基部分反应，由此所述炔基和叠氮基反应而将所述侧基附着到所述聚合物上，所述侧基为一种或多种糖。

摘要： 本发明公开了一种固定化金属离子亲和色谱填料、色谱柱及其制备方法。将钾水玻璃、γ‑缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷和水溶解的三磷酸腺苷二钠混合搅拌，然后加入用水溶解的甲酰胺搅拌获得反应液，反应固化获得固体材料，然后洗涤，获得固定化金属离子亲和色谱柱填料。本发明通过一步反应法制备的ATP修饰的固定化金属离子亲和毛细管整体柱，制备步骤简单快速、重复性和良品率高、制备成本低。仅需将原料混合均匀后经历一次烘烤反应便可得到，其物理化学稳定性好，多次使用后具有较好的重现性。

摘要： 本发明公开了一种金属氧化亲和色谱磁性介孔纳米材料及制备方法与应用，该纳米材料为Fe3O4@mSiO2@TiO2，通过溶胶‑凝胶法在磁性四氧化三铁纳米粒表面引入合适孔径的介孔二氧化硅层，再将二氧化钛层包覆在磁性介孔纳米材料表面，实现了在同一体系中蛋白质的酶解和磷酸化肽的富集全过程，并结合质谱，建立了非标记磷酸化蛋白质组定量分析方法，能够用于复杂样品中磷酸化蛋白的定量。本发明的金属氧化亲和色谱磁性介孔纳米材料具有大表面积、低检测限和高特异性捕获磷酸化肽特点，可与非标记定量法相结合，对磷酸化蛋白质进行定量研究，显示了其在磷酸蛋白质组研究中具有巨大潜力。

摘要： 本发明提供了从结合了单克隆抗体的蛋白A亲和色谱柱中洗脱单克隆抗体的方法，其包括：a)使亲和色谱柱与包含聚(乙二醇)聚合物的洗脱缓冲液接触；b)收集从步骤(a)获得的一种或多种含有单克隆抗体的级分；c)合并从步骤(b)获得的级分以形成洗脱产物池。